国家自然科学基金(81260552)
- 作品数：8 被引量：26H指数：4
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- 复方健耳剂对抗小鼠老年性耳蜗螺旋神经节神经元凋亡效应及机制研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨小鼠老年性耳蜗螺旋神经节神经元（SGNs）损害及不同剂量中药复方健耳剂干预作用与可能机制。方法选择刚断奶C57BL／6J小鼠36只，随机分为正常对照组（6只），老年性SGNs凋亡对照组（12只），高剂量中药健耳剂组（12只），低剂量中药健耳剂（6只）。正常对照组小鼠自断奶后每日饮用自来水直到出生后2个月止；老年性SGNs凋亡对照组小鼠自断奶后每日饮用自来水直到出生后7个月止；中药高、低剂量组小鼠自断奶后分别每天饮用3．65g／kg、0．91g／kg中药复方健耳剂直到出生后7个月止。每组6只小鼠在实验终止时立即取出耳蜗用于石蜡包埋切片，进行甲苯胺蓝染色，观察耳蜗SGNs形态学变化。另6只中药高剂量组与6只同龄老年性SGNs凋亡对照组在实验终止时立即取出耳蜗，利用Real-TimePCR技术，检测耳蜗caspase-3表达量，最后进行统计分析。结果2月龄对照组全耳蜗SGNs形态表现健康，密度正常。7月龄老年性SGNs凋亡对照组耳蜗基底部SGNs缺损严重，与2月龄对照组比较差异无统计学意义（P〈0．001）。而中药高剂量组神经元形态表现几乎正常，数量及密度与2月龄正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05），中药低剂量组神经元数量及密度与其他各组均差异有统计学意义（P〈0．001）。中药高剂量组与同龄老年性SGNs凋亡对照组对caspase-3表达量比较差异有统计学意义（P〈0．01）。各组耳蜗中部以上SGNs基本相同，尚无变化。结论C57BL／6J小鼠伴随着年龄增长出现耳蜗老年性SGNs凋亡由耳蜗底部开始并向顶部发展趋势；中药复方健耳剂具有对抗老年性SGNS凋亡显著效应；药物高剂量疗效优于低剂量；中药作用机制可能与其干预caspase介导细胞程序性死亡径路有关。
- 宣伟军丁大连宣毅陈壮黄力毅韦瑀龙唐俊波
- 关键词：老年性聋耳蜗螺旋神经节中草药
- CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式的比较被引量：4
- 2019年
- 目的探讨和比较CBA/CaJ与C57BL/6J小鼠全耳蜗毛细胞随着年龄增长不同损害模式与规律。方法选择年龄在6个月、12个月、18个月和24个月的CBA/CaJ和C57BL/6J小鼠各32只,其中每个年龄各8只,全身麻醉下取耳蜗,进行全耳蜗基底膜铺片,将全耳蜗内、外毛细胞计数结果输入计算机并应用耳蜗图软件,按照对应的不同年龄进行两个鼠种耳蜗毛细胞密度对比和统计学分析。结果CBA/CaJ小鼠于12月龄耳蜗顶部外毛细胞开始出现轻度损失,伴随着年龄增加,外毛细胞损失继续扩大,以顶部向中部发展为主,后期内毛细胞也出现损失。从18月龄开始,耳蜗外毛细胞损失与上个年龄组比较均增加显著(P<0.05)。而C57BL/6J小鼠于6月龄耳蜗底部均已出现外、内毛细胞损失,而且以外毛细胞损失为主,此后伴随着年龄增加,毛细胞损失不断扩大,于6月龄开始,耳蜗外、内毛细胞损失与同龄CBA/CaJ小鼠比较均明显增加(P<0.05),12月龄开始与同鼠种上个年龄组比较均明显增加(P<0.05)。结论CBA/CaJ小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着从顶部和底部两端开始,向中部延伸,但顶部毛细胞损害比底部严重的病变规律。C57BL/6J小鼠耳蜗毛细胞损害遵循着主要从耳蜗底部开始,逐渐向中部和顶部扩展的病变规律。外毛细胞损害比内毛细胞早。C57BL/6J小鼠毛细胞损害比CBA/CaJ小鼠早。提示两个鼠种均可作为老年性毛细胞凋亡研究动物模型,但以C57BL/6J小鼠模型更适合短期观察研究,两者间所出现的毛细胞变化差别可能与Cdh23基因是否变异和缺失有关。
