四川省科技支撑计划(12ZC0909)
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
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- 脓毒症大鼠大脑皮质含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3表达的意义被引量：4
- 2014年
- 目的 探讨脓毒症大鼠大脑皮质神经元含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）表达的意义.方法 行盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症模型.70只30日龄健康雄性Wistar大鼠,按简单随机法分为CLP组（50只）和对照组（20只）.CLP组于CLP手术后6h、12 h、24 h、48 h,分别取5只大鼠做神经行为学检查,然后处死,取脑组织,采用免疫荧光染色和Western blot法检测大鼠大脑皮质凋亡蛋白caspase-3的表达.对照组不给予CLP,其余处理同CLP组.结果 CLP手术后12 h、24 h和48 h大鼠的神经行为学评分均明显低于对照组（=3.651、3.773、7.155,P均＜0.05）,且随着时间变化,大鼠的神经行为评分逐渐降低,大鼠的整体情况越来越差.免疫荧光检测表明：对照组大鼠大脑皮质中仅表达微量的caspase-3蛋白,而在CLP手术后12 h,脓毒症大鼠大脑皮质中caspase-3蛋白表达明显增加.Western blot检测表明：CLP手术后6h、12 h和24h大鼠大脑皮质caspase-3蛋白表达均明显高于对照组（P均＜0.05）.CLP手术后6h,caspase-3蛋白表达开始升高,12 h达高峰,48 h下降.结论 脓毒症时大鼠的神经行为学评分降低,大脑皮质神经元凋亡蛋白酶caspase-3表达上调.
- 苏云洁李熙鸿杨欣王静屈艺母得志
- 关键词：脓毒症皮质
- 脓毒症对大鼠海马区caspase-3表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨脓毒症对大鼠海马区神经元的凋亡蛋白酶caspase-3表达的影响。方法 80只30日龄健康雄性Wistar大鼠,随机分为盲肠结扎穿孔术(CLP)组(n=50)和对照组(n=30)。CLP组采用CLP建立脓毒症模型,对照组行假手术不造成脓毒症模型。于手术后6、12、24 h,CLP组和对照组分别取10只大鼠,5只做神经行为学评分,另外5只处死取脑,采用蛋白免疫印迹法观察caspase-3的表达,术后24 h,两组各取3只大鼠,采用免疫荧光检测caspase-3的表达。结果对照组大鼠大脑海马区仅微量表达caspase-3,神经行为学评分较高。CLP组大鼠caspase-3的表达量于CLP后6 h就开始升高,24 h达高峰,均明显高于对照组(P<0.05),大鼠的神经行为学评分在CLP后6 h开始降低,并随着时间逐渐下降,均明显低于对照组(P<0.05)。结论脓毒症脑损伤时大鼠的神经行为学评分降低,海马区神经元caspase-3表达上调,并随时间变化而波动。
- 苏云洁李熙鸿杨欣王静屈艺
- 关键词：脓毒症海马凋亡CASPASE-3
- 免疫相关GTP酶M1在脓毒症诱导脑损伤小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨免疫相关GTP酶M1(immune-related GTPase M1,IRGM1)在脓毒症诱导脑损伤(sepsis-induced brain injury,SIBI)小鼠皮质神经元细胞自噬中的作用。方法:将野生型和IRGM1基因敲除小鼠各60只分为野生型假手术(sham-operated wild-type,SWT)组、野生型模型(model wild-type,MWT)组、基因敲除假手术(sham-operated knockout,SKO)组和基因敲除模型(model knockout,MKO)组。模型组行小鼠盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP),CLP后6 h行神经行为学评分,如神经生物学低于6分,诊断为SIBI;假手术组只打开腹腔,未行CLP。采用HE染色观察小鼠大脑皮质区病理学改变;电子显微镜下观察小鼠皮质神经元细胞自噬的超微结构;实时定量PCR检测IRGM1和INF-γm RNA在小鼠大脑皮质组织中的表达;Western印迹检测小鼠大脑皮质组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)-II,LC3-I,SQSTM1,IRGM1的蛋白相对表达量;免疫荧光法观察IRGM1在小鼠大脑皮质神经元中的表达。结果:电子显微镜显示,与SWT组比较,MWT组在CLP后12或24 h小鼠皮质神经元内质网扩张、线粒体肿胀、自噬体数量增加。Western印迹结果显示,CLP后6 h小鼠大脑皮质组织LC3-II表达开始增加,高表达维持至CLP后96 h,相反,SQSTM1在CLP后6 h开始下降。与SWT组比较,MWT组在CLP后12 h小鼠大脑皮质组织中IRGM1的m RNA和蛋白表达水平明显上调,同时,IFN-γ的m RNA表达也明显增加(P<0.05)。双色免疫荧光检测结果显示,CLP后24 h,与SWT组比较,MWT组小鼠皮质神经元中IRGM1表达明显上调。SWT组和SKO组小鼠大脑皮质细胞中自噬活性的基线水平相当低,几乎无LC3-II的表达,而SQSTM1表达均很高。但是,CLP后12 h,MWT组LC3-II表达明显升高,SQSTM1表达下调(P<0.05),而IRGM1基因敲除的MKO组小鼠大脑皮质组织中几乎无LC3-II,SQSTM1的表达明显上调。CLP后6 h,MWT组SIBI发生率90%(27/30),MKO组发生率96.67%(29/30)。CLP后12 h,MKO组小鼠神经生物学评分明显低于MWT组(4
- 黄群陈斌陈斌李雅斐
- 关键词：小鼠
- EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251抗瘤作用初步研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨EV71对人恶性胶质瘤细胞株U251的生长、凋亡和人端粒酶反转录酶（hTERT）表达的影响。方法采用RPMI1640培养U251细胞，培养24h后随机分为实验组和对照组，实验组按感染复数值为1加入EV71，并共培养72h，对照组不加EV71。加入EV71后0h、24h、48h和72h用倒置显微镜观察U251细胞形态和生长情况，流式细胞仪测定U251凋亡率，半定量RT—PCR检测hTERT的相对表达水平。结果倒置显微镜观察发现，与对照组比较，实验组加入EV71后24h，U251细胞生长明显受到抑制，48h和72h时U251细胞明显皱缩、变小、形态不规则，而对照组细胞则大小均匀。流式细胞仪检测发现，实验组加入EV71后24h、48h和72h，U251细胞的凋亡率均明显高于对照组[24h：（12．55±2．38）％比（1．42±0．21）％，48h：（65．60±8．48）％比（1．42±0．17）％，72h：（87．52±3．05）％比（1．41±0．16）％，P均=0．000]，且细胞凋亡率逐日升高，对照组细胞凋亡率无明显变化。实验组加入EV71后24h、48h和72h，U251细胞的hTERT相对表达水平均明显低于对照组[24h：（0．58±0．05）比（0．89±0．05），48h：（0．23±0．04）比（0．89±0．03），72h：（0．10±0．03）比（0．90±0．06），P均=0．000]，且表达水平逐日下降，对照组表达水平无明显变化。结论EV71能有效抑制U251细胞的生长，诱导细胞凋亡，具有潜在的抗瘤作用，其作用机制可能部分与下调U251细胞的hTERT表达有关。
- 李熙鸿王静于凡屈艺
- 关键词：人端粒酶反转录酶EV71U251细胞
