国家自然科学基金(30830086)
- 作品数：19 被引量：50H指数：5
- 相关作者：齐力旺韩素英张俊红梁国鲁杨文华更多>>
- 相关机构：中国林业科学研究院西南大学国家林业局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 日本落叶松小RNA文库构建及其microRNA鉴定被引量：5
- 2012年
- 以2年生日本落叶松实生苗为材料构建其小RNA文库,对283个克隆进行PCR验证后测序,通过生物信息学分析鉴定文库中的microRNA并进行qRT-PCR验证。结果表明:(1)小RNA文库的体积为50 mL,总库容量为5.25×106cfu,重组率为92.6%,插入片段长度约65 bp,与小RNA连接片段长度吻合。(2)去除rRNA(86个)、tRNA(14个)等非目的序列后,获得日本落叶松28个保守miRNAs,属于17个miRNA家族;其中,15个miRNAs(miR159c、miR160a、miR162a、miR164b、miR165a、miR166a、miR166a*、miR166b*、miR169a、miR169b、miR171a、miR171b、miR172a、miR319b、miR396a)的序列与其它植物完全一致,其余13个miRNAs(miR156a、miR159a、miR159b、miR164a、miR166b、miR168a、miR169b*、miR319a、miR396b、miR408、miR482a、miR2111、miR3701)则高度相似。(3)测序结果与本室落叶松转录组数据进行序列比对,新发现4个miRNAs(lle-miR1、lle-miR2、lle-miR3、lle-miR4)及其前体。(4)qRT-PCR验证表明,miR159a、miR159b等16个保守的和lle-miR1 lle-miR4等共20个miRNAs存在于日本落叶松中。(5)通过靶基因预测及UniProt数据库分析发现,32个miRNAs中有24个对应69个靶基因,其功能主要为转录因子、信号转导、胁迫抗性和代谢相关酶及未知功能蛋白。
- 吴涛张俊红韩素英杨文华李万峰齐力旺
- 关键词：日本落叶松小RNA文库MIRNA转录组
- 山哈杨三倍体无性系高效再生体系的建立
- 2010年
- 以山哈杨三倍体无性系的茎段为外植体进行组织培养,研究了不同激素配比对其不定芽诱导分化及生根的影响,确定了其最佳培养基,建立了山哈杨三倍体无性系高效稳定的再生体系。结果表明:最佳的不定芽诱导分化培养基:MS+6-BA0.6 mg/L+TDZ0.01 mg/L+NAA0.02 mg/L,其分化率可达82.2%;生根效果最好的培养基:1/2MS+IBA 0.2 mg/L,生根率达100%。
- 杜晓艳韩素英梁国鲁齐力旺
- 关键词：不定芽
- 落叶松体细胞胚成熟阶段差异表达的基因及部分基因的表达谱分析被引量：2
- 2009年
- 为研究落叶松体细胞胚胎发生的分子机理,文章以日本落叶松×华北落叶松杂种无性系胚性细胞系Y35体细胞胚成熟阶段培养物的cDNA为实验组,继代培养阶段胚性愈伤组织的cDNA为对照组,利用抑制性消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)构建了体细胞胚成熟阶段的差异表达基因文库。随机选取800个阳性克隆进行测序,共获得468个UniGenes,共将其分为19类,功能分析结果表明:这些UniGenes可能参与代谢、转录、信号转导、转运、细胞生长分裂、细胞结构、细胞命运、蛋白质合成与降解、防御等与个体发育密切相关的生物学过程。对部分ESTs的表达谱进行分析,结果表明这些ESTs均在落叶松体细胞胚胎发生的不同阶段特异表达。
- 张蕾齐力旺韩素英
- 关键词：落叶松差异表达基因抑制性消减杂交
- 速生高抗林木新品种高效培育技术体系与产业化被引量：10
- 2010年
- 论述了现阶段国家对林业的需求是生态环境改善及木材"量"的严重短缺,林业用材林培育目标是提高林木产量,为此育种的关键任务是速生高抗林木新品种培育,其培育重点是高质量营养体的营养生长问题。在种业发展方面苗木生产比重远远大于种子,无性系林业繁育技术的发展,进一步提高了苗木生产的比重。在现阶段,林木品质方面的要求可以通过树种的选择得到解决,也更符合林业发展实际;林木抗性育种的难点主要是林木对物理环境和病虫害的抗性要求更高,除了一般的条件限制因素之外,还需要经历整个培育周期数十年内的极端条件。鉴于林业的特殊性,应该得到国家更多的支持,从而解决我国林业面临的国民经济发展、生态环境改善及低碳经济需求的三重压力;同时指出林业种苗业科技创新对"速生高抗林木新品种高效培育技术体系与产业化"的重要性。
- 张守攻齐力旺尹刚强
- 关键词：林木产量种苗业
- 落叶松体胚发育中5个miRNA前体与成熟体的表达被引量：13
- 2012年
