广东省自然科学基金(000321)
- 作品数：10 被引量：55H指数：4
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- 红霉素干预对烟雾暴露大鼠肺部炎症的影响被引量：3
- 2005年
- 何志义彭公永于亮钟南山冉丕鑫
- 关键词：红霉素肺部炎症
- 大蒜素对大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察大鼠肺泡上皮细胞(CCL149细胞系)谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)等表达变化,了解大蒜素对CCL149细胞抗氧化能力的影响。方法在以四甲基偶氮唑盐(MTT)法确定大蒜素适当作用浓度的基础上,用不同浓度大蒜素(0、0.1、1.0、5.0μg/ml)作用CCL149不同时间(6、12、24、48h),用分光光度法检测细胞内GSH、MDA的变化;用Westernblot法检测细胞内γGCS蛋白的表达,分析不同处理剂量、不同处理时间大蒜素对细胞内GSH、MDA及γGCS的影响。结果(1)大蒜素浓度≤5μg/ml不影响细胞活力。(2)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在处理6h后细胞内GSH含量[6h组GSH含量分别为(16.45±0.69)、(16.81±0.79)、(17.80±1.10)mg/g蛋白]较对照组[(13.38±1.16)mg/g蛋白]显著增加(t=3.92～4.78,P均<0.05),MDA含量[(1.07±0.02)、(1.02±0.06)、(1.00±0.05)nmol/mg蛋白]较对照组[(1.23±0.05)nmol/mg蛋白]下降(t=5.75～6.34,P均<0.05)。细胞内GSH水平升高至24h达顶峰,48h有所下降,仍较对照组高,相同时间点不同大蒜素浓度组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在刺激6、12、24h细胞内γGCS蛋白表达(24h为0.693±0.027、0.646±0.081、0.667±0.077)较对照组(0.531±0.007)显著增强(t=2.82～9.92,P<0.05),各观察指标未呈现剂量依赖性。结论大蒜素能增强大鼠肺泡上皮细胞的抗氧化作用,可能与其促进γGCS的表达有关。
- 熊丽红于亮李冰冉丕鑫
- 关键词：谷胱甘肽丙二醛大蒜素大鼠肺泡上皮细胞
- 苯并芘对γ谷氨酰半胱氨酸合成酶调控作用的初步研究被引量：1
- 2006年
- 目的分析苯并芘(B(a)P)对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位(GCLC)基因的调控作用。方法用超级凝胶滞留实验(Supershift)确认苯并芘(B(a)P)刺激能诱导芳香烃受体核转位因子(ARNT)或其复合物与大鼠GCLC上游调控序列中的E-box元件结合。在不同浓度苯并芘刺激下,在体外通过萤火虫荧光素酶报道系统比较大鼠GCLC5′端全长调控序列及缺失E-box位点的5′端全长调控序列的功能变化,初步确定苯并芘的调控作用。结果B(a)P刺激能够使ARNT或复合物结合E-box元件。用不同浓度的B(a)P于不同的时间点检测,CCL-149细胞荧光素酶活性改变不大(P>0·05)。结论B(a)P刺激能使ARNT与γ-GCS基因上的E-box结合,但这种结合似乎对γ-GCS基因上游调控序列基因的功能影响不大。
- 熊丽红李冰冉丕鑫
- γ-GCS基因抑制元件E-box的实验研究被引量：4
- 2005年
- 目的 明确大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位编码基因(GCLC基因)负调控区域( -745^-705)上的功能元件E box作用。方法 利用迁移率变动试验(EMSA)和超级迁移率变动试验证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E- box元件能与转录因子USF1 /USF2特异性的结合;通过共转染USF1 /USF2表达质粒(pCMV -USF1 /pCMV- USF2)和GCLC -luc确认E- box元件在基因调控中的作用;最后通过构建USF1 /USF2的逆转录病毒载体,将表达USF1 /USF2的重组逆转录病毒感染肺泡上皮细胞, 用Western印迹检测细胞GCLC蛋白表达受影响的情况,进一步确定E box元件与USF作用在GCLC基因表达中的最终作用。结果 EMSA和超级迁移率变动试验证实GCLC基因负调控区域的功能元件是E- box,且该元件与USF特异结合参与GCLC基因的调控;共转染USF1 /USF2表达质粒的细胞GCLC基因表达明显下降;Western印迹证实感染重组USF1 /USF2逆转录病毒使肺泡上皮细胞的GCLC蛋白表达明显下降。结论 E -box元件通过与转录因子USF作用抑制GCLC基因表达,E box元件是γGCS基因的重要的抑制元件。
- 程璘令李冰涂洪斌刘启才冉丕鑫
- 关键词：共转染WESTERN印迹EMSA调控区功能元
- 香烟烟雾凝聚物通过AP-1探针调节肺泡上皮细胞γ-GCS限速酶的表达被引量：1
- 2005年
- 目的探讨香烟烟雾凝集物(CSC)对肺泡上皮细胞(CCL149)表达限速酶r-GCS的影响与机制。方法用不同浓度的CSC处理CCL149细胞1、4、8、12、24、48 h后,采用反向聚合酶链反应和W est印记法在CSC作用不同时间点检测CCL149细胞表达r-GCS的mRNA和蛋白的水平;脂质体转染及荧光素酶活性检测法测定CSC对大鼠gamm a-GCS重链(GCLC)基因5′-端启动子区域功能的影响;用EMSA法测定AP-1探针的结合水平。结果CSC可刺激CCL-149细胞表达gamm a-GCS,在一定浓度时(>1μg/m l),CCL149细胞用CSC处理后1、4、8 h组-γGCS mRNA的表达水平未见到有明显的差别;而12、24、48 h组-γGCS mRNA的表达水平较对照组明显增高(1.71±0.12 vs.0.67±0.06,P<0.05)。CSC亦能使带有GCLC 5′-端全长的荧光素酶报道基因的荧光素酶的活性增强,与无启动子的空载体对照组比较,CSC刺激后12、24、48 h组荧光素酶的活性均明显增强,其γ-GCS的活性均有升高(0.63±0.24 vs.1.75±0.27,P<0.05)。CSC尚促进AP-1与GCLC的DNA结合水平。结论CSC通过激活氧化应激敏感的转录因子AP-1上调CCL-149细胞内r-GCS的表达。
