国家自然科学基金(30672771)
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 相关作者：李锦毅唐红卫张建永司今姜伟更多>>
- 相关机构：武警总医院辽宁医学院中国人民武装警察部队总医院更多>>
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- 维甲酸对胃癌生长和肝转移抑制作用的实验研究
- 2009年
- [目的]研究维甲酸(RA)对裸鼠原位荷人胃癌细胞BGC-803移植瘤和肝转移的抑制作用。[方法]建立人胃癌裸鼠原位种植肝转移模型,分为2组,对照组和RA组,种植后第5天开始,分别自腹腔注射0.85%氯化钠、RA(1 mg/kg),每日1次,第8周处死动物,检测抑瘤率、胃癌细胞凋亡指数(AI),观察肿瘤细胞肝转移以及金属基质蛋白酶2(MMP-2)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。[结果]RA组的抑瘤率为37.8%。与对照组相比,RA组胃癌生长、肝转移受到明显抑制(P<0.05),AI明显增高(P<0.05),MMP-2、PCNA的表达降低。[结论]RA对胃癌生长和肝转移的抑制可能通过诱导胃癌细胞凋亡、抑制细胞增殖以及肿瘤细胞外基质降解实现的。
- 张红英张庆李晓雪
- 关键词：胃癌肝转移维甲酸裸鼠模型
- 川红拔瘤膏对小鼠脑胶质瘤生长的影响及作用机制被引量：1
- 2010年
- 目的:观察川红拔瘤膏外敷对小鼠G422脑胶质瘤生长的抑制作用及其抗肿瘤的机制。方法:选取清洁级小鼠50只,随机分为:对照组、环磷酰胺组、川红拔瘤膏高、中、低3个剂量组。中药组右腋下皮肤涂抹给药,给药量为0.5mL。连续给药14天,阳性对照组连续给药7天。连续观察川红拔瘤膏对肿瘤生长的抑制情况,末次处死后,取肿瘤组织,流式细胞仪检测细胞周期变化与细胞凋亡。RT-PCR法检测肿瘤组织中caspase-3的表达。结果:拔瘤膏高浓度组的瘤重(0.516±0.107)g与其他组比较(除环磷酰胺组)对实体瘤的生长具有显著的抑制作用(P<0.05)。高浓度组肿瘤抑制率为31.28%。流式细胞仪结果显示,与空白组比较川红拔瘤膏高剂量组明显将小鼠肿瘤组织细胞阻滞于G0/G1期(P<0.05),S期细胞数明显减少(P<0.05)。细胞凋亡分析可知,高剂量组作用的肿瘤细胞的凋亡率为(23.6±4.35)%,明显高于对照组(8.86±1.23)%,差异有统计学意义(P<0.05)。其他组与对照组比较,差异无统计学意义。caspase-3分析结果显示,与低剂量组、中剂量组,caspase-3表达强度无明显改变[(8.23±0.43),(7.96±0.52)vs(7.24±0.36),P>0.05]。高剂量组的caspase-3表达显著增加[(23.45±2.31)vs(7.24±0.36),P<0.01]。结论:川红拔瘤膏对小鼠G422脑胶质瘤具有抑制生长的作用,其作用可能与其抑制肿瘤细胞DNA合成、周期阻滞、诱导凋亡及上调凋亡基因caspase-3表达有关。
- 张建永李红玉李锦毅司今张财马春雷
- 关键词：脑胶质瘤凋亡蛋白
- PEX慢病毒载体构建及其在293FT细胞中的分泌表达被引量：1
- 2010年
- 目的 构建含人MMP-9信号肽-MMP-2-PEX片段的重组慢病毒,并在293FT细胞中分泌表达PEX蛋白.方法 利用RT-PCR、基因重组等技术,构建含MMP-9信号肽-MMP-2-PEX片段的重组慢病毒表达载体pBPLV-signal-PEX,在脂质体介导下与包装质粒（pLP1、pLP2）、包膜质粒（pLP/VSVG）共转染293FT细胞,包装产生慢病毒并进行滴度测定.慢病毒感染2931;3＂细胞后,Western印迹法检测293FI＂细胞培养上清中PEX的表达.结果 酶切和DNA测序表明慢病毒表达载pBPLV-signal-PEX构建正确,四质粒共转染293FT细胞成功获得慢病毒;慢病毒感染293FT细胞后,在细胞培养卜清中可检测到PEX蛋白的表达.结论 成功构建了含人PEX的重组慢病毒,在体外有效感染293fT细胞并持续分泌表达目的 蛋白,为进一步研究PEX在肿瘤侵袭与转移中的作用提供实验基础.