- 周凌宣伟军丁大连
- 关键词：小鼠耳蜗毛细胞
- 复方健耳剂对国产DBA/2J小鼠耳蜗组织脑源性神经营养因子表达影响的初步研究被引量：4
- 2013年
- 目的:研究中药复方健耳剂对小鼠耳蜗组织脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨其保护老年性耳蜗感音神经性损害机制。方法:选择断奶DBA/2J小鼠10只,随机分为对照组和中药组,各5只,对照组小鼠为常规饲料与日常饮水喂养;中药组小鼠为常规饲料与中药溶液喂养;至105d龄时两组同时终止实验,取出耳蜗,利用Real-Time PCR技术定量检测两组耳蜗组织BDNF的表达,并统计分析。结果:中药组BDNF的表达比对照组高(P<0.01)。结论:复方健耳剂对BDNF的表达影响可能是其有效对抗老年性耳蜗感音神经性损害的重要机制之一。
- 宣伟军褚汉启宣毅
- 关键词：DBA耳蜗脑源性神经营养因子
- 复方健耳剂对C57BL/6J小鼠AHL毛细胞的保护作用被引量：6
- 2016年
- 目的探讨老年性耳蜗毛细胞损害与中药复方健耳剂两种喂药方法干预的作用。方法选择1月龄C57BL/6J小鼠22只用于本实验,其中4只小鼠每日饮用自来水直到出生后3个月作为幼龄对照组;6只小鼠每日饮用自来水直到出生后7个月作为老年性聋对照组;6只小鼠每日自动饮用中药复方健耳剂直到出生后7个月;另6只小鼠每日自动饮用同样中药至4个月后改用每日人工灌服直到出生后7个月。各组动物实验到期终止后,取耳蜗进行全耳蜗基底膜铺片,将全耳蜗内、外毛细胞计数结果输入计算机并应用耳蜗图软件进行耳蜗毛细胞密度对比分析,其中选择基底膜上重要的病变区间的毛细胞密度进行统计学分析。结果 3月龄对照组小鼠耳蜗外、内毛细胞缺损仅仅出现在耳蜗底回钩端区域;7月龄对照组外、内毛细胞缺损从底回基底膜起始端扩展到距离耳蜗顶端约40%区域;7月龄中药灌服组和自动饮用组动物的内、外毛细胞缺损范围和程度相似,均显著比7月龄对照组为轻(P<0.001)。结论中药复方健耳剂能够有效延缓C57BL/6J小鼠老年性耳蜗毛细胞损害的发生和发展,两种喂药方式所起作用相同(P>0.05),其药理机制可能与其改善微循环,清除活性氧,保护线粒体等作用相关。
- 宣伟军丁大连蒋海燕杨琨韦瑀龙陈壮唐俊波
- 关键词：C57BL/6J小鼠老年性聋毛细胞中药
- 复方健耳剂对抗老年性耳蜗神经细胞凋亡超微结构观察及上调NeuN和BDNF定位表达作用被引量：7
- 2020年
- 目的利用透射电镜观察中药复方健耳剂干预小鼠老年性耳蜗外毛细胞(outer hair cell,OHC)、螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons,SGN)凋亡作用;共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察复方健耳剂对耳蜗SGN的特异性核抗原蛋白(Neu N)、脑源性神经营养因子(BDNF)定位表达影响作用,探讨其作用机制。