宁夏回族自治区自然科学基金(NZ11125)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：裴秀英高玉婧姚青杨怡张茜更多>>
- 相关机构：宁夏医科大学宁夏自治区人民医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 迁移侵袭抑制蛋白MIIP基因K167E位点突变体的构建和表达
- 2014年
- 目的构建人迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)蛋白K167E突变体的原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP(K167E)并进行表达和纯化,为MIIP的后续功能研究提供有效工具。方法以pGEX-4T-1-MIIP重组质粒为模板,PCR扩增得到人MIIP基因(K167E)突变体的cDNA全长,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中诱导表达,纯化获得GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结果酶切鉴定和测序结果显示,pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体构建成功。经诱导表达及纯化后,成功获得的GST-MIIP(K167E)融合蛋白。结论成功构建了pGEX-4T-1-MIIP(K167E)突变体表达载体,并获得了GST-MIIP(K167E)融合蛋白。
- 高玉婧马晓东芦晓红姚青裴秀英杨怡李建宁张茜孙玉宁
- 关键词：融合蛋白
- 迁移侵袭抑制蛋白MIIP的GST融合蛋白表达及生物学活性鉴定
- 2013年
- 目的构建人MIIP蛋白与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及生物学活性鉴定。方法 RT-PCR扩增得到人MIIP基因全长编码序列,采用重组DNA技术将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,构建获得重组原核表达载体pGEX-4T-1-MIIP,经酶切鉴定及测序验证完全正确后,将其转化至大肠杆菌BL21细胞中,用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经纯化获得目的蛋白,用Western blot鉴定所得融合蛋白。结果构建了pGEX-4T-1-MIIP原核表达载体,在大肠杆菌中表达获得了GST-MIIP融合蛋白,经Glutathione Agarose纯化和Western blot检测,证实所得GST-MIIP融合蛋白具有生物学活性。结论成功获得了有生物学活性的GST-MIIP融合蛋白。
- 高玉婧吕叶裴秀英孙玉宁杨怡姚青张茜李建宁
- 关键词：原核表达融合蛋白
