高等学校科技创新工程重大项目(706032)
- 作品数：5 被引量：21H指数：4
- 相关作者：焦新安潘志明游猛耿士忠方强更多>>
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- 发文基金：高等学校科技创新工程重大项目国家自然科学基金江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定被引量：5
- 2009年
- 应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌。重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,ChIFN-α基因均获得表达,重组蛋白大小分别为45ku、26ku左右,表达的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经变性、提纯、复性,重组蛋白的含量约为1mg/mL。复性后的ChIFN-α能够在鸡胚成纤维细胞上抑制H5N1禽流感病毒的复制;用水泡性口炎病毒检测结果表明,重组ChIFN-α具有较高的抗病毒作用,其生物学活性达到2×106u/mg。
- 戴华郑佳玉陈俊华潘志明焦新安
- 关键词：原核表达抗病毒活性
- 新城疫病毒F基因在大肠杆菌中的高效表达及其免疫原性分析被引量：4
- 2009年
- 应用PCR技术,以含有新城疫病毒F48E8株全长融合蛋白(F)基因的真核表达质粒pVAX1-F为模板,扩增出594bp大小的F基因的部分片段。经克隆筛选和测序后,构建成重组原核表达质粒pGEX-6P-1-F。重组质粒转化表达菌BL21,获得重组菌BL21(pGEX-6P-1-F)。经IPTG诱导和SDS-PAGE分析表明,F基因在原核表达体系中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白的23%。Western blotting结果显示,在相对分子质量46ku位置有特异性条带。动物实验结果表明,F蛋白免疫鸡产生的针对新城疫病毒F蛋白的血清抗体效价显著高于空白对照组(P<0.05),说明原核表达系统表达的F蛋白具有良好的免疫原性。
- 游猛潘志明耿士忠文科陈俊华张磊方强蔡雯婷焦新安
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白原核表达免疫原性
- 沙门菌鞭毛蛋白增强新城疫病毒融合蛋白在小鼠中的免疫原性被引量：4
- 2009年
- 目的:分析沙门菌鞭毛蛋白对新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F蛋白)免疫原性的增强作用。方法:提取鼠伤寒沙门菌SL7207株鞭毛蛋白,将鞭毛蛋白与F蛋白以皮下注射的方式联合免疫C3H/HeJ小鼠,间隔2周免疫,共免疫3次。分别在第2次免疫后2周和第3次免疫后2周采集血清,应用ELISA法测定小鼠血清抗体;在第3次免疫后2周取免疫小鼠脾脏细胞,检测IFN-γ和IL-4特异性分泌细胞。结果:鞭毛蛋白与F蛋白联合免疫能诱导产生特异性的免疫应答,血清抗体水平显著高于F蛋白单独免疫组;在脾脏细胞中,检测到较高水平的IFN-γ和IL-4分泌细胞,免疫应答以Th1型为主。结论:鞭毛蛋白与F蛋白的联合免疫,可显著增强F蛋白的免疫原性,显示出鞭毛蛋白良好的免疫佐剂效应。
- 潘志明文科游猛耿士忠方强焦新安
- 关键词：鞭毛蛋白融合蛋白免疫原性
- 鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白与新城疫病毒F蛋白的融合表达及免疫原性分析被引量：8
- 2010年
- 应用PCR技术分别扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白fliC基因以及含有新城疫病毒F蛋白部分表位的基因片段,通过柔性肽(Gly4Ser)2编码序列将二者串联并克隆到质粒pET30a+上,获得重组原核表达质粒pET-fliC-F,将其转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。Western blot证实重组菌表达的fliC-F融合蛋白能与小鼠抗fliC和抗F蛋白两种多抗血清发生特异性反应。动物试验显示,fliC-F融合蛋白能够刺激C3H/HeJ小鼠产生针对F蛋白的特异性血清抗体,说明原核表达系统表达的fliC-F融合蛋白具有较好的免疫原性。
- 游猛潘志明耿士忠马全刚方强焦新安
- 关键词：鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白新城疫病毒融合蛋白免疫原性