方法选择1月龄C57BL/6J小鼠22只并随机分为两组,其中11只小鼠每日饮用自来水直到7个月作为老年性耳蜗退变对照组(简称7月龄对照组);11只小鼠每日饮用复方健耳剂1.83 g/(kg·d)直到7个月作为中药干预组(简称7月龄中药组)。所有动物期满取出耳蜗,制备石蜡包埋切片,在透射电镜下,重点选择观察7月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的OHC以及对应部位的SGN超微结构变化,同时与7月龄中药组相同部位的OHC和SGN进行对照。利用激光共聚焦显微镜,结合形态学多重免疫荧光技术,观察Neu N与BDNF在SGN定位表达,并进行统计分析。结果 7月龄对照组耳蜗底回存留尚未解体的OHC以及对应部位的SGN,胞体萎缩,胞核不整,核染色质聚集成团、边集,纹理结构模糊,电子密度高,尤其是SGN大小形态不一,数量明显减少,甚至核染色质溶解,形成空泡,或解体缺如等,呈现严重凋亡状况。而7月龄中药组耳蜗底回OHC或SGN凋亡状况不明显,细胞形态结构较完整,数量较多,核染色质分布较均匀,纹理结构清晰,电子密度低,仅个别胞核溶解,形成空泡。与7月龄对照组比较,7月龄中药组耳蜗底回SGN中的Neu N与BDNF定位表达密度较高,数量较多(P<0.05)。结论耳蜗OHC或SGN细胞核超微结构改变、Neu N表达减少是老年性耳蜗神经细胞凋亡的重要特征;同期SGN凋亡早于OHC;中药复方健耳剂具有明显对抗OHC或SGN超微结构改变,其对SGN中的Neu N表达明显增多,提示中药具有明显保护SGN作用,与透射电镜观察一致,其作用机制与促进BDNF�
- 宣伟军黄力毅宣毅唐俊波韦瑀龙
- 关键词：老年性聋超微结构NEUNBDNF
- 脑损伤模型中基于形态学多重免疫荧光技术的神经细胞研究方法被引量：1
- 2015年
- 目的探讨多重免疫荧光技术在神经细胞形态学研究中的应用，为神经细胞靶向研究提供新方法。方法Balb／c小鼠10只按随机数字表法分为重度创伤性脑损伤（STBI）组、假模对照组（各5只），其中STBI组采用控制性经脑皮质撞击法进行造模，神经功能评级为8分。各组均于第7天终止实验取脑切片，应用多重免疫荧光技术方法，在激光共聚焦显微镜下同时观测神经元核抗原抗体（NeuN）、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）的形态学表达并定量比较。结果利用多重免疫荧光技术获得的图像色彩鲜明、清晰明辨、形态感强。STBI组大脑损伤区图像显示BrdLI＋NeuN＋GFAP＋DAPI表达较多；假模对照组大脑对应区域图像上几乎没有BrdU＋NeuN＋DAPI表达，GFAP表达也非常少。STBI组与假模对照组BrdU＋NeuN＋DAPI和GFAP相对表达量比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论小鼠遭受重度脑创伤后可诱导神经细胞或星形胶质细胞不同程度自行增殖。多重免疫荧光技术可作为靶向研究神经细胞发育、增殖、凋亡或死亡机制的一种新的科学研究手段。
- 宣毅宣伟军
- 关键词：神经细胞颅脑损伤
- 聪耳通窍剂干预豚鼠庆大霉素耳毒性聋作用的机制探讨被引量：3
- 2018年
