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中国八省市食品来源单核细胞增生李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分析被引量：6: 2007年; 目的采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析方法对单核细胞增生李斯特菌（Lm）进行基因分型,初步建立中国Lm的基因分型数据库。方法按照标准化的Lm-PFGE方法对来自国内8个省市、多种食品来源的118株Lm进行了PFGE分型。结果 118株Lm分成了39种带型,其中GX6A160004型有37株菌,占分析菌株的31．36%,是主要型别。结论初步建立了中国单核细胞增生李斯特菌用于网络监测分析（PulseNet China）的基础数据库,发现同型菌株在全国多个地区广泛存在。; 祝仁发宫照龙叶长芸崔志刚金东冉陆许珂王连秀陈伟伟; 关键词：单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

肠侵袭性大肠埃希菌Tat蛋白运输系统与其生理功能关系研究: 2013年; 目的构建TatABC基因缺失株,并探讨其与肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)生理功能的关系。方法利用一步法基因缺失方法,敲除EIEC菌株的TatABC基因,探索该基因对EIEC形态、生长、生化及跨膜转运等生理功能的影响。结果TatABC基因缺失株的EIEC在镜下呈链状排列,在LB培养基上生长显著变慢;生化反应无明显变化;在厌氧条件下,由于不能转运TMAO还原酶,失去了在M9培养基上下生长的能力。结论 EIEC的Tat蛋白运输系统与其生理功能密切相关。; 宫照龙叶长芸吴景欢张敏卓勤; 关键词：生理功能

致泻性大肠杆菌和福氏2a志贺氏菌染色体上毒力岛和基因组岛插入相关的tRNA位点的研究被引量：1: 2007年; 目的探讨毒力岛及外源DNA片段的插入与异常tRNA位点的相关性。方法采用PCR和杂交的方法,从异常tRNA位点寻找致泻性大肠杆菌和志贺氏菌的福氏2a菌基因组中可能的毒力岛或基因组岛。以Escherichia coli K12MG1655序列中的86个tRNA位点的45个区域设计引物,对与K12亲缘较近的几类菌株的相关tRNA及其临近序列的完整性进行了初筛,对发现异常者进一步从其内部补充引物扩增证实,并联合杂交方法进行验证,以已知的E.coli O157∶H7EDL933和S.flexneri2a301的序列来对比PCR结果。结果菌株EDL933,S.flexneri2a301,EPEC2348/69,ETEC10407,EIEC8401,E.coliO157∶H78823/64,EAEC O42,E.coli O25F171中异常tRNA位点的个数分别是14,18,15,14,15,11,21,19。通过序列比对EDL933中8个tRNA位点有O岛插入,S.flexneri2a301中有6个插入了毒力岛,其余的位点均有外源片段插入或原有片段缺失。结论毒力岛及外源DNA片段的插入与异常tRNA位点密切相关。; 王蕾叶长芸赵爱兰孙晖徐建国; 关键词：TRNA PCR

猪链球菌脉冲场凝胶电泳分析方法的建立被引量：1: 2008年; 目的建立一种可共享的猪链球菌脉冲场凝胶电泳分析（PFGE）方法。方法利用PulseNet技术优化猪链球菌PFGE分子分型方法，提出新的分析方案，包括胶块的制备、内切酶的选择、电泳条件等。利用DNAStar的Mapdraw软件对猪链球菌基因组序列进行分析，发现在242种内切酶中，SwaⅠ、SmaⅠ、ApaⅠ种酶比较适合。结果通过对34个血清型共100株菌的分析，发现使用SwaⅠ可获得59种带型，使用SmaⅠ可获得53种带型，使用ApaⅠ可获得43种带型。其中以SwaⅠ的分辨率最好。结论提出猪链球菌的SwaⅠPFGE分析方法，并对条件进行优化，较原方法所需时间短、图像清晰。更具有可重复性，基本具备推广的条件。; 王丽丽叶长芸许彦梅崔志刚景怀琦金东杜华茂张守印白雪梅赵爱兰徐建国; 关键词：猪链球菌脉冲场凝胶电泳分析内切酶血清

荧光定量PCR技术用于模拟临床标本单增李斯特菌检测的研究被引量：9: 2009年; 目的利用荧光定量PCR(real-time PCR)技术,建立针对模拟临床标本中单增李斯特菌快速检测方法。方法以单增李斯特菌特异性基因hlyO的部分片段作为靶基因,克隆到pMD18-T载体,制作标准曲线,以确定方法的检测下限。利用各种血清型单增李斯特菌以及常见致病菌(如副溶血弧菌、霍乱弧菌、沙门菌、O157∶H7大肠杆菌等)验证引物探针的特异性,通过制备模拟粪便和血液感染标本,直接提取DNA进行检测,以达到快速检测的目的。结果采用real-time PCR技术对模拟临床标本检测结果显示,只有单增李斯特菌有荧光信号,其他常见致病菌以及李斯特菌属中的无害李斯特菌均没有荧光信号;由标准曲线可知该方法可以检测到22copy/反应管的目的基因,而粪便中6.35×103CFU/g和血液中7.0×102CFU/ml的细菌含量即可被检出;粪便标本在2h内可出报告,血液标本1.5h即可出报告。结论以hlyO为靶基因的Real-time PCR单增李斯特菌的检测技术具有特异性好、敏感性高、快速易操作等优点,可用于临床标本的快速诊断、疾病监测和疫情暴发的病原调查。; 王艳赵爱兰叶长芸; 关键词：单增李斯特菌 PCR

肠侵袭性大肠杆菌tatABC基因缺失株的生物学特性被引量：1: 2013年; 【目的】研究双精氨酸运输系统(Tat)与肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)生物学特性之间的关系。【方法】通过同源重组的方法,构建EIEC的tatABC基因缺失菌株以及互补菌株,并探索其对细菌形态、底物转运功能以及对HeLa细胞和豚鼠角膜侵袭力的影响。【结果】TatABC基因缺失株细菌形态变化明显,底物转运功能丧失,细菌侵袭力也显著减弱(缺失株侵入HeLa细胞数量明显减少,致豚鼠角膜病变能力明显减弱),而互补菌株在上述方面较接近野生株。【结论】EIEC的Tat蛋白运输系统与EIEC的生物学特性有密切关系。; 宫照龙叶长芸刘小兵张敏卓勤; 关键词：生物学特性毒力

118株单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测被引量：25: 2007年; 目的了解中国单核细胞增生李斯特菌(Lm)的毒力基因分布情况。方法对Lm的6个毒力基因(hly、prfA、plcB、inlA、actA、iap)分别设计聚合酶链反应(PCR)引物,建立PCR检测方法。对hly、plcB、iap3个基因的PCR方法进行了特异性试验。结果对国内多个地区多种来源的118株Lm进行了PCR检测,结果表明除2株菌不含prfA基因外,其他菌株均包含6个毒力基因。PCR引物特异性试验结果表明hly、plcB、iap3个基因的PCR引物特异性良好,可用于Lm的鉴定。结论Lm普遍具有毒力基因,具有潜在的爆发风险,应加强对其监测。; 宫照龙祝仁发叶长芸冉陆许珂王连秀陈伟伟; 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌毒力基因 PCR

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国家自然科学基金(30470095)