新疆生产建设兵团医药专项基金(2012BA022)
- 作品数：30 被引量：73H指数：6
- 相关作者：张万江章乐吴芳吴江东张春军更多>>
- 相关机构：石河子大学石河子市人民医院新疆医科大学第五附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与结核杆菌持留性的相关性研究被引量：1
- 2015年
- 目的:本研究通过诱导结核杆菌在低氧环境中进入持留状态,比较分析不同时间点、不同环境下结核杆菌Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异,探讨研究Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性的调控作用。方法:本实验以结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(以下简称为H37Rv菌株)为研究对象,在低氧、有氧环境下进行培养,分别提取不同时间点每组样本菌株的总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达;比较分析不同时间点、不同环境下的各结核杆菌菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异。结果:在不同时间点对低氧环境下菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa的表达水平进行检测,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达水平:低氧环境下,与0 d比较,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.43、2.76倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.38、1.91、2.54、3.28倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.75、2.37、2.67倍,Mpa基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.21、2.63倍(P<0.05);以有氧环境组做对照,低氧环境下,相同时间点,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.85、2.81、2.93倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.20、1.76、2.01、3.01倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.57、2.29、2.29倍,Mpa基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.16、1.58、2.16、2.69倍(P<0.05)。结论:低氧环境下,不同时间点,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量存在差异;以有氧环境组作对照,相同时间点,低氧环境下与有氧环境下Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量也存在差异。Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性具有一定的调控作用。
- 朱彬雷英吴芳张辉张春军章乐吴江东曹旭东邬博何丽张玉清李瑞山王钊张万江
- 关键词：结核杆菌
- 不同毒力结核杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞铁蛋白及铁转运蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的:探讨不同毒力的结核杆菌分别感染小鼠肺泡巨噬细胞后铁蛋白(Fn)和铁转运蛋白(FPN)表达量及其时相性变化。方法:利用制备的结核杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)和卡介苗菌株(以下简称BCG)菌悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型。各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法检测各组感染组小鼠肺泡巨噬细胞中Fn和FPN的表达含量;应用Western blot技术检测上述时间点各组感染的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn的表达量。结果:用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达,结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37Rv株组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最低,差异有统计学意义(P<0.05)。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内FNP的表达,结果显示:不同毒力的结核杆菌菌株感染小鼠肺泡巨噬细胞后,各感染组内小鼠肺泡巨噬细胞FPN随处理时间延长表达逐渐降低;于感染第5天开始下降明显,第7、9天最低。H37Rv株组和BCG组表达接近,于第5、7、9天明显低于正常对照组FPN的表达量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:结核杆菌感染导致巨噬细胞内Fn与FPN的表达均降低,并且感染巨噬细胞Fn和FPN的表达与结核杆菌的毒力强弱关系无相关性。
- 庄睿王霞张锋宝音章乐吴芳吴江东张春军张辉李文娟梁晨樊超张万江
- 关键词：结核杆菌巨噬细胞铁蛋白
- 结核杆菌PhoPR双组分系统与广泛流行的耐药结核杆菌耐药性的相关性研究
- 2013年
- 目的：通过比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异，探讨研究结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌耐药性是否具有相关性。方法以新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象，分别提取结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株（ INH-MTB）、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株（ RFP-MTB）、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株（ SM-MTB）、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株（ EB-MTB）、耐多药结核杆菌临床分离株（ MDR）总RNA，并进行纯度鉴定，运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法，分别检测各组结核杆菌菌株的PhoP基因和PhoR基因的表达，比较分析不同耐药的结核杆菌临床分离株PhoP基因和PhoR基因的表达水平的差异。