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吉林省卫生厅科研基金(20122017)
作品数:
2
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相关作者:
王玲玲
韩旭
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2013
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核心蛋白聚糖蛋白对人结肠癌HCT-8细胞的生物学作用
2013年
为探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)蛋白对人结肠癌HCT8细胞的生物学作用,本实验将重组载体PcDNA3.1DCN/His(MDCN)稳定转染入HCT一8细胞,并将携带有目的基因的细胞进行扩增培养,然后应用RT—PCR及WesternBlot法对M—DCN在细胞mRNA及蛋白水平的表达分别进行鉴定,应用MagExtractor方法提取携带有M—DCN基因组HCT-8细胞(HCT-8-DCN)中的DCN蛋白,应用Bradford法测定提取蛋白的含量;同时,按DCN蛋白30μg/ml对HCT-8细胞进行培养,应用MTT法检测细胞增殖活力,细胞培养96h后用流式细胞术分析细胞周期。结果显示,RT—PCR及WesternBlot实验均可见到目的条带,证实MDCN转染HCT8细胞成功并实现稳定表达。实现了针对6个组氨酸标签使用MagExtractor方法对DCN蛋白的提取。加入DCN蛋白培养HCT-8细胞组细胞生长曲线呈现为生长抑制;流式细胞术结果提示G1期细胞显著增多。结果表明,DCN蛋白具有抑制HCT8细胞增殖的作用。
韩旭
王玲玲
关键词:
核心蛋白聚糖
蛋白纯化
HCT-8细胞
生物学作用
核心蛋白聚糖基因改造及真核表达载体的构建
2013年
目的改造核心蛋白多糖基因(DCN)并构建真核表达载体,为进一步探讨DCN蛋白的肿瘤抑制作用奠定基础。方法以含有重组DCN的质粒pBluescript为模板采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段。真核表达载体pcDNA3.1及PCR产物经EcoRⅠ及XhoⅠ双酶切后连接,转化入大肠杆菌JM109中,获得重组载体pcDNA3.1-DCN/His(M-DCN),进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得目的片段(1 119 bp),重组载体pcDNA3.1-DCN/His经双酶切及测序证实,DCN的cDNA片段正确插入真核表达载体中。结论成功构建含有M-DCN基因的真核表达载体。
韩旭
王玲玲
关键词:
核心蛋白聚糖
真核表达载体
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