贵州省科技厅社会发展攻关项目(SY[2011]3038)
- 作品数：9 被引量：26H指数：4
- 相关作者：周必英周泠杨凤娇刘晖江楠更多>>
- 相关机构：遵义医学院遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 寄生虫疫苗免疫途径的研究现状被引量：2
- 2014年
- 寄生虫病是一种呈世界性分布、种类繁多、危害严重的重要疾病.目前防治寄生虫病的方法主要是健康教育、化疗、环境改造等综合防治措施相结合,其中抗寄生虫药一直是主要的防治手段.然而,随着耐药性和人类健康等问题的出现,寄生虫疫苗的研制已成为控制寄生虫病综合防治措施的重要补充手段.用不同的方法接种寄生虫疫苗,其保护效果不尽相同.该文就几种常见的寄生虫疫苗免疫途径研究现状作一综述.
- 万小波周必英
- 关键词：寄生虫疫苗免疫途径
- 猪带绦虫重组抗原研究进展被引量：14
- 2014年
- 猪囊尾蚴病(Cysticercosis cellulosae)俗称囊虫病(Cysticercosis)是由猪带绦虫(Taenia solium,Ts)中绦期幼虫猪囊尾蚴(cysticercus cellulosae)引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。该病呈全球性分布,主要流行于中非、南非、拉丁美洲、东亚和南亚等地区。我国主要流行于黑龙江、吉林、河南、河北、山东、广西、云南、四川和贵州等31个省市自治区。采用分子生物学技术对Ts生活史不同阶段的抗原基因进行克隆、表达及生物学功能研究是当前研究的热点。本文就Ts六钩蚴、囊尾蚴、成虫阶段重要重组抗原的研究进展作一介绍。
- 周必英
- 关键词：猪带绦虫猪囊尾蚴病重组抗原
- 寄生虫疫苗免疫剂量的研究现状被引量：3
- 2014年
- 迄今,寄生虫病仍是全球范围内,特别是发展中国家的重要公共卫生问题之一.随着免疫学和分子生物学技术的发展,寄生虫疫苗已成为防治寄生虫病的重要手段之一.其中疫苗免疫剂量是影响其免疫效果的重要因素之一.疫苗的剂量过低,不能刺激机体产生足够强的免疫反应;剂量过高,则可能引起免疫耐受或毒性反应,因此,确定合适的免疫剂量是疫苗研究的关键.该文就血吸虫、弓形虫和旋毛虫等寄生虫疫苗免疫剂量的研究现状作一综述.
- 江强周必英
- 关键词：寄生虫疫苗免疫剂量
- 寄生虫基因工程卡介苗疫苗研究进展被引量：4
- 2014年
- 基因工程疫苗是通过应用DNA重组技术．将病原保护性抗原编码的基因片段克隆入表达载体，用以转染细胞、真核或原核细胞的微生物中，使之充分表达，经纯化后所制成的疫苗。卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin．BCG）是一种减毒牛型分枝杆菌。广泛用于结核病的预防。BCG具有以下优点：①应用广泛，自1948年以来世界上已有35亿人接种，并发症少，安全性高；在全世界已建立BCG预防接种网，便于推广；
- 杨凤娇
- 关键词：寄生虫基因工程BCG疫苗
- 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导仔猪的保护性免疫应答
- 2017年
- 研究猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗免疫仔猪,猪带绦虫卵攻击后诱导其保护性免疫应答的情况。将12头40d龄健康仔猪均分为3组:分别为1011 CFU重组BCG-TSOL18疫苗灌胃组、BCG对照组和PBS对照组。每2周免疫1次,共免疫2次。于末次免疫4周后用猪带绦虫卵进行攻击感染,3月后剖杀仔猪,分离囊尾蚴,计算减蚴率;取前腔静脉血,分离血清和制备外周血单个核细胞(peripheral blood monouclear cell,PBMC)。采用ELISA法检测血清IgG、IgG1及IgG2a水平以及PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10的水平;MTT比色法检测PBMC增殖水平。重组BCG-TSOL18疫苗免疫组猪带绦虫卵攻击后诱导仔猪获得79.44%的保护力。与BCG和PBS对照组比较,重组BCG-TSOL18疫苗组血清IgG、IgG2a水平显著升高(t=13.026,P=0.000;t=13.253,P=0.000;t=7.284,P=0.000;t=8.453,P=0.000),IgG1水平显著降低(t=-9.118,P=0.000;t=-10.372,P=0.000);抗原刺激下PBMC显著增殖(t=14.929,P=0.000;t=14.665,P=0.000);PBMC培养上清液IL-2、IFN-γ水平显著升高(t=9.768,P=0.000;t=10.496,P=0.000;t=22.504,P=0.000;t=23.204,P=0.000),IL-4和IL-10水平显著降低(t=-18.659,P=0.000;t=-19.495,P=0.000;t=-26.258,P=0.000;t=-27.402,P=0.000)。猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗可诱导仔猪产生Th1型的保护性免疫应答,从而抵抗猪带绦虫卵的感染攻击。
- 周必英杨凤娇刘美辰周泠贾启江楠王灵军
- 关键词：猪带绦虫保护性免疫应答仔猪
- 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察被引量：4
- 2015年