结果与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比，PhoP基因在RFP-MTB中的表达上调1．48倍，在MDR中的表达上调2．74倍，差异有统计学意义（P＜0．05）；与MDR相比，PhoP基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达下调0．70、0．50、0．25和0．21倍，差异有统计学意义（P＜0．05）。与结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株相比，PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和EB-MTB中的表达分别上调6．33、4．56、2．34和1．85倍，在MDR中的表达上调9．06倍，差异有统计学意义（ P＜0．05）；与 MDR相比，PhoR基因在INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB 和EB-MTB 中的表达下调0．36、0．54、0．35和0．19倍，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论在结核分枝杆菌临床分离药物敏感菌株、INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB、EB-MTB和MDR中，结核杆菌PhoP和PhoR基因的表达有差异，结核杆菌PhoPR双组分系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌的耐药性具有相关性。
- 李文娟宝音王霞张峰梁晨庄睿樊超庹清章张春军张辉吴芳吴江东章乐张万江
- 关键词：结核分枝杆菌耐药性
- 结核杆菌对巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 为了研究结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株(BCG)分别感染巨噬细胞RAW264.7细胞株对细胞内转铁蛋白受体和铁蛋白表达量的时相变化及意义,分别于感染后1,6,12,18,24 h,应用ELISA和Western blot检测各组巨噬细胞中TfR和Fn的表达量。ELISA检测结果显示,各组感染巨噬细胞上清液中TfR表达量均高于对照组,在感染12,18 h差异最明显,具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示:于模型建成后1,6,18 h各感染组差异有统计学意义(P<0.05)。用ELISA和Western blot检测显示各组小鼠巨噬细胞内Fn随时间变化表达逐渐增强,在1 h时Fn的表达为对照组高于H37Rv组和BCG组;6 h后,感染组表达逐渐高于对照组,12 h时,H37Rv组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),在18 h和24 h时,H37Rv组>BCG组>对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结核分枝杆菌感染导致巨噬细胞内TfR和Fn表达量增高,且与菌株毒力强弱有关,毒力强的菌株感染巨噬细胞的TfR和Fn的表达量更高。
- 李微董伟杰刘云霞庹清章刘丹霞吴芳章乐吴江东张万江
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞转铁蛋白受体铁蛋白
- PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv（以下简称H37Rv）,检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导入H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平。结果成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv。应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300～2 500V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高。结论成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达量较高。
- 王钊雷英吴芳章乐曹旭东吴江东张辉张春军朱彬邬博何丽张玉清李瑞山庄睿梁晨樊超李文娟张万江
- 关键词：结核分枝杆菌过表达
- 结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性研究被引量：6
- 2014年
- 目的通过比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异,探讨Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性的相关性。方法分别提取卡介苗菌株(BCG)、结核分枝杆菌国际标准无毒珠(H37Ra)、结核分枝杆菌国际标准强毒珠(H37Rv)、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达,比较分析不同毒力结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达差异。结果 H37Rv菌株和新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株与BCG菌株相比,Pup基因表达分别上调1.67、2.65倍,Dop基因表达分别上调2.42、3.69倍,PafA基因表达分别上调4.09、7.36倍,Mpa基因表达分别上调2.65、3.91倍,差异有统计学意义(P<0.05);BCG、H37Ra、H37Rv菌株与新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株相比,Pup基因表达分别下调62%、59%、37%倍,Dop基因表达分别下调63%、64%、34%倍,PafA基因表达分别下调87%、86%、44%倍,Mpa基因表达分别下调64%、67%、32%倍,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在BCG、H37Ra、H37Rv、新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株Pup、Dop、PafA和Mpa基因的表达有差异性,且与菌株毒力呈正相关。Pup-蛋白酶体系统与不同毒力结核分枝杆菌致病性具有相关性。
- 朱彬吴芳章乐吴江东张辉张春军曹旭东邬博何丽张玉清李瑞山王钊庄睿李文娟梁晨樊超张万江
- 关键词：结核分枝杆菌毒力
