国家自然科学基金(81301738)
- 作品数：3 被引量：26H指数：2
- 相关作者：叶艳张林杰葛燕梅张旭东李群更多>>
- 相关机构：安徽医科大学澳大利亚纽卡斯尔大学更多>>
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- SHIP2通过上调Bim表达增强胃癌细胞BGC-823对紫杉醇的敏感性被引量：2
- 2014年
- 目的探讨SHIP2(SH2 domain containing inositol 5-phosphatase 2)基因转染人胃癌细胞BGC-823后对紫杉醇敏感性的影响。方法流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡率。应用免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白表达情况。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析mRNA的变化水平。将pCMV6-SHIP2质粒在脂质体介导下转染人胃癌BGC-823细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照组。将GV112-Puromycin空载体和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒颗粒分别感染BGC-823细胞,建立稳定细胞株,再将pCMV6-SHIP2质粒分别转染空载体和稳定干扰Bim表达细胞株。结果与SGC-7901细胞相比,BGC-823细胞对紫杉醇诱导的凋亡相对不敏感,0.3μmol·L-1紫杉醇诱导BGC-823 48 h后细胞凋亡率仅为(25.6±1.6)%,在紫杉醇作用不同时间点Bim蛋白和mRNA表达均无明显变化;与对照组相比,转染SHIP2基因能明显增加Bim的表达,紫杉醇作用48 h后,细胞凋亡率上升到(50.8±0.9)%;GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的BGC-823细胞,Bim的表达明显被抑制,在GV112-Puromycin-Bim慢病毒颗粒感染的稳定BGC-823细胞中转入pCMV6-SHIP2,紫杉醇作用48 h后,凋亡率为(27.6±1.6)%。结论转染外源性SHIP2基因能有效提高BGC-823细胞内Bim的表达,诱导BGC-823细胞凋亡,明显增加BGC-823细胞对紫杉醇的敏感性。
- 葛燕梅叶艳张林杰
- 关键词：胃癌BIM紫杉醇AKT
- PIB5PA对人黑素瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
- 2014年
- 目的 :探讨磷脂酰肌醇4,5-二磷酸5磷酸酶A(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 5-phosphatase A,PIB5PA)对人黑素瘤Mel-FH细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 :构建携带4-羟基三苯氧胺(4-hydroxytamoxifen,4-OHT)可调控基因表达系统的重组真核表达载体pF-5xUAS-SV40-PIB5PA,并将其感染人黑素瘤Mel-FH细胞,经嘌呤霉素和潮霉素B的双重筛选,成功获得稳定感染的Mel-FH.PIB5PA亚克隆细胞。应用蛋白质印迹法检测4-OHT诱导Mel-FH.PIB5PA细胞表达PIB5PA蛋白的最佳浓度和最适时间,应用细胞划痕实验和Transwell小室法检测Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测Mel-FH.PIB5PA细胞中磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-PKB,又称p-AKT)、磷酸化黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)和TIMP-2蛋白的表达。结果 :10 nmol/L 4-OHT处理黑素瘤MelFH.PIB5PA细胞16 h后可稳定诱导PIB5PA蛋白过表达。与未经4-OHT处理的Mel-FH.PIB5PA细胞比较,诱导PIB5PA过表达能显著抑制Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),并下调p-AKT、p-FAK、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 :外源性过表达PIB5PA可明显抑制人黑素瘤Mel-FH细胞的体外迁移和侵袭能力,其机制可能与蛋白激酶AKT和FAK的活性下调,从而下调MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1的相对表达水平有关。
- 叶艳李群葛燕梅张旭东张林杰
- 关键词：黑素瘤肿瘤浸润蛋白激酶类基质金属蛋白酶类
- TK1与肿瘤标志物在消化道肿瘤诊断及病理学特征的相关性被引量：24
- 2018年
- 目的探讨癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199)及细胞质胸苷激酶1(TK1)水平与胃癌、结直肠癌的诊断及严重程度的相关性。方法选取胃癌、结直肠癌147例次病例。其中胃癌76例次,结直肠癌71例次,选取70例次体检人员作为对照组。采用ELISA法检测患者CEA、CA199及TK1水平,TK1、CEA和CA199联合检测在消化道肿瘤诊断中的敏感性和特异性,收集各病例的病理学特征及TNM分期信息。结果胃癌患者TK1水平为(4. 0±2. 0) pmol/L,明显低于结直肠癌患者(4. 6±1. 8) pmol/L,差异有统计学意义(P <0. 05),TK1分别与CEA、CA199联合检测以及CEA和CA199联合检测结果显示,联合检测的受试者工作特征曲线(ROC)曲线下面积均大于0. 7,三项指标联合准确性最高;淋巴结转移、浸润深度大、肿瘤直径大、胃上部及低分化胃癌患者TK1、CEA及CA199水平均明显高于无淋巴结转移、浸润深度浅、肿瘤直径小、胃中下部及高分化(P <0. 01);结直肠癌浸润深度深、存在淋巴结转移、管腺癌、肿瘤直径> 5 cm及低分化病例CEA、CA199及TK1水平均明显高于结直肠癌浸润深度浅、无淋巴结转移、粘液腺癌、肿瘤直径≤5 cm及高分化病例(P <0. 01);胃癌患者TK1水平组内随TNM分期递增,差异有统计学意义(P <0. 05);结直肠癌患者CEA、TK1随TNM分期递增,差异有统计学意义(P <0. 05),TK1各TNM分期组间差异有统计学意义(P <0. 05)。结论CEA、CA199及TK1联合可更有效地诊断消化道肿瘤,与消化道肿瘤病理特征密切相关,TK1在判断消化道肿瘤病变部位及TNM分期中更有优势。
- 江蓓蕾鲍扬漪叶艳
- 关键词：胸苷激酶1肿瘤标志物消化道肿瘤病理学特征TNM分期
