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国家高技术研究发展计划(2001AA213081): 作品数：74 被引量：287H指数：8; 相关作者：张涌安志兴郑月茂李向臣曹鸿国更多>>; 相关机构：西北农林科技大学武汉科技大学华南师范大学更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划湖北省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>

人骨形成蛋白2基因的克隆及序列测定被引量：1: 2005年; 　为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测序。结果表明,获得的基因片断为hBMP-2全编码序列,同源性为99.9%。; 华松贾战生武浩扈苯荃杨瑞锋张涌; 关键词：人骨形成蛋白2 RT-PCR 克隆

应用RT-nested PCR检测猪传染性胃肠炎病毒被引量：11: 2005年; 　根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的诊断方法。结果表明,RT-nestedPCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此方法简单省时、灵敏性高,可以作为检测RNA病毒的一种分子生物学方法。; 王玉洁刘金龙彭树英杨瑞锋张涌; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR PCR M基因

维生素E提高牛孤雌胚胎的体外发育研究被引量：4: 2005年; 体外生产的牛孤雌胚胎用添加了VE,VE+VC的CR1aa培养液,置38.5℃、5%CO2,饱和湿度的培养箱中进行培养。通过荧光染料Hoechst 33342对胚泡进行荧光染色,检测孵化囊胚的总细胞数。结果表明,当培养基中添加100μmol/L VE时,与对照组相比,扩张囊胚发育率和胚泡的细胞总数显著提高(P<0.01);当VE与VC联用时,发育到早期囊胚、扩张囊胚、孵化囊胚的数量和胚泡的总细胞数均低于单独使用VE的培养组。; 李瑞文李向臣安志兴张涌; 关键词：VITAMIN 孤雌胚体外发育

精子提取液对绵羊同异种核移植重构胚的激活效果被引量：2: 2008年; 应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用,并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明,绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚,每一重构胚注射3 pL浓度为5 mg/mL的绵羊精子提取物,对同种和异种胚的发育效果均为最好,并显著高于其他试验组(P<0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著(P>0.05)。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响,与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著(P>0.05),但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著(P<0.05)高于化学激活法的细胞数(72.4 vs 65.2)。; 赛务加甫彭新荣李向臣安志兴郑月茂权富生张涌; 关键词：绵羊重构胚

人表皮生长因子的基因克隆与原核表达被引量：6: 2004年; 　采用RT-PCR方法从人胎盘组织中扩增出hEGF基因,将其分别连入表达载体pGEX-4t-1(+)和pGEX-6p-1(+)质粒中,并转化入BL21-CodonplusTM中,解决了大肠杆菌密码子偏爱性问题,不需附加程序就可以编码稀有密码子的重组基因。SDS-PAGE结果证明,pGEX-4t-1(+)-hEGF和pGEX-6p-1(+)-hEGF分别在大肠杆菌BL21(DE3)-CodonplusTM-RP和BL21(DE3)-CodonplusTM-RIL中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白的30%左右。; 王保莉吴方丽张涌郭蔼光; 关键词：表皮原核表达质粒工具酶 PCR引物

克服小鼠早期胚胎体外培养发育阻滞的研究被引量：5: 2006年; 为探讨不同培养基及共培养对克服小鼠早期胚胎体外发育阻滞的影响，用不同成分组成的5种常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养，后以KSOM作为基础培养基，KSOMFBS为对照，分别与小鼠输卵管上皮细胞（MOEC）和卵丘细胞（CC）进行共培养，观察从2细胞发育到4细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果发现5种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30．5％～43．5％，差异不显著。KSOM组囊胚率为40．9％，显著高于其他各组（27．9％～30．0％）。共培养后，各组中克服发育阻滞的胚胎数和囊胚数均有显著提高，其中添加胎牛血清组4细胞胚胎数和囊胚数显著高于不添加组，输卵管上皮细胞组显著高于卵丘细胞组。结果显示共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显，添加胎牛血清效果明显好于不添加，输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。; 山灵王勇胜高立功丛银峰张涌; 关键词：小鼠早期胚胎体外培养发育阻滞

胎鼠中枢神经系统神经干细胞的分离培养和诱导分化: 为了进一步完善神经干细胞（Neural Stem Cells,NSCs）体外分离培养和诱导分化体系,本实验选取胚龄E14～15的小鼠胚胎,对胎鼠中枢神经系统（Central Nervous System,CNS）大脑皮质...; 赵慧英温叶飞曹洪国华松尹宝英张涌; 关键词：NSCS 多巴胺能神经元; 文献传递

磷酸二酯酶抑制剂对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响被引量：5: 2007年; 哺乳动物有腔卵泡中的卵母细胞在体外会自发恢复减数分裂,适当延迟减数分裂的自发恢复,能促进核与胞质成熟的同步化,有利于后续胚胎的发育。本试验研究了磷酸二酯酶3(PDE 3)特异性抑制剂milrinone对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,milrinone抑制山羊卵母细胞体外成熟的时间为6 h,其最佳剂量为100μmol/L,经milrinone处理体外培养28 h成熟的山羊卵母细胞用于孤雌激活,能显著提高孤雌激活胚的卵裂率及囊胚率。说明成熟培养液中添加适当剂量的milrinone,能显著提高体外成熟的山羊卵母细胞的质量。; 马利兵华松曹俊伟杨丽张涌; 关键词：磷酸二酯酶抑制剂卵母细胞体外成熟山羊

公鸭、公鸡精子对在液氮中低温冷冻保存耐受力的比较研究被引量：1: 2006年; 比较公鸭和公鸡精子经低温冷冻保存后存活率、顶体完整率方面的差异。结果表明,公鸭冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体完整率都不同程度地高于相同类型的公鸡冷冻精液,但差异均未达到显著水准(P>0.05)。; 刘建忠周丽芳朱艳君张一玲; 关键词：冷冻保存顶体完整率

bcl-2/EGFP融合基因真核表达质粒的构建被引量：2: 2004年; 　为深入研究bcl 2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响,应用基因重组手段,根据表达载体pEGFP C1上的多克隆位点和bcl 2基因序列设计了1对引物,对含有bcl 2基因的质粒pWB bcl进行了PCR扩增,得到了708bp的目的片断。将其克隆到pMD18 Tvector,筛选阳性克隆并测序,序列分析表明,其与原初序列同源性达99%。将bcl 2插入到载体启动子下游,与报告基因绿色荧光蛋白(EnhancerGreenFluorescentProtein,EGFP)融合,经限制性内切酶酶切和PCR鉴定,证明Bcl 2/EGFP真核表达质粒构建成功。; 彭树英安志兴张涌; 关键词：BCL-2 绿色荧光蛋白真核表达质粒

国家高技术研究发展计划(2001AA213081)

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