- 目的探讨基于中医脾肾理论的中药聪耳通窍剂干预庆大霉素(gentamycin,GM)耳毒性聋作用与可能机制。方法选择杂色成年豚鼠60只,随机分为正常对照组,GM对照组,中药+GM组,每组各20只。正常对照组按常规饲养至第11天期满;GM对照组按200mg/kg·d剂量,每天分两次连续注射9天,第11天终止饲养;中药+GM组按3.994g/kg·d剂量(1/2人工灌服,1/2自动饮用),预先服用聪耳通窍剂10天,然后在继续服用中药同时开始注射每天同等剂量GM,连续9天,第11天终止饲养。其中每组6只动物于第5、6、9天检测ABR评估听力;6只动物利用RT-PCR检测耳蜗SOD1;剩余8只动物用于全耳蜗基底膜铺片,琥珀酸脱氢酶染色,进行耳蜗毛细胞形态学研究,以及检测血清BUN和Cr,肾脏切片经苏木素-伊红染色,了解肾功能和肾组织病理变化,其中每组6只动物一侧肾脏应用western blot检测ASK-1、Trx、caspase-3。结果正常对照组ABR阈值一直保持相对恒定正常范围。与正常对照组比较,GM对照组ABR阈值第5天即出现明显差异(P<0.05),与中药+GM组比较,第7天开始出现明显差异(P<0.05),随着天数增加,差异继续扩大(P<0.01)。中药+GM组ABR阈值递增差异不显著(P>0.05)。全耳蜗基底膜检查显示,正常对照组各回三排内、外毛细胞形态正常,数量完整,排列有序;GM对照组各回三排外毛细胞损毁严重,绝大部分细胞出现严重崩解不全,或凋亡缩小,但内毛细胞仍基本存在;中药+GM组各回三排外毛细胞除少量和散在崩解不全外,大多仍存留可辨,形态如常,内毛细胞仍保持完整,各回外毛细胞损毁状况明显少于GM对照组(P<0.01)。中药+GM组对耳蜗SOD1表达明显高于正常对照组和GM对照组(P<0.01,P<0.05),而血清BUN和Cr含量则明显低于GM对照组(P<0.01)。肾脏切片染色显示,与正常对照组比较,GM对照组肾小球和近曲肾小管等受损严重,病理改变明显,而中药+GM组则受损不明显,甚至基本
- 李羴唐俊波韦瑀龙陈壮宣毅陈思仲宣伟军
- 关键词：庆大霉素耳毒性肾毒性氧化应激反应
- 复方健耳剂干预庆大霉素耳毒性致豚鼠毛细胞损害的实验研究被引量：6
- 2018年
- 目的探讨中药复方健耳剂干预豚鼠庆大霉素(gentamycin,GM)耳毒性致外毛细胞损害的作用及可能机制。方法选择杂色成年豚鼠48只,随机分为正常对照组、GM对照组、复方健耳剂+GM组(简称中药+GM组),每组16只,其中正常对照组按常规饲养至第11天期满;GM对照组按200 mg/(kg·d)剂量,每天分2次连续注射9天,第11天终止饲养;中药+GM组按3.994 g/(kg·d)剂量(1/2人工灌服,1/2自动饮用),预先服用复方健耳剂10天,然后在继续服用中药同时开始注射每天同等剂量GM,连续9天,第11天终止饲养。所有动物期满取出耳蜗,其中每组10只动物用于全耳蜗基底膜铺片,琥珀酸脱氢酶染色,进行耳蜗毛细胞形态学观察,另外每组6只动物,利用Real-time PCR技术检测耳蜗组织硫氧还蛋白(Trx)-1、Trx-2、凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)mRNA表达量。结果全耳蜗基底膜检查显示,正常对照组各回三排内、外毛细胞形态正常,数量完整,排列有序;GM对照组各回三排外毛细胞损毁严重,绝大部分细胞出现严重崩解不全,或凋亡缩小,第1回比其他各回损害较重(P<0.01),但内毛细胞仍基本存在;中药+GM组各回三排外毛细胞除少量和散在崩解不全外,大多仍存留可辨,形态如常,内毛细胞仍保持完整,各回外毛细胞损毁状况明显少于GM对照组(P<0.01)。中药+GM组Trx-1、Trx-2 mRNA表达明显高于GM对照组(P<0.01),ASK1 mRNA表达则明显低于GM对照组(P<0.01)。结论一定剂量GM连续使用可造成豚鼠耳蜗外毛细胞严重损害,并以第1回明显,而且以外毛细胞为主要损害靶细胞。复方健耳剂具有防治GM耳毒性外毛细胞损害作用,其机制可能与其调控硫氧还蛋白系统,阻止ASK1依赖的细胞凋亡有关。
- 宣伟军宣伟军韦瑀龙韦瑀龙陈壮陈思仲唐俊波
- 关键词：庆大霉素耳毒性硫氧还蛋白
