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抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响: 2003年; 为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm。序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成。突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA)。重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株。IPTG诱导后,二者均得到了表达。软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3％,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8％;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量。; 朱建清刘柱胡新文杨志荣; 关键词：定点突变遗传密码子

萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP_2基因PCR定点突变及其在大肠杆菌中的表达被引量：3: 2002年; 根据已报道的萝卜抗真菌蛋白Rs AFP2 基因序列 ,结合基因及其表达调控中遗传密码的偏爱性 ,人工合成引物 ,利用PCR重叠延伸法 ,使编码序列区的部分核苷酸突变 ,采用嵌套PCR ,迅速克隆到目的基因片段Rs AFPm ,连接到 pGEM Teasy载体上 ,转化大肠杆菌XL1菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 2 40bp ,有一个阅读框 ,编码 2 9个氨基酸的信号肽和 5 1个氨基酸的抗真菌蛋白 ,与突变前的Rs AFP2 基因相比 ,在编码区第 3号氨基酸Lys相差一个碱基 (TTG→TTA) ,第 5号氨基酸Gln相差一个碱基 (CAG→CAA) ,第 6号稀有密码Arg相差两个碱基 (CAG→CGA) ,但二者编码产生相同。重新合成引物 ,将切除信号肽的Rs AFP2 基因和Rs AFPm基因分别克隆到pET 2 1b(+ )质粒载体上 ,导入大肠杆菌BL2 1菌株。Tricine SDS PAGE电泳显示工程菌中存在 6KD左右的目的蛋白带 ;软件分析显示 ,突变后pETAFPm的表达产物约为突变前 pETAFPo表达产物的2倍 ;抑菌结果表明 ,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于 pETAFP2 表达产物的抑菌半径。这些都说明改造后的Rs AFPm基因与Rs AFP2 基因相比 ,已有效的提高表达量。; 刘柱胡新文朱建清杨志荣; 关键词：大肠杆菌基因表达

萝卜抗真菌蛋白基因Rs-AFPs在大肠杆菌中的表达及其转化番茄的研究被引量：15: 2001年; 通过基因工程手段将萝卜抗真菌蛋白基因Rs AFP1( 2 ) 插入大肠杆菌表达载体pTrxFus中并诱导表达 ,其融合表达产物约 2 2kD ,约占总可溶蛋白的 0 .4 5 % (0 .5 % )。抑菌活性试验表明 :重组Rs AFP1( 2 ) 有抑菌活性 ,其中Rs AFP2 较Rs AFP1抑菌活性强。构建了Rs AFP2 基因的植物表达载体pBIAFP2 。利用农杆菌介导法将pBIAFP2 导入番茄中 ,并诱导出完整的植株 32株。对其中 2 8株进行PCR和PCR SouthernBlot检测 ,其中 17株呈阳性。对经PCR SouthernBlot检测呈阳性的植株进行SouthernBlot检测 ,6株呈阳性。; 邓晓东费小雯胡新文; 关键词：大肠杆菌转基因番茄基因表达生物杀菌剂

In vitro Transient Expression System of Latex C-serum was used for Analysis of Hevein Promoter in Response to Abscisic Acid in Hevea brasiliensis被引量：1: 2008年; Hevein has been found to be an essential element in coagulation of rubber particles in latex of rubber trees. In a previous study, we cloned a 1 241-bp fragment of a 5 upstream region of the hevein gene by genome walking. This fragment was analyzed by a 5 end nested deletion method in the present study, fused with a uidA (gus) gene to produce a series of tested constructs, which were transferred into C-serum of latex and the Gus activities were detected. Results showed that the fragment from -749 to -292 was sufficient for expression of gus gene in latex, and the fragment from -292 to -168 was crucial in response to abscisic acid inducement. In a transient transgenic test of rubber leaf with particle bombardment, construct Hev749 conferred gus-specific expression in veins, in which the latex tubes mainly distributed. This implies that the fragment from -749 to -292 was laticiferous-specific.; Xiao-Wen FeiXiao-Dong Deng; 关键词：葡萄糖苷酸酶

橡胶树凝集因子hevein基因及其启动子序列的分离与分析(英文)被引量：3: 2002年; 橡胶树 (HeveabrasiliensisMuell._Arg .)凝集因子hevein是引起橡胶粒子凝集的主要因素 ,它是胶乳中黄色体内主要的蛋白质 ,具有几丁结合的功能。通过PCR技术扩增并克隆了橡胶树hevein基因共 6 80bp的序列。继而通过步移法分离启动子区域 130 6bp的序列 ,序列含典型的TATA盒和CAAT盒以及ABA效应元件的同源序列。为证实该基因在乳管中特异表达 ,利用Northernblot分析hevein基因在胶乳和叶片中的表达 ,同时 ,分析乙烯和ABA处理后hevein基因的表达。结果表明 ,hevein基因主要在胶乳中表达 ,乙烯和ABA对基因的表达有诱导作用。; 邓晓东费小雯黄俊生郑学勤; 关键词：橡胶树启动子序列

橡胶树延伸因子cDNA及其5′端启动子区域序列的分离与分析被引量：7: 2002年; 橡胶延伸因子 REF(Rubber Elongation Factor)是橡胶生物合成中最重要的酶之一 ,是胶乳中主要的蛋白质。作者利用已发表的 REF c DNA序列设计并合成引物。通过提取胶乳总 RNA用 RT法合成 c DNA后 ,通过 PCR技术扩增并克隆了 REF c DNA序列。序列测定结果表明 ,所克隆的 REF c DNA编码区序列全长 4 14个碱基 ,编码 138个氨基酸 ,3′端非编码区长 112 bp。与 Goyvaerts E等人发表的序列比较 :REF c DNA编码区序列同源率为 10 0 % ,3′端非编码区有 2 bp的差异 ,同源率为 98%。在此基础上 ,通过步移法分离 5′端启动子区域 2 6 0 bp的序列 ,其中 ,含典型的TATA盒和 CAAT盒。为证实该基因为乳管特异表达 ,我们通过 Northern blot对橡胶延伸因子基因在胶乳和叶片中的表达做分析。初步结果表明 ,橡胶延伸因子基因主要在胶乳中表达。; 邓晓东费小雯黄俊生郑学勤; 关键词：橡胶树 CDNA

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国家自然科学基金(39960065)