国家质检总局科技计划项目(2012IK010)
- 作品数：3 被引量：22H指数：2
- 相关作者：孟庆峰王伟利钱爱东魏嘉良郭雨微更多>>
- 相关机构：吉林出入境检验检疫局吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析
- 2014年
- 目的构建森林革蜱（Dermacentor silvarum）半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因。方法以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组（tester）,未吸血雄蜱为对照组（driver）,分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交。巢式PCR扩增杂交产物,经柱纯化后连接至PMD-18T中,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,进行蓝白斑筛选,并计算文库滴度和重组率。随机挑选阳性克隆,反向Northern杂交（Northern blotting）和RT-PCR法检测抑制消减杂交cDNA文库的消减效率。随机选取差异基因阳性克隆送测序,利用Blastn和Blastx对测序结果进行核酸种类同源性分析和蛋白种类同源性的比对和功能预测。结果电泳结果显示,森林革蜱半饱血雄蜱和未吸血雄蜱的ds cDNA均呈弥散拖影,大小在500bp以上,经RsaⅠ酶切后,大小在100～1000 bp;接头连接效率大于25%。巢式PCR结果显示,消减的ds cDNA呈聚集条带,大小在250～500 bp。构建的森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的滴度为700 000 pfu/ml,重组率为88.5%（239/270）。反向Northern blotting检测结果显示,当以森林革蜱半饱血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较强;以未吸血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较弱。RT-PCR结果显示,随机选取的8个阳性克隆中,有5个在半饱血状态下表达上扬,抑制消减杂交cDNA文库消减效果较好。115个阳性克隆测序得到87个差异表达序列标签（ESTs）,大小为200～800 bp。Blastn分析结果显示,87个序列中,与其他蜱基因有同源性的53个,同源性为70%～98%,与库蚊、甲虫和果蝇等其他昆虫基因有同源性的34个,同源性为32%～65%。Blastx预测结果显示,序列中片段表达的蛋白包括参与吸血和血液消化的不同酶类,主要功能为能量代谢、信号传导和转录调节等。结论建立了森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,差异基因
- 刘琪王伟琳孟庆峰徐展崔洁刘新欣王伟利
- 关键词：抑制消减杂交CDNA文库差异基因
- 土拉菌病国内外流行情况与诊断的研究进展被引量：11
- 2012年
- 为了更好地检测和预防土拉菌病,介绍了土拉菌病的国内外流行情况。综述了土拉菌的细菌学、免疫学、分子生物学检测方法,并对上述检测方法进行总结和分析。旨在为土拉菌的深入研究检测提供思路和科学依据。
- 魏嘉良孟庆峰钱爱东王伟利
- 关键词：土拉菌病
- 蜱传立克次体病检测方法研究进展被引量：11
- 2012年
- 为了选择更适合蜱传立克次体检测方法。通过对已发现的几种蜱传立克次体病的简单介绍,并且对目前该病检测方法的概述、分类、优缺点对比。从而为发展新的检测方法提供思路,并对未来的研究方向做了展望。
- 郭雨微孟庆峰王伟利钱爱东
