国家重点实验室开放基金(303040966014)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 靶向人Trb3基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建并鉴定靶向果蝇同源蛋白3(tribbles-related protein 3,Trb3)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并检测其对靶基因的沉默效应。方法根据Genbank数据库中Trb3序列,设计、合成3对互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆到线性化的pSUPER.retro.puro质粒载体中,并对重组质粒进行酶切分析及测序鉴定;脂质体介导重组质粒和pSUPER.retro.puro Vector转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株,RT-PCR和Western-Blot检测其对靶基因Trb3的表达影响。结果酶切及测序鉴定重组质粒pSUPER.puro-shTrb3序列正确;转染重组质粒后舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中Trb3 mRNA和蛋白表达水平相对于空载体组明显下降,shRNA可以特异性沉默Trb3基因。结论成功构建了靶向人Trb3基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究Trb3在舌鳞状细胞癌和其他头颈肿瘤中的作用奠定了基础。
- 文浩杰隋军孙传政蒋玉娥曾木圣李满枝张晶李科李晓江王虎
- 关键词：头颈部肿瘤RNA干扰脂质体真核表达载体
- Tribbles相关蛋白3及磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶在舌体鳞状细胞癌中的表达及临床意义
- 2012年
- 目的研究Tribbles相关蛋白3(tribblesrelated protein 3,TRB3)及磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phospho-AKT,p-AKT)在人舌体鳞状细胞癌(oraltongue squamous cell carcinoma OTSCC)中的表达及临床意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法检测18例OTSCC及对应癌旁黏膜组织中TRB3及p-AKT的表达,免疫组化方法检测128例OTSCC及30例癌旁黏膜石蜡标本中TRB3及p-AKT的表达,分析其表达与OTSCC预后的关系。结果 RT-PCR显示TRB3 mRNA在15例OTSCC组织表达较癌旁黏膜组织中升高(83.3%,15/18);Westernblot显示TRB3蛋白及p-AKT蛋白在13例OTSCC组织中的表达均较癌旁黏膜组织中升高(72.2%,13/18):免疫组化显示128例OTSCC标本中,TRB3蛋白高表达率为49.2%(63/128),p-AKT蛋白高表达率为68.8%(88/128),均较癌旁黏膜表达增高(P均≤0.001),且均与OTSCC的T分级、N分级及复发相关,p-AKT蛋白及TRB3蛋白的表达呈负相关(r=-0.27,P<0.01)。结论 TRB3及p-AKT在OTSCC中高表达并且与肿瘤预后相关。
- 张晶孙传政文浩杰郭朱明曾木圣蒋玉娥何晓光
- 关键词：舌肿瘤肿瘤鳞状细胞逆转录聚合酶链反应内质网
