国家自然科学基金(30560104) 作品数:13 被引量:66 H指数:5 相关作者: 冉雪琴 王嘉福 杜智勇 林尖兵 覃成 更多>> 相关机构: 贵州大学 贵州省农业生物工程重点实验室 黔东南民族职业技术学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 贵州省优秀青年科技人才计划 贵州省科技厅农业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
贵州白山羊BMP15基因多态性研究 被引量:11 2007年 骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因是控制Belclare和Cambridge等绵羊的高繁殖力主效基因,BMP15蛋白中单个氨基酸的改变直接影响绵羊的产卵率和产羔数。采用RFLP和SSCP技术检测BMP15基因中绵羊高繁殖力突变类型FecXG和FecXB在贵州白山羊中的分布。结果表明,在贵州白山羊样品中没有检测到BMP15基因的FecXG突变,说明该突变在贵州白山羊中的自然发生率非常低;在贵州白山羊高产母羊和公羊中检测到BMP15的FecXB突变,以杂合的AB基因型存在,低产母羊中没有检测到该突变,提示BMP15基因的FecXB突变可能是影响贵州白山羊繁殖力的因素之一。 林尖兵 杜智勇 覃成 王嘉福 冉雪琴关键词:贵州白山羊 繁殖力 BMP15基因 贵州白山羊GDF9基因外显子2的多态性研究 被引量:17 2008年 生长分化因子9(GDF9)是卵母细胞分泌的生长因子,对早期卵泡的生长和分化起重要的调节作用。采用RFLP和SSCP方法检测贵州白山羊GDF9基因外显子2的单核苷酸多态性,结果表明:在所有检测样本中均未发现GDF9基因的FecGH突变;在高繁殖率(3羔以上/胎)母羊和公羊中检测到8个杂合的AB基因型,其中5个为高产的母羊,3个为公羊。碱基序列分析证实GDF9基因编码区第1189bp位点的碱基由G突变为A,该位点位于外显子2中,导致活性肽第79位缬氨酸突变为异亮氨酸(V79I),但在低繁殖率(1~2羔/胎)母羊中没有发现该突变。虽然贵州白山羊GDF9基因中G1189A突变的发生率仅为5%,但该位点编码的氨基酸与FecGH突变(S77F)仅相隔1个氨基酸,因此推测GDF9基因中的G1189A突变可能与贵州白山羊的高繁殖力有关。 杜智勇 林尖兵 覃成 王嘉福 冉雪琴关键词:贵州白山羊 GDF9基因 RFLP SSCP 榕江香猪生长激素基因的鉴定及功能分析(英文) 被引量:13 2006年 生长激素是调节动物生长的主要激素。本研究应用聚合酶链式反应技术从榕江香猪的基因组文库中分离出1.903kb生长激素基因。克隆的生长激素基因由五个外显子和四个内含子组成。榕江香猪生长激素基因的碱基序列与已知四个国外猪种和9个中国地方猪种之间的同源性为97%~99%,其间的差异主要集中在内含子2和4。通过限制性内切酶(Dde I,Nar I,Bsm NI)分析,鉴定出榕江香猪生长激素基因的五个多态性位点,分别位于5’-侧翼区274(T/C)位点,外显子2的622(G/A)和631 (G/A)位点,内含子2中的841(T/C)以及外显子4中的1358(A/G)位点。同时,1358(A/G)位的碱基必变导致榕江香猪生长激素成熟肽第108位异亮氨酸替换,三维结构分析表明,异亮氨酸的存在可能导致生长激素与受体间亲合力降低。 李景 冉雪琴 王嘉福关键词:生长激素 基因 贵州白山羊GDF9基因编码区1007位点的多态性 被引量:3 2009年 生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)基因是卵母细胞分泌的生长因子,调节卵泡的早期生长和分化。