广东省科技计划工业攻关项目(2002C30109)
- 作品数：29 被引量：110H指数：6
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- 相关机构：广东医学院深圳市儿童医院广东药学院更多>>
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- 山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性被引量：19
- 2006年
- 研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA表达水平;通过Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性(IC50=1.88μmol/L)和HL-60细胞内的CK2活性,对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB).山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响.山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明,山奈酚与ATP(Ki=1.14μmol/L)及酪蛋白(Ki=1.03μmol/L)均呈非竞争性抑制作用.结果提示,山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂,其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关.
- 林小聪刘新光陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2山奈酚酶动力学
- 小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、表达及活性测定被引量：3
- 2003年
- 通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2 β亚基编码区cDNA ;构建其表达质粒并经测序证明其编码小鼠蛋白激酶CK2 β亚基 ,但与两种已报道的小鼠CK2 β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异 ,与大鼠、猪、兔和人CK2 β亚基cDNA的编码区相应碱基序列则一致。将其在表达菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,出现一 2 6kDa分子量蛋白过度表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 31 7%,但大多数以不溶形式存在。Westernblot鉴定表明 :过度表达产物能与抗人CK2 β亚基抗体发生特异性免疫反应。当CK2α和 β亚基以 1:1摩尔比混合时 ,构成性的CK2全酶显示出最大活性 ,直接表明CK2 β亚基对CK2α有激活作用。这些结果有力地证明了克隆表达的重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2
- 陈小文郑克勤梁景耀刘新光梁念慈
- 关键词：小鼠蛋白激酶分子克隆DNA测序免疫印迹
- 9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析被引量：7
- 2007年
- 目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 林小聪李春梅刘新光陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2蒽醌类衍生物IC50
- 藤黄菌素和山萘黄素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的抑制作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察藤黄菌素和山萘黄素对HL-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法分别采用台盼蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果应用台盼蓝拒染法,藤黄菌素和山萘黄素能显著抑制HL-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明,藤黄菌素和山萘黄素作用2小时可使HL-60细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论藤黄菌素和山萘黄素是两种能够明显抑制HL-60细胞体外增殖,影响其细胞周期分布的黄酮类化合物。
- 林小聪刘新光陈伟珠梁念慈
- 关键词：白血病细胞系细胞周期
- 山萘黄素对人白血病细胞系HL-60体外增殖的抑制作用
- 2006年
- 目的观察山萘黄素对H L-60细胞体外增殖的抑制作用及其对细胞周期的影响。方法分别采用台盘蓝拒染法及流式细胞术,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率及细胞周期的分布。结果应用台盘蓝拒染法,山萘黄素能够显著地抑制H L-60细胞的体外增殖并且呈现时效及量效关系。流式细胞术的结果表明:山萘黄素作用2h可使HL-60细胞的细胞周期分别阻滞于G2/M期和G0/G1期。结论山萘黄素能够明显抑制HL-60细胞体外增殖,影响其细胞周期分布。
- 陈伟珠林小聪刘新光
- 关键词：白血病细胞系增殖细胞周期
- 3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析被引量：3
- 2004年
- 目的观察3,6二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂。方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ32P]ATP的[32P]放射活度来检测。结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致。3,6二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为1393μmol·L-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为1067μmol·L-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为1734μmol·L-1。结论3,6二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。
- 李春梅刘新光林小聪陈小文梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶黄酮酶动力学
- 人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定被引量：25
- 2004年
- 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .
- 陈小文刘新光梁景耀梁念慈
- 关键词：大肠杆菌克隆纯化重组蛋白
- 蛋白激酶CK2的研究进展被引量：19
- 2003年
- 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶。近年来 ,对蛋白激酶CK2的研究也取得了一些重要进展 ,尤其是蛋白激酶CK2的结构及其作用底物 ,蛋白激酶CK2与肿瘤及细胞凋亡的关系 。
- 黄功华刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2底物肿瘤细胞凋亡
- 藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用被引量：2
- 2006年
- 目的:观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型.方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ32P]ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用LineweaverBurk作图法分析其动力学.结果:藤黄菌素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=0.86μmol/L).酶动力学分析表明,藤黄菌素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11μmol/L).结论:藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.
- 林小聪刘新光陈小文陈伟珠梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶
- 重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定被引量：1
- 2003年
- 目的 研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法 将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose柱层析分离 ,SDS PAGE银染。结果 重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为 4 2ku蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 30 6 %。从2 87mg可溶性蛋白质中得到 4 7mg纯化蛋白。SDS PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的CK2α和 β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。
- 梁景耀陈小文刘新光梁念慈
- 关键词：原核表达蛋白质纯化
