国家高技术研究发展计划(SQ2006AA02Z112882)
- 作品数：12 被引量：86H指数：4
- 相关作者：唐青王晓光雷永良杜加亮陈秀英更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心浙江省丽水市疾病预防控制中心军事医学科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 狂犬/丙型肝炎嵌合病毒的构建和拯救
- 2011年
- 目的 以狂犬病病毒为载体,构建表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙型肝炎嵌合病毒,为发展新型丙肝载体疫苗奠定基础.方法 在狂犬病病毒反向遗传系统CTN-GFP的基础上,通过传统分子克隆方法,将HCV E1E2基因分别克隆人复制型和复制缺陷型狂犬病病毒载体,构建狂犬/丙肝嵌合病毒CTN-HCV E1E2和CTNΔG-HCV E1E2.结果 免疫荧光（DFA）和反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）结果 显示嵌合病毒拯救成功,嵌合病毒能够再次感染正常细胞并且能够在mRNA水平检测到HCV E1E2基因的表达.结论 本研究成功构建了表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙肝嵌合病毒,提示以狂犬病病毒为载体发展新型丙肝载体疫苗在理论和技术上都是可行的.
- 杜加亮黄莹唐青王力华梁国栋
- 关键词：狂犬病病毒肝炎病毒属
- 狂犬病病毒N基因的杆状病毒表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用分子克隆的方法,将CVS-11株狂犬病毒N基因片段克隆入杆状病毒穿梭载体Bacmid中,构建出含CVS-11 NP基因重组杆状病毒表达质粒Bacmid-N;脂质体介导Bacmid-N转染Sf9昆虫细胞获得表达CVS-11 NP的重组杆状病毒(AcMNPV-N)。用ELISA、FA、SDS-PAGE和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析,证实CVS-11 NP为胞内表达,且具有天然核蛋白良好的免疫反应性,为进一步研制高效、敏感的狂犬病病毒检测试剂和建立实验室检测方法奠定基础。
- 曹蕾唐青陶晓燕黄莹杜加亮张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病毒N基因杆状病毒
- 1例潜伏期长达39年的狂犬病病例个案调查被引量：4
- 2009年
- 雷永良王晓光张守峰扈荣良李斐铭唐青
- 关键词：狂犬病潜伏期个案调查
- 抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 目的制备抗狂犬病毒单克隆抗体，为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经细胞克隆和间接ELISA筛选，获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价，用G蛋白亲和层析柱进行纯化，间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性。结果细胞融合率达100％，经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株，其腹水效价分别为1×10^4，1×10^5，1×10^4和1×10^5；4株单抗均为IgG类型且特异性好。结论制备的单抗具有良好特异性和敏感性。
- 曹蕾李雄张守峰李六斤扈荣良唐青
- 关键词：狂犬病病毒抗体单克隆
- 细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统辅助质粒的构建
- 2008年