- 赵中松赵敬湘张韶峰王字玲唐红卫李锦毅
- 关键词：信号肽慢病毒载体
- MMP9-PEX的原核表达、纯化与复性研究被引量：1
- 2010年
- 目的 对人基质蛋白酶9（matrix metalloproteinase,MMP9）C端血红素结合蛋白样结构域（hemopexin domain,PEX）的原核表达条件、透析复性条件进行优化,以获得高表达的活性蛋白.方法 将构建好的原核表达载体PET-his-MMP9-PEX转化至大肠埃希菌菌株BL21（DE-3）,异丙基β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导后产生包涵体蛋白,探讨不同IPTG浓度、不同诱导时间、不同菌液密度值对目的 蛋白表达产量的影响;盐酸胍裂解包涵体,采用NI-NTA进行纯化,对纯化蛋白的透析复性条件进行优化;采用明胶酶谱的方法检测MMP9-PEX的活性.结果 经纯化透析复性后蛋白的纯度在95%以上,复性回收率为36.86%.结论 本研究优化了MMP9-PEX的原核表达、透析复性条件,获得了有活性的MMP9-PEX蛋白,为进一步研究MMP9-PEX的功能提供了实验基础.
- 张伟静张绍峰唐红卫李锦毅
- 关键词：原核表达纯化复性
- 胃癌侧群细胞的耐药性及致瘤性的初步研究被引量：5
- 2012年
- 目的从胃癌细胞株中分离并培养侧群(SP)细胞,探讨其耐药性及致瘤性。方法应用流式细胞术从胃癌BGC-823细胞株中分选SP细胞,MTT法观察SP细胞和非SP细胞的增殖情况,流式细胞术检测不同浓度氟尿嘧啶(5-FU)对BGC-823细胞增殖抑制作用以及SP细胞比例、细胞周期情况;通过在NOD/SCID鼠体内种植不同数量的SP细胞和非SP细胞,比较两者的致瘤能力。结果流式细胞仪检测胃癌BGC-823细胞中存在0.9%～2.1%的SP细胞,MTT法显示SP细胞有较强的增殖活性。2.5、5、10和25μg/ml 5-FU作用于BGC-823细胞(2.0×106个)36h后,细胞数分别为2.6×106、2.3×106、2.0×106和1.8×106,SP细胞比例依次为12.9%、9.9%、4.0%和2.1%,SP细胞处于G0/G1期。SP细胞和非SP细胞分别以1×104细胞数接种NOD/SCID鼠,SP细胞形成瘤体的平均瘤重为0.577g,而非SP细胞为0.150g,且SP细胞成瘤时间较非SP细胞短且瘤体数量多、质量高。结论人胃癌细胞系BGC-823中的SP细胞具有较强的增殖活性和类似干细胞的耐药性,针对SP细胞可以为抗肿瘤治疗提供新的靶点。
- 姜伟李锦毅吴婷
- 关键词：胃癌肿瘤干细胞氟尿嘧啶
- 肿瘤细胞休眠与转移的生物学特性被引量：4
- 2008年
- 细胞休眠是生物界普遍存在的一种现象，也是恶性肿瘤细胞生物学特征之一。肿瘤休眠细胞的存在，是导致其复发和远处转移的主要原因，其发生机制可能与休眠相关基因激活、肿瘤血管生成、肿瘤免疫逃逸、癌基因与抑癌基因、信号转导等因素相关。
- 戴聪郑春秀李锦毅
- 关键词：肿瘤治疗细胞周期基因
- 川红拔瘤膏对小鼠S180瘤的抑制及其凋亡诱导作用的影响
- 2010年
- 目的:观察川红拔瘤膏对小鼠移植性肿瘤S180的抑制,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:建立小鼠荷瘤S180模型,随机分为5组,川红拔瘤膏按高、中、低3个剂量右腋下皮肤涂抹给药。模型组采用生理盐水灌胃给药,阳性组腹腔注射25mg/kg环磷酰胺。连续给药10d,观察瘤重、抑瘤率,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪器检测细胞凋亡与细胞周期变化。RT-PCR法检测凋亡基因Caspase-3的mRNA的表达。结果:与模型组比较,川红拔瘤膏高、中剂量能显著抑制小鼠S180的生长(P<0.05),可诱导肿瘤细胞凋亡,阻滞细胞周期在G0/G1期(P<0.05)。中、高剂量组均有Caspase-3表达的升高(P<0.05,P<0.01)。结论:川红拔瘤膏具有明显的抗肿瘤作用,作用机制可能是诱导凋亡,其诱导凋亡过程有Caspase-3的表达升高。
- 司今张建永唐红卫李锦毅
- 关键词：S180瘤细胞凋亡CASPASE-3
