吉林省世行贷款农产品质量安全项目(2011-Y05)
- 作品数：17 被引量：69H指数：6
- 相关作者：马红霞孔令聪刘树明裴志花唐艳更多>>
- 相关机构：吉林农业大学教育部中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：吉林省世行贷款农产品质量安全项目国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)的表达纯化及活性分析
- 2016年
- 为了研究家蝇几丁质结合蛋白(Md-CBPⅠ)在家蝇防御体系中的相关活性,采用PCR技术,对从鸡源沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选到的家蝇幼虫几丁质结合蛋白Ⅰ基因(Musca domestica chitin binding proteinⅠ,Md-CBPⅠ)进行扩增,并成功构建了重组表达质粒p ET-32a-Md-CBPⅠ,于大肠杆菌BL21(DE3)中得以高效表达,纯化并获得了MdCBPⅠ融合蛋白。进一步对该蛋白的亲和活性进行了研究,发现Md-CBPⅠ融合蛋白对几丁质以及纤维素均有一定的结合作用,且其对几丁质的结合作用相对较好。试验为家蝇几丁质结合蛋白生物学活性和免疫学活性的研究奠定了基础。
- 袁野闫恕张丹丹孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇原核表达
- 猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫抑制性消减文库的构建被引量：4
- 2013年
- 采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建猪肺炎支原体(Mycoplasma hyo-pneumonia,Mhp)诱导家蝇幼虫后产生差异表达基因的消减cDNA文库,并利用反向Northern杂交技术获得差异基因。结果表明,随机挑取的阳性克隆的大小均为200～750bp,通过斑点杂交技术共筛选出186个差异基因片段,对其克隆、测序及同源性分析后鉴定出20种编码蛋白的基因片段和21个无同源序列。家蝇幼虫经猪肺炎支原体诱导后产生与抗病原体相关的基因及大量的未知基因。
- 王东方张惠马红霞高云航段永杰王莹卞璐王艳芳
- 关键词：猪肺炎支原体家蝇抑制性消减杂交
- 抗菌肽在多领域应用的研究进展被引量：3
- 2014年
- 抗菌肽（antibacterial peptides）是生物体内免疫系统产生的一类抵抗外界病原体感染的多肽,是先天免疫的重要组成成分。抗菌肽能非特异性的抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫等病原体,并对肿瘤细胞、多重耐药菌也具有明显的杀伤作用,但不损伤体细胞,无毒副作用。近年来,人们从植物、昆虫、两栖类、水产类以及哺乳类动物甚至一些细菌中都发现了抗菌肽。
- 裴志花孙小宁王开陈绍辉马红霞
- 关键词：抗菌肽基因ANTIBACTERIAL水产类抗寄生虫病原体感染先天免疫
- 牛支原体致病机制研究进展被引量：10
- 2015年
- 牛支原体是引起牛呼吸系统疾病的主要病原之一,给养牛业造成了严重的经济损失。论文对近期国内外关于其致病机制的研究进展进行梳理,以期为牛支原体肺炎的防控提供参考。对牛支原体致病机制的研究可为研制有效的疫苗和新型绿色药物及其他防控途径提供理论依据,进而在临床上有效控制牛支原体引发的疾病。论文涉及三方面内容:一是牛支原体黏附蛋白的黏附作用;二是牛支原体在黏附基础上其代谢产物对宿主细胞的损伤和相关蛋白介导的宿主细胞凋亡;三是免疫学致病机制,包括黏附蛋白的免疫原性及免疫逃避机制、宿主的免疫应答及炎症损伤和宿主的抗炎反应及免疫抑制机制。
- 高铎孔令聪贾博岩王梓徐凤宇刘树明马红霞
- 关键词：牛支原体致病机制免疫学
- 家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2015年
- 对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。
- 孙小宁裴志花卞路张丹丹马红霞
- 关键词：家蝇克隆原核表达
- 家蝇幼虫溶菌酶1基因的克隆与真核表达及表达产物抑菌活性的检测被引量：2
- 2015年
- 采用PCR扩增获得家蝇溶菌酶1基因(Musca domesticalysozyme-1,MdL-Ⅰ),构建真核重组表达质粒pPIC9K-MdL-Ⅰ。将线性化的重组质粒电击转入巴斯德毕赤酵母感受态GS115细胞内。将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-Tris-SDS-PGAE检测表达产物的大小;经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MdL-Ⅰ获得高效表达,蛋白质的分子质量为14.2ku,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌、雏沙门菌均具有体外抑菌活性。本研究为利用毕赤酵母表达系统规模化生产具有抑菌活性的MdL-Ⅰ蛋白奠定了基础。