- 目的构建细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统中所需的4个结构蛋白辅助质粒。方法利用RT-PCR方法扩增细胞适应株狂犬病毒的核蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、糖蛋白（G）、转录大蛋白（L）基因，测序结果正确后，分别连接表达载体，构建反向遗传所需的4个功能性蛋白辅助质粒。结果成功扩增4个结构基因，经测序完全正确，并成功构建反向遗传体系中N蛋白、P蛋白、G蛋白、L蛋白的辅助表达质粒，酶切鉴定完全正确。结论成功构建狂犬病病毒拯救系统的4个辅助质粒，为此细胞适应株狂犬病病毒的拯救奠定基础。
- 黄莹扈荣良唐青
- 关键词：狂犬病病毒质粒
- 浙江省丽水市狂犬病新发疫区病毒检测及在防制中的应用被引量：2
- 2009年
- 目的了解狂犬病毒在疫区犬间的流行状况。方法收集浙江省丽水市198份狂犬病新发疫区犬脑组织标本,用直接免疫荧光试验(DFA)特异性检测狂犬病毒抗原和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)特异性检测狂犬病毒核酸,确定犬感染狂犬病毒状况。结果犬脑组织DFA和RT-PCR平行检测阳性的标本13份,阳性率为6.57%(13/198),其中松阳县9份,占采集标本的69.23%(9/13),具有攻击人/犬史或者被犬攻击史的疑似狂犬病犬标本10份,占采集标本的76.92%(10/13)。结论免疫学和分子生物学两种方法平行进行犬狂犬病毒的实验室检测,可以更准确地进行狂犬病的实验室诊断。市民暴露于犬后要及时到所在地狂犬病暴露门诊严格按照国家相关标准及规范正确处理伤口并注射狂犬病疫苗及抗血清或人源免疫球蛋白。建议相关部门加强犬的管理,同时对犬进行全面的狂犬病疫苗免疫接种。
- 叶茂华王晓光雷永良陈秀英叶碧峰柳付明兰进权梅建华唐青
- 关键词：狂犬病狂犬病毒防制
- 浙江地区鼬獾和犬源狂犬病病毒分离株全基因组测序与分析被引量：2
- 2010年
- 测定浙江地区狂犬病病毒分离株（鼬獾和犬）全基因组序列,从分子水平对病毒进行遗传变异特征分析,了解狂犬病病毒在浙江的流行和变异情况以及目前浙江流行株的遗传学背景,以丰富中国狂犬病病毒街毒流行株的全基因组信息。脑内接种1-2日乳鼠分离狂犬病病毒,RT-PCR反应测定浙江地区狂犬病病毒分离株全基因组核苷酸序列,并进行编码蛋白和序列相似性比较及种系发生分析。测序获得狂犬病病毒浙江淳安鼬獾分离株F02、F04和松阳犬分离株D01、D02全基因组核苷酸序列信息：基因组全长11 923和11 925 nts,前导序列Leader长58nts,5个ORF为：NP（1 353 nts）; PP（894 nts）; MP（609 nts）; GP（1 575 nts）; LP（6 386 nts）,N-P-M-G间隔序列长2、5、5 nts; G-L基因间的伪基因Ψ长423 nts; Trailer尾长70 nts。核酸BLAST及多重序列比对分析显示浙江地区4个狂犬病病毒分离株的全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病病毒属的特征; 中国毒株之间特别是浙江同种动物狂犬病病毒之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高,浙江病毒全基因组序列编码蛋白氨基酸序列相似性高于核苷酸序列相似性,说明蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变; 浙江病毒负链RNA基因组5个基因编码氨基酸的长度没有变异,5个编码蛋白仅表现较少的序列变化; 浙江病毒与本研究选择的代表性引用街毒株或者来自街毒的减毒株的变异位点和变异类型相似,多重序列相似性的比较和种系发生分析显示所分离的狂犬病病毒浙江街毒株均属于基因1型,具有较独特的中国地域性特点,故本研究中的浙江地区分离株极有可能是自然界中固有的街毒株。
- 雷永良王晓光陶晓燕李浩孟胜利陈秀英柳付明叶碧峰唐青