- 不同毒力结核分枝杆菌感染对巨噬细胞Caspase-3及Bcl-2表达的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。方法用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗(BCG)分别感染巨噬细胞RAW264.7株,同时设空白对照组。分别在感染后1、6、12及24h,应用Western blot和RT-PCR检测Caspase-3和Bcl-2蛋白及其基因表达水平。结果巨噬细胞感染H37Rv和BCG后Caspase-3蛋白表达均增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);BCG感染组在感染后1、12和24hCaspase-3蛋白表达量与H37Rv感染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。H37Rv和BCG感染组Caspase-3基因相对表达量增高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);BCG感染组在感染1h和24hCaspase-3基因表达水平与H37Rv组比较差异有统计学意义(P<0.05)。H37Rv和BCG感染组Bcl-2蛋白表达量降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);H37Rv感染组在感染后1、6和24hBcl-2蛋白表达量与BCG感染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。H37Rv和BCG感染组Bcl-2基因相对表达量降低,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);H37Rv株感染组感染后1、12和24hBcl-2基因表达量与BCG感染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞Caspase-3及Bcl-2的表达存在差异。
- 董伟杰李微刘丹霞刘云霞庹清章吴芳章乐张万江
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞CASPASE-3
- 结核分枝杆菌PhoP/PhoR基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定被引量：2
- 2013年
- 为构建结核杆菌PhoPR双组分系统PhoP、PhoR基因的重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR并对其进行鉴定。采用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA为模版,利用PCR技术分别扩增PhoP、PhoR基因编码序列,先克隆于T-Vector pMD19(Simple),再亚克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取所得的阳性克隆子获得重组表达质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,通过PCR及双酶切鉴定。结果显示,结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株基因组DNA中扩增出的PhoP、PhoR基因与GenBank公布的序列一致,经过PCR及双酶切鉴定,表明PhoP、PhoR基因均成功插入了pMV361穿梭载体。由此可知,成功构建了重组穿梭质粒pMV361-PhoP、pMV361-PhoR,为进一步研究PhoPR双组分系统奠定了基础。
- 梁晨姜晓霞张锋王霞吴芳章乐吴江东张春军张辉樊超庄睿李文娟张万江
- 关键词：结核杆菌PHOP
- 不同毒力结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用研究被引量：7
- 2013年
- 目的探讨不同毒力结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用。方法以结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(简称H37Rv菌株)和卡介苗菌株(简称BCG)分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,在感染1、6、12、24h后,分别采用化学比色法检测感染巨噬细胞超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性变化,并测定感染巨噬细胞的丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量变化。结果 RAW264.7感染BCG后细胞内SOD、NOS活性和NO含量逐渐升高,感染24h分别为(32.82±0.54)U/ml、(12.16±0.29)U/ml和(116.42±3.23)μmol/L,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);MDA含量逐渐下降,感染24h时为(0.59±0.08)nmol/ml,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);RAW264.7感染H37Rv菌株后细胞内SOD、NOS和NO含量逐渐下降,感染24h分别为(15.90±0.20)U/ml、(2.32±0.11U/ml)和(13.74±1.01μmol/L),与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05):MDA含量逐渐增加,感染24h时为(5.21±0.39)nmol/ml,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论低毒力和高毒力结核分枝杆菌分别对感染宿主巨噬细胞的应激发挥诱导和抑制等不同作用。
- 刘丹霞董伟杰庹清章刘云霞李微章乐吴芳张万江
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞应激
- 泛素样蛋白-蛋白酶体系统与结核分枝杆菌致病性的相关性研究进展被引量：2
- 2014年
- 结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)中的泛素样蛋白-蛋白酶体系统(prokaryotic ubiquitin-like protein-proteasome system,PPS),主要介导和调控MTB体内蛋白质的降解。在特定环境下,MTB中泛素样蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)选择性标记特定的蛋白质,并在辅助因子的帮助下将靶蛋白送入蛋白酶体内降解,对MTB在宿主体内的生长、繁殖及致病性发挥重要调控作用。本文首先简单介绍了MTB中Pup、蛋白酶体的结构特点、作用及PPS降解靶蛋白的主要过程,接着重点介绍了PPS对MTB致病性的调控机制,及如何通过改变PPS作用来降低MTB致病性等一些最新进展,希望能够为寻找新型抗结核药物提供方向。
- 张玉清张万江
- 关键词：结核分枝杆菌蛋白酶体