对贵州白山羊GDF9基因的研究结果显示,编码区1007位碱基与已知山羊不同。为了研究1007位点对贵州白山羊繁殖力的影响,采用锚定PCR对GDF9基因外显子2第18位氨基酸密码子所在区域进行了扩增、克隆测序和基因型分析,结果表明,GDF9基因编码区1007位点表现出C/T多态性,使成熟肽第18位氨基酸为丙氨酸/缬氨酸替换;低产母羊均为杂合基因型,高产母羊中90%为杂合基因型,高产羊群与低产羊群之间基因型频率差异不显著(P>0.05),表明GDF9基因1007位点的多态性与贵州白山羊产羔数之间没有直接的相关性。 周泽晓 冉雪琴 王嘉福关键词:贵州白山羊 GDF9基因 SNP位点 贵州竹乡乌骨鸡Ghrelin基因的克隆及原核表达 被引量:1 2008年 采用特异性引物自贵州黑羽乌骨鸡胃部组织克隆了Ghrelin的基因,基因全长2330bp,含有4个外显子,3个内含子。采用RT-PCR技术,获得了Ghrelin cDNA片段(563bp),序列分析推测,通过可变剪切可产生两段mRNA,cDNA编码区与基因组中的编码区完全一致。黑羽乌骨鸡Ghrelin基因与已知鸡种比较有13~18个碱基不同,相似性为99.1%~99.3%,但其氨基酸序列完全一样,表明禽类的Ghrelin多肽高度保守。将其中Ghrelin编码区亚克隆到原核表达载体pTYB11中,经序列测定碱基序列正确,获得重组质粒pTYB11/G。在IPTG的诱导下,重组质粒在大肠杆菌ER2566中获得表达。当OD600=0.5,IPTG为浓度1mmol/L,诱导5小时的表达量最高,融合蛋白占细胞总蛋白的40%。采用几丁质结合的预装柱对表达产物进行纯化,产率约为5mg/L培养液。 代新兰 冉雪琴 王嘉福关键词:乌骨鸡 GHRELIN基因 原核表达 贵州白山羊Bmp15和Gdf9基因多态性及其编码蛋白的进化分析(英文) 被引量:6 2009年 BMP15和GDF9是转化生长因子β(TGFβ)超家族的成员,对绵羊的繁殖性状有直接的调节作用,从中发现的多个高产突变位点直接提高了排卵数和产羔数。在之前的研究中,作者从贵州白山羊中找到了一个高产突变位点。为了进一步揭示Bmp15和Gdf9基因突变与繁殖性状之间的关系,对贵州白山羊Bmp15和Gdf9基因编码区进行了克隆,以人BMP7的晶体结构为模板构建了贵州白山羊BMP15和GDF9成熟肽的三维模型。贵州白山羊Bmp15和Gdf9基因分别编码394和453个氨基酸的蛋白前体。对BMP15和GDF9成熟肽序列进行分析发现,除了之前确认的BMP15中的FecXB突变(S99I)和GDF9中的V79I突变之外,还从贵州白山羊的BMP15和GDF9成熟肽分别发现7个和3个位点突变。其中,BMP15成熟肽的S32G、N66H、S99I/P99I和G107R突变可能影响二聚体与受体的结合;GDF9成熟肽的P78Q和V79I影响二聚体与I型受体的亲和力,将值得进一步深入研究。对Bmp15和Gdf9基因编码的蛋白前体序列进行聚类分析,结果显示在鱼类到哺乳类的进化过程中,BMP15出现长度逐渐增加的现象,以BMP15成熟肽N端长度增加为主。这种演变可能使BMP15对低排卵哺乳动物繁殖力的控制更为灵敏。该文的研究结果为贵州白山羊Bmp15和Gdf9基因变异与繁殖力的关系提出了合理的解释,并支持这两个因子是贵州白山羊高产性状重要调节因子的观点。 冉雪琴 林尖兵 杜智勇 覃成 王嘉福关键词:BMP15 GDF9基因 贵州白山羊 猪源大肠杆菌志贺样毒素2型突变体B亚基与LTB基因的融合与表达 被引量:1 2007年 猪水肿病的主要毒力因子是志贺样毒素的2型突变体(Stx2e),毒素的A亚基是有毒的酶活性单位,B亚基无毒,介导毒素与受体的结合。