- 关键词：狂犬病病毒全基因组
- 浙江省野生动物鼬獾狂犬病毒全基因组序列测定分析被引量：4
- 2009年
- 目的测定浙江省分离的2株野生动物鼬獾狂犬病毒株全基因组序列，从分子水平进行遗传变异特征分析，了解狂犬病毒在浙江省的流行和变异情况。方法RT-PCR测定鼬獾狂犬病毒株全基因组核苷酸序列，并进行基因序列和编码蛋白相似性比较及种系发生分析。结果测序获得2株鼬獾狂犬病毒全基因组核苷酸序列信息：基因组全长11923nts，leader长58nts，由5个编码区组成：NP（1353nts）、PP（894nts）、MP（609nts）、GP（1575nts）、LP（6386nts），N—P—M—G间隔序列长2、5、5nts；G—L基因间伪基因Ψ长423nts；trailer长70nts。核酸BLAST及多序列比对显示，浙江省鼬獾狂犬病毒株全基因组序列的组成和结构符合弹状病毒科狂犬病毒属特征；鼬獾病毒株负链RNA基因组5个基因编码氨基酸的长度没有变异，编码区基因没有发生重组，编码蛋白仅表现较少的序列变化，多数只发生碱基的替代；中国病毒株之间特别是同种动物狂犬病毒之间各个基因区域核苷酸与氨基酸序列相似性最高，鼬獾狂犬病毒基因组序列相似性在氨基酸水平明显高于核苷酸水平，蛋白质编码基因的核苷酸变异大多属于同义突变。结论鼬獾狂犬病毒与研究中选择的代表性疫苗株或者街毒株的变异位点和变异类型相似，多序列相似性比较和N基因种系发生分析显示，鼬獾狂犬病毒均属于基因1型，具有中国地域性特点，2株野生动物鼬獾狂犬病毒极有可能是存在于自然界中固有的街毒株。
- 雷永良王晓光柳付明陈秀英叶碧峰梅建华兰进权唐青
- 关键词：狂犬病毒全基因组
- 1996--2006年中国狂犬病流行特征分析被引量：51
- 2008年
- 目的分析1996-2006年中国狂犬病流行特征,探讨狂犬病流行相关因素,为狂犬病预防控制策略和措施的制定提供依据。方法收集1996-2006年中国狂犬病疫情资料,用Excel 2003和MapInfo 7.0软件对所有数据进行整理和计算,绘制相关统计图表,对中国近11年狂犬病流行情况、分布特征和疫情动态特征进行汇总分析。结果11年间全国共报告狂犬病14 065例;发病人数逐年上升;2001与2003年上升幅度最大。除青海与西藏外,共29个省份有狂犬病病例;发病人数居前5位的省份依次是广西、湖南、贵州、广东和江西,占全国病例总数的68.61%。男女性别比为2.20∶1;27.04%为15岁以下儿童;农民、学生和散居儿童发病居前3位,占全部病例的89.16%。62.36%病例发生在夏秋季节。结论应降低疫苗价格,加强高发地区狂犬病的防制,加强跨地区运输动物的检疫,加强农村地区犬的管理。
- 宋淼唐青冯子健李浩杜加亮梁国栋
- 关键词：狂犬病
- 浙江省山区狂犬病新宿主动物调查被引量：21
- 2009年
- 目的了解浙江省狂犬病疫区野生宿主动物种类及感染状况。方法采集浙江省丽水市和杭州市淳安县猫、鼬獾、黑线姬鼠、跳麂、野猪脑组织标本共160份，分别取大脑、中脑、小脑和海马回部位组织，用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒特异性抗原和RT-PCR方法检测狂犬病病毒特异性核酸，确定阳性标本。结果脑组织抗原印片经特异性抗狂犬病病毒核蛋白（NP）单克隆抗体免疫荧光染色后在荧光显微镜下可见大量的苹果绿荧光颗粒；狂犬病病毒NP特异性目的基因Nested-PCR得到与预期结果大小一致的扩增产物，两种方法同时检出狂犬病病毒阳性的野生宿主动物脑组织标本5份，其中鼬獾脑组织阳性标本4份，阳性率为8．33％（4／48）；黑线姬鼠脑组织阳性标本1份，阳性率为1．75％（1／57）；猫、跳麂、野猪脑组织未检出阳性标本。结论在浙江省生物多样性的山区检测出狂犬病病毒感染阳性的野生动物鼬獾和野鼠，从病原学角度说明鼬獾和野鼠可能是人间狂犬病的传染来源和狂犬病病毒的宿主动物。
- 雷永良王晓光李浩陈秀英叶碧峰柳付明兰进权叶夏良梅建华唐青
- 关键词：狂犬病宿主动物