- 利用同源比对或RACE克隆了5个落叶松(Larixleptolepis)miRNA前体。结果显示,在各物种miRNA前体间,成熟序列高度相似,但其它序列相似度差异大,序列相似度与亲缘关系有关。采用qRT-PCR分析了5个miRNA、前体和靶基因在落叶松体胚8个发育阶段的表达变化。结果显示,miRNA表达最高峰出现在后期子叶胚,暗示与促进胚胎休眠有关;表达次高峰出现时期不同,表现为miR397和miR408在PEMIII,miR398在早期单胚,miR156和miR166在早期子叶胚,表明其与保持薄细胞壁、质子传递、顶端分生组织形成等调控有关。miRNA成熟体表达与前体含量不呈线性相关,可能受多重调控。研究结果对于阐明MIR基因进化、表达调控及在体胚发育中的调控功能具有重要理论意义。
- 张俊红张守攻吴涛韩素英杨文华齐力旺
- 关键词：落叶松体细胞胚胎发生
- 落叶松实时定量PCR内参基因的筛选被引量：1
- 2013年
- 本研究针对日本落叶松（Larixkaempferi（Lamb．）Carr．）体细胞胚胎发育过程中原胚团时期到胚胎成熟时期、种子萌发过程、植株幼年生长阶段和成年生长阶段等生长发育过程中的31份材料，应用实时荧光定量PCR（qPCR）技术，分析了12个持家基因（ACT4、APm、Chc、Gapc、RPu、RPL2、EFl、EF2、elF、E3UL、UBQ和UPL2）在这3l份材料中的表达情况。经geNorm和NormFinder两种分析软件对这12个持家基因进行表达稳定性分析，结果表明：APm在不同器官、体细胞胚胎发育和种子萌发过程中表达均最为稳定；EFJ在不同生长年龄植株的顶梢中表达最为稳定；e伊在不同年龄植株的针叶中表达最为稳定。分析结果表明，针对不同的研究材料和发育阶段应选择适合的持家基因做内参基因使用。进行基因表达细微差异研究时，可根据需要使用2个或2个以上内参组合。
- 吴涛李万峰张俊红韩素英杨文华齐力旺
- 关键词：落叶松基因表达稳定性
- 落叶松体细胞胚胎发生诱导多倍体的研究被引量：1
- 2009年
- 通过检测细胞系增值率及细胞分裂指数确定细胞系分裂最旺盛时期,利用秋水仙素和氨磺灵诱导落叶松多倍体体细胞胚胎的发生,揭示了两种抗微管物质对落叶松体细胞胚胎发生的影响。秋水仙素在浓度为500 mg·L^-1,浸泡处理36 h时能使多倍体体细胞胚胎发生的比例达到85.2%,体细胞胚发生率达到351.1个/g;氨磺灵在1-5 mg·L^-1的浓度下处理后的细胞系几乎失去体细胞胚分化能力,无法大量获得多倍体体细胞胚。通过细胞压片及去壁-低渗涂片对比观察发现氨磺灵诱导后的细胞系除了染色体数目加倍外还有部分细胞发生程序性死亡。该研究初步证明了秋水仙素较适合落叶松多倍体体细胞胚的诱导,氨磺灵对落叶松毒害明显,不适合其多倍体的诱导。
- 张清国韩素英梁国鲁齐力旺
- 关键词：秋水仙素落叶松多倍体体细胞胚胎发生
- 落叶松多倍体体细胞胚的高效诱导途径被引量：1
- 2009年
- 以日本落叶松×华北落叶松杂种无性系胚性细胞系Y68为材料,通过含有不同浓度的秋水仙素和氨磺灵水溶液、固体培养基和液体培养基进行处理,以体细胞胚分化能力和多倍体体细胞胚获得率为参数进行了对比研究。结果表明:秋水仙素水溶液浸泡法处理对落叶松多倍体体细胞胚诱导效果最显著;先对细胞系处理再进行体细胞胚分化较适合落叶松多倍体体细胞胚的发生。在500mg/L的秋水仙素水溶液中浸泡36h情况下多倍体诱导率最高,达79.8%,体细胞胚分化率为217.1个/g。
- 张清国齐力旺韩素英梁国鲁
- 关键词：落叶松体细胞胚发生多倍体秋水仙素
- 落叶松体胚发育中12个针叶树特异microRNAs表达分析被引量：2
- 2012年
- 以落叶松体细胞胚胎发育8个阶段的材料构建小RNA文库,进行了Solexa测序、miRNA鉴定、靶基因预测、qRT-PCR定量分析等研究。结果表明:发现的87个miRNAs中,29个为针叶树特异的,来自12个家族,分别为miR946、miR947、miR950、miR951、miR1311、miR1312、miR1313、miR1314、miR1316、miR3701、miR3702和miR3704,其中25个长度为22nt,且在小RNA文库中的最低拷贝数为18(miR1311),最高拷贝数为33 009(miR950)。发现12个miRNA家族的34个靶基因可能参与生长发育、抗病、AGO反馈调节等多方面遗传调控;qRT-PCR分析表明:72%miRNAs表达次高峰在后期单胚或早期子叶胚,在中期子叶胚最低,最高峰在后期子叶胚,分别与子叶形成、胚胎后熟、胚胎休眠的生理活动相吻合,而miRNA前体的表达模式不同于miRNA,前体变化幅度小于成熟体。
- 张俊红吴涛韩素英齐力旺张守攻
- 关键词：日本落叶松体细胞胚胎针叶树
- 落叶松转基因育种体系的建立及其产业化应用
- 2013年
- 落叶松等针叶速生用材树种是北方工业人工林的主体树种,利用传统育种方法对落叶松进行遗传改良已不能满足现代林木遗传育种的需求.同时,由于其基因组庞大（大于15G）,已知基因序列信息不足,成为植物界最难进行细胞工程、染色体工程、基因工程等分子育种及其品种创制的植物种.本文重点介绍了笔者研究组10多年来基于现代基因工程手段建立的农杆菌介导的落叶松遗传转化体系及花粉管介导的遗传转化体系,并介绍了利用转基因技术对落叶松进行快速定向培育及遗传改良的研究成果.
- 张立峰李水根韩素英张守攻齐力旺
- 关键词：转基因技术落叶松育种体系速生用材树种遗传转化体系农杆菌介导
