国家自然科学基金(31101457)
- 作品数：2 被引量：20H指数：2
- 相关作者：冯俊涛张兴吴华何军侯昌亮更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 辣根素的生物活性研究进展被引量：15
- 2013年
- 本文从医用和农用角度综述了辣根素的生物活性研究进展,尤其在农业领域的进展,主要概述了辣根素对仓储害虫、病原微生物、根结线虫以及杂草种子的生物活性。辣根素的农用活性具有广阔的市场前景,同时辣根素的主要成分烯丙基异硫氰酸酯的复配制剂是一个值得深入发掘的区域,其对有害生物熏蒸作用机理的深入研究,将为农业应用提供理论依据和技术支撑。
- 吴华冯俊涛何军张兴
- 关键词：辣根异硫氰酸酯熏蒸剂生物活性
- 玉米象线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ基因克隆与表达分析被引量：5
- 2016年
- 【目的】克隆辣根素可能的作用位点——细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ(COXⅢ)的全长cDNA,并对其进行序列分析及原核表达。【方法】在NCBI数据库中查找玉米象(Sitophilus zeamais)COXⅢ已知的部分序列,利用RT-PCR,结合RACE技术克隆获得玉米象COXⅢ全长序列;利用DNAMAN8.0、MEGA5.1、GENEDOC、Prot Param和Target P 1.1 Server等软件对该基因全长cDNA序列、系统进化关系、基本理化性质及其三维结构进行分析;将玉米象COXⅢ基因分别与载体p EASY-Blunt E1、pET28a、pET30a、p ET32a、pET42a连接,构建原核表达载体p EASY-Blunt E1-COXⅢ、pET28a-COXⅢ、pET30a-COXⅢ、p ET32a-COXⅢ、pET42a-COXⅢ并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同IPTG诱导浓度、温度以及时间内诱导融合蛋白表达,采用SDS-PAGE和Western blot(WB)对表达结果进行验证。【结果】获得的玉米象COXⅢ基因全长cDNA序列开放阅读框(ORF)为792 bp,编码263个氨基酸,编码的蛋白分子质量约为30 938.1 Da,理论等电点p I 6.51,预测分子式为C1492H2154N338O362S10,不稳定系数为34.49,总平均亲水系数为0.492,为疏水的稳定蛋白。系统发育树显示玉米象与鞘翅目象鼻虫科昆虫米象进化关系最近。原核表达结果表明,该蛋白在18℃、1 mmol·L-1 IPTG诱导24 h的条件下即能实现融合蛋白的表达,可溶性检测表明该蛋白主要以包涵体的形式存在;Western blot印迹检测证实大肠杆菌BL21(DE3)中表达了一个分子量约为62 k D的融合蛋白。【结论】成功从玉米象昆虫克隆得到COXⅢ全长cDNA序列,并实现了其编码蛋白的原核表达,可为后续探究玉米象COXⅢ功能和异硫氰酸酯类化合物对玉米象的作用机理提供理论依据。
- 侯昌亮王靖博李永强吴华马志卿冯俊涛张兴
- 关键词：玉米象RACE技术生物信息学原核表达