- 目的观察猪带绦虫重组（r）BCG-TSOL18疫苗免疫小鼠后，诱导产生体液和细胞免疫应答的变化。方法按体质量采用随机数字表法将80只昆明小鼠分为4组：rBCG．TSOL18腹腔注射组f用5X10。克隆形成单位（CFU）猪带绦虫rBCG-TSOL18疫苗腹腔注射免疫小鼠]、rBCC-TSOL18口服灌胃组（用4×10^8CFU猪带绦虫rBCC-TSOL18疫苗口服灌胃免疫小鼠）；卡介苗（BCG）对照组[用5×10^6CFU的BCG腹腔注射免疫小鼠]；磷酸缓冲液（PBS）对照组（PBS腹腔注射小鼠），每组20只。在免疫后0、2、4、6、8周采集小鼠（n=4）眼静脉血．分离血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清特异性I如和IgG2a水平；无菌取脾，制备脾淋巴细胞悬液，收集脾淋巴细胞培养上清液，采用CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖水平；ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液白细胞介素（IL）．2和IL-4水平。结果rBCG-TSOL18腹腔注射组和rBCG—TSOL18口服灌胃组小鼠血清特异性IgG水平在免疫后2—8周升高，6周时两组达较高水平（0．310±0．022、0．356±0．026），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．054±0．005、0．057±0．006、0．093±0．014、0．085±0．010）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；IgG2a水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．965±0．031、1．144±0．049），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．102±0．014、0．093±0．012、0．115±0．012、0．103±0．013）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2～8周升高，6周时两组达较高水平（0．524±0．032、0．755±0．016），与同组0周时及同时间BCG和PBS对照组（0．301±0．018、0．305±0．020、0．362±0．033、0．334±0．027）比较，差异有统计学意义（P均〈0．05）；脾淋巴细胞上清液中IL-2和IL-4水平分别在免疫后2～8周和4，6周升高，分别在6�
- 杨凤娇江楠周泠刘晖王灵军周必英
- 关键词：猪带绦虫免疫应答
- 猪带绦虫基因工程疫苗研究进展被引量：18
- 2014年
- 猪囊尾蚴病（Cysticercosis）是由猪带绦虫（Taenia solium）的幼虫囊尾蚴（Cysticercu scellulosae）寄生于人或猪等而引起的一种严重危害人类健康和畜牧业生产的人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布，主要流行于中非、南非、拉丁美洲、东亚和南亚等地区，在我国主要流行于黑龙江、吉林、云南、河南、河北、山东和广西等31个省（市、自治区）。
- 刘美辰
- 关键词：猪带绦虫基因工程疫苗
- 猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建及其表达被引量：5
- 2015年
- 目的构建猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,研究TSOL18基因在BCG中的表达情况。方法通过酶切的方法从重组质粒pGEX-TSOL18获取猪带绦虫TSOL18基因,将其定向克隆到大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV261中,构建猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18,进行酶切、PCR和测序鉴定;再将其电穿孔转化入BCG,构建猪带绦虫重组BCGTSOL18疫苗,进行PCR鉴定;SDS-PAGE和Western blot分析TSOL18基因在BCG中的表达情况。结果通过酶切成功获得了393bp的TSOL18基因片段;酶切、PCR和测序鉴定证明成功构建了猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18;PCR鉴定证实猪带绦虫重组质粒pMV261-TSOL18成功转入BCG中,提示猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗构建成功;SDS-PAGE分析发现在相对分子质量(Mr)约为14.7kD处有明显的TSOL18目的蛋白条带,Western blot证实表达的TSOL18目的蛋白能被兔抗血清和囊虫病猪血清所识别。结论成功构建了猪带绦虫重组BCG-TSOL18疫苗,TSOL18基因能够在BCG中成功表达,表达的TSOL18重组蛋白具有特异的抗原性,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 杨凤娇周必英
- 关键词：猪带绦虫
- 猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备被引量：12
- 2013年
- 目的构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况;亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清;ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性。结果全基因扩增出393bp的TSOL18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41kDa,经亲和层析后可获得纯度为75%的重组蛋白;ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应。结论猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。
- 周必英周泠刘美辰刘晖张曦
- 关键词：猪带绦虫TSOL18重组蛋白抗血清
