四川省卫生厅科研基金(110345)
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- 治疗肝纤维化的分子生物学技术新进展
- 2013年
- 随着对肝纤维化发病机制认识的不断深入和分子生物学的发展，肝纤维化基因治疗，包括RNA干扰技术（RNAi）和反义技术等已成为该领域的研究热点。纳米基因载体的研究为突破基因转移瓶颈，实现安全、高效和靶向性基因治疗带来了新希望。将RNA干扰技术和壳聚糖纳米粒相结合，有望为肝纤维化信号通路研究和治疗提供重要的思路和方法。
- 都泓莲邓存良
- 关键词：肝硬化RNA干扰壳聚糖纳米粒
- 载基因PGenesil-TGF-β1壳聚糖纳米粒的制备和性能研究
- 2013年
- 制备负载重组质粒 PGenesil-TGF-β1的壳聚糖纳米粒，并研究其结构特征和性能特点。采用复凝聚法制备壳聚糖-PGenesil-TGF-β1（报告基因）纳米微粒体，通过投射电镜测定其形态、粒径；采用全光谱分光光度计测定该复合物的包封率；凝胶电泳阻滞实验分析纳米粒载体与质粒的结合能力；DNase I 消化实验观察壳聚糖纳米粒保护质粒抵抗核酸酶的能力。制备的壳聚糖-PGenesil -TGF -β1纳米粒均呈球形，微粒直径在100～200 nm 之间，平均约（127．37±19．75）nm；其包封率为（94．38±0．45）％；凝胶电泳阻滞实验结果表明壳聚糖纳米粒能通过静电作用有效结合质粒，将其包裹在内；DNase I 消化实验显示壳聚糖纳米粒能有效地保护质粒免受核酸酶的降解。用复凝聚法成功制得壳聚糖-PGenesil -TGF -β1纳米粒，为后续研究基因药物奠定了实验基础。
- 张千胡迎春都泓莲邓存良
- 关键词：质粒TGFRNA基因重组
- 靶向大鼠TGF-β1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定
- 2014年
- 构建并鉴定靶向大鼠TGF-β1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,为探索肝纤维化的基因治疗提供有力工具。根据大鼠TGF-β1基因的mRNA序列设计并合成2条编码shRNA的特异性寡核苷酸片段,另选通用阴性对照序列HK,将上述片段退火后分别克隆入线性化质粒载体PGenesil-1.1中,构建出含靶基因片段的shRNA真核表达载体PGenesil-TGF-β1-A、PGenesil-TGF-β1-B及PGenesil-HK,行酶切鉴定及测序分析,并采用脂质体介导法体外转染Hela细胞,荧光显微镜观察转染结果。经酶切和测序鉴定证实,构建的shRNA成功插入到载体,重组质粒的插入序列与设计的靶基因片段完全一致,3种重组质粒均能转染入Hela细胞表达绿色荧光。成功构建出靶向大鼠TGF-β1基因的shRNA真核表达载体,为后续研究抗肝纤维化的基因药物奠定了实验基础。
- 都泓莲张千邓存良
- 关键词：肝纤维化TGF-Β1质粒基因重组