- 邹朝霞冉丕鑫
- 关键词：烟草肺泡
- 吸烟对大鼠肺内谷胱甘肽与γ-GCS的影响及乙酰半胱氨酸的干预作用被引量：10
- 2007年
- 目的:探讨被动吸烟对SD大鼠BALF中谷胱甘肽浓度(GSH)和肺组织中γ-GCS表达的影响以及乙酰半胱氨酸NAC的干预作用。方法:SD大鼠被分成吸烟、吸烟同时加用NAC和单纯吸烟3组,分别采用GSH特异性的DTNB-GSH还原酶循环法及免疫组化的方法检测GSH浓度及γ-GCS的表达水平。结果:单纯被动吸烟大鼠肺BLAF中GSH水平较对照和加用NAC组明显升高(P<0.05)。肺组织内γ-GCS阳性染色明显增强;吸烟与吸烟同时服用NAC组比较没有显著区别(P>0.05)。结论:被动吸烟促进SD大鼠肺内GSH和γ-GCS表达,这可能是机体的一种自我代偿反应;NAC对吸烟导致的气道炎症具有一定的保护作用。
- 邹朝霞何志义冉丕鑫
- 关键词：吸烟谷胱甘肽
- 红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白细胞介素-8与谷胱甘肽的影响被引量：17
- 2005年
- 目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响。将传代后的细胞按24、36、48h3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组。通过酶联免疫吸附实验检测细胞上清中IL8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子κB(NFκB)和激活蛋白1(AP1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)的含量;应用Western印迹检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γGCSHS)蛋白表达。结果红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE上清中IL8的含量;红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以下调H2O2(0.01mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NFkB、AP1的活性;红霉素(5μg/ml)预孵育48h抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γGCS的含量(3.46±0.41)以及γGCSHS蛋白表达、γGCSHS启动子区域AP1转录活性。结论红霉素通过下调NFκB、AP1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL8的释放,进而影响GSH及γGCS的合成调控。
- 何志义邹朝霞于亮钟南山冉丕鑫钟小宁
- 关键词：过氧化氢细胞表达红霉素转录因子NF-KB四甲基偶氮唑蓝
- 大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因5′端调控序列初步分析被引量：4
- 2005年
- 目的 分析大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位 (GCLC)基因 5′端调控区域和相应转录因子的特性。方法 克隆 1 760bp大鼠GCLC上游调控基因并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc(GCLC/pGL-3),利用外切核酸酶Ⅲ将大鼠GCLC基因的 5′端序列单向切成不同长度的缺失体,将所构建的GCLC-Luc及其 11个缺失体转染大鼠肺泡上皮细胞,通过测量转染后细胞的荧光素酶活性确定该基因的调控区域,并通过转录因子分析软件分析出可能与这些调控区域结合的转录因子,最后通过电泳迁移率改变实验 (EMSA)以明确该调控区的顺式元件和转录因子。结果 实验成功地克隆出大鼠GCLC上游调控基因及其报道载体GCLC-Luc及GCLC-Luc的 11个缺失体。将GCLC-Luc及其缺失体转染肺泡上皮细胞并分析荧光素酶活性:GCLC Luc(-1 758 /+2 Luc),缺失体 1(-1 231 /+2 Luc),缺失体 2(-1 108 /+2 Luc),缺失体 3(-1 087 /+2 Luc),缺失体 4(-876 /+2 Luc),缺失体 5(-745 /+2 Luc),缺失体 6(-705 /+2 Luc),缺失体 8(-613 /+2 Luc),缺失体 9(-595 /+2 Luc),缺失体 10( -403 /+2 Luc)和缺失体 11( -111 /+2 Luc)的荧光素酶值分别为(90 012±2 445)、(77 652±840)、(149 927±4 915)、(71 588±1 108)、(99 283±2 612)、(75 443±1 438)。
- 程璘令李冰涂洪斌刘启才冉丕鑫
- 关键词：基因Γ谷氨酰半胱氨酸合成酶转录因子转染亚单位AP-1
- 香烟烟雾提取物影响肺泡上皮细胞谷胱甘肽和γ谷氨酰半胱氨酸合成酶的表达被引量：4
- 2005年
- 邹朝霞何志义冉丕鑫
- 关键词：Γ谷氨酰半胱氨酸合成酶香烟烟雾提取物肺泡上皮细胞谷胱甘肽慢性气道炎症
- 红霉素对支气管上皮细胞转录因子核因子κB、激活蛋白1活性的影响被引量：13
- 2004年
- 何志义邹朝霞刘启才李冰钟南山冉丕鑫
- 关键词：激活蛋白1核因子ΚB红霉素转录因子DPB活性