为了增加B亚基的免疫原性,采用重叠PCR将猪源志贺样毒素Ⅱ型突变体B亚单位(Stx2e B)连接至热敏肠毒素的B亚单位(LTB)成熟肽N末端,获得Stx2e B与LTB相连的融合蛋白基因Stx2e B-LTB。融合基因克隆到表达载体pQE30中,在IPTG的诱导下,融合基因在大肠杆菌中获得表达,表达量占细菌总蛋白的8%。融合蛋白的获得为猪水肿病基因工程亚单位疫苗的制备、猪水肿病的预防奠定了基础。 王红珍 冉雪琴 吴拥军 王嘉福关键词:大肠杆菌 热敏肠毒素 基因融合 山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达与细胞凋亡的相关性 被引量:2 2012年 以贵州本地分离纯化的山羊痘病毒为试验材料,感染Vero细胞,通过台盼蓝、吖啶橙/溴乙锭荧光染色分析细胞的死亡及凋亡比例;经特异性PCR从山羊痘病毒基因组中分离出山羊痘病毒抗凋亡蛋白样基因,基因长531bp,含有完整的编码框,与绵羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的相似性为97%,因此确定为山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因。进一步研究山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因在Vero细胞中的表达,结果显示,病毒感染Vero细胞24h时没有检测到凋亡现象,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的mRNA水平最高;感染48h时,Vero细胞的凋亡率上升到13%,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量随之下降。结果表明,山羊痘病毒抗凋亡蛋白基因的表达量与Vero细胞的凋亡呈负相关,有助于病毒在细胞内的生存和侵染等过程。 关会敏 冉雪琴 姬志林 王嘉福关键词:山羊痘病毒 基因表达 香猪雌激素受体α、β基因cDNA的克隆及分析 被引量:2 2008年 本文采用RT-PCR技术,分别从香猪的子宫和卵巢总RNA中扩增了雌激素受体α和β(ERα、ERβ)两种cDNA,分别长1788bp和1581bp,包括起始密码子和终止密码子,碱基序列与大白猪的ERα、ERβ基因的相似性为99.3%和99.6%。ERα、ERβ两个基因编码595、526个氨基酸,N-末端的20、24个氨基酸残基为信号肽,成熟肽序列与大白猪之间均有4个氨基酸不同。三维结构分析发现,与大白猪相比,香猪ERα成熟肽第192、231位氨基酸由Ser、Met变为Gly、Thr,位于DNA结合结构域,成熟肽438位氨基酸由Val变为Gly,位于ERα的配体结合结构域;ERβ成熟肽中,167位和360位氨基酸由Asp和Phe变为Glu和Pro,位于受体的DNA结合域和配体结合域,这五个位点的氨基酸替代可能影响ERs蛋白与雌激素受体应答元件、雌激素等配体的结合,改变相关基因的转录效率,并可能影响香猪的卵巢、子宫等繁殖系统的发育,与香猪的低繁殖力有关。 刘金娟 王嘉福 冉雪琴关键词:香猪 雌激素受体Α 雌激素受体Β CDNA 贵州黑马羊无角间性综合征座位的分子检测 被引量:4 2010年 为了筛选出黑马羊羊群中对羊群有危害且无经济价值的无角间性羊,试验选取不同性状的羊只采用PCR分子标记技术进行检测,从大量的特异性PCR引物中选出可以进行筛选的1对引物。结果表明:以有角黑山羊和黑马羊基因组为模板,用该引物可扩增出413 bp的片段,无角间性羊样本没有扩增片段,因此能够有效区分无角间性羊样本。说明试验建立的检测方法可作为无角间性综合征(PIS)基因座位的分子标记。 琚四美 张嘉伟 杜航 徐霖 冉雪琴 王嘉福