- 李文婷傅小蒙唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：巴斯德毕赤酵母分泌表达抑菌活性
- 家蝇幼虫防御素基因Mdd Ⅰ在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性鉴定
- 2015年
- 根据家蝇幼虫防御素基因(MddⅠ)序列,设计合成含有KpnⅠ和XbaⅠ酶切位点的特异性引物,PCR扩增出MddⅠ基因全长序列。克隆并测定序列后,构建真核表达质粒pGAPZαAMddⅠ,将其在毕赤酵母(P.pastoris)GS115中分泌表达,并对表达产物进行抑菌活性分析。结果表明,Mdd 1基因在P.pastoris如中成功表达,分子量约为10.3 kDa,抑菌结果显示MddⅠ基因的真核表达产物对猪源链球菌有抑制作用。该试验成功构建了表达MddⅠ基因的P.pastoris菌株,为进一步研究MddⅠ真核表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。
- 傅小蒙万玲唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇防御素P.PASTORIS
- 家蝇幼虫防御素基因MddⅠ的克隆与原核表达被引量：3
- 2013年
- 以猪肺炎支原体诱导家蝇幼虫的cDNA为模板,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)对MddⅠ基因进行扩增,对扩增产物测序和分析。构建重组表达质粒pET-32a-MddⅠ,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG对其诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果,MddⅠ基因全长475bp,其开放阅读框(ORF)276bp,编码91个氨基酸,编码蛋白的理论分子质量9.7ku,理论等电点(pI值)8.89,存在信号肽的剪切位点,亲水性较强且无明显跨膜区,α螺旋和不规则盘绕为其主要结构元件,β折叠散布在整个蛋白质中。具有Defensin-2家族保守区域,与GenBank中登录号为AY260152同源性最高,达78%。构建的重组表达质粒pET-32a-MddⅠ在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出分子质量约为25ku的蛋白质,与预期大小一致。结果表明,MddⅠ基因具有完整的开放阅读框,为新的家蝇防御素基因;MddⅠ基因在原核表达系统中的表达为进一步研究表达产物的生物学活性和免疫学活性奠定了基础。
- 万玲傅小蒙唐艳孙小宁裴志花刘树明马红霞
- 关键词：家蝇防御素原核表达
- 家蝇幼虫溶菌酶Ⅱ基因的克隆、表达及抑菌活性研究
- 2015年
- 以本实验室构建的鸡致病性大肠杆菌诱导家蝇幼虫抑制性消减杂交文库(SSH)为基础,对家蝇幼虫溶菌酶II基因(MdL-II)进行克隆,得到全长为532 bp的cDNA片段,其开放阅读框(ORF)与GenBank中登录号为HQ897688.1的MdL-II基因全序列同源性为95%。将MdL-II ORF序列插入到pET-32a(+)表达载体中成功构建重组质粒,其表达产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果显示约在34 ku处出现表达条带且与目的蛋白大小相符。当诱导温度为37℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L时可获得大量可溶性Trx-MdL-II融合蛋白,纯化融合蛋白并进一步检测该蛋白的抑菌活性,结果表明融合蛋白对大肠杆菌和链球菌均有抑菌作用,且对大肠杆菌的抑菌作用相对较强。
- 邵清唐艳万玲孔令聪裴志花马红霞
- 关键词：家蝇幼虫克隆表达蛋白纯化
- 家蝇幼虫抗菌蛋白基因AS566在毕赤酵母中的表达及产物抑菌活性检测
- 2016年
- 为采用巴斯德毕赤酵母系统表达家蝇幼虫抗菌蛋白AS566基因,并对其抑菌活性进行初步确证。以分子克隆法构建重组表达质粒pGAPZαA-AS566,将其线性化后电击转化至毕赤酵母GS115感受态细胞,在GAP启动子调控下,于30℃诱导表达,SDS-PAGE检测结果显示表达产物的分子质量约为43.5 ku,与预期结果一致。采用管碟法对表达产物的抑菌活性进行检测,结果显示该表达产物对鸡源沙门菌和猪源金黄色葡萄球菌的生长具有抑制作用。本研究为进一步研究家蝇幼虫抗菌蛋白的抑菌机制奠定了基础。
- 闫恕李文婷丁士雯袁野唐艳孔令聪裴志花刘树明马红霞
- 关键词：毕赤酵母真核表达抑菌活性
