江苏省自然科学基金(BK2012771)
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
- 相关作者：王丽平黄金虎商可心刘民星何方更多>>
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- PmrA-PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对黏杆菌素耐药的机制研究被引量：4
- 2016年
- 已报道PmrA-PmrB二元调控系统在革兰阴性菌对多黏菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,作者拟从基因突变和mRNA表达两个方面探讨PmrA-PmrB介导大肠杆菌对黏杆菌素耐药的可能性。首先检测了临床分离的52株禽致病性大肠杆菌对黏杆菌素的敏感性,筛选出耐药菌株;然后采用step-wise方法对黏杆菌素敏感菌株进行诱导,获得人工诱导的耐药菌株;最后通过PCR扩增所有耐药菌株的pmrA-pmrB后采用Mega软件进行突变位点分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测所有耐药菌株中pmrA-pmrB的mRNA转录水平的变化,拟阐明PmrA-PmrB二元调控系统对禽致病性大肠杆菌黏杆菌素耐药性产生的作用。MIC结果显示,52株大肠杆菌中,虽然大多数菌株(88.5%,46/52)仍对黏杆菌素敏感,但也分离到少数耐药菌株(为11.5%)。突变位点分析表明人工诱导成功的5株耐药菌(9R、36R、53R、91R和107R)pmrA未发生突变,而pmrB均有不同程度的突变,其中耐药菌株9R、36R和53R各在G55A(G19R)、T500C(L167P)和T263A(V88E)发生点突变,而91R和107R在229位和478位各插入长为30和189bp的序列。但临床分离的6株耐药菌株(MIC=4~8μg·mL^(-1))的pmrA-pmrB均未发生突变。qRT-PCR结果显示发生点突变的三株人工诱导耐药菌pmrA-pmrB转录量均极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升,发生插入突变的两株耐药菌pmrA-pmrB转录量虽有上升趋势,但变化不显著(P>0.05),而临床耐药菌株(n=6)的pmrA-pmrB转录量均无变化。进一步检测人工诱导不同MIC的耐药菌株中pmrA-pmrB的突变位点,发现菌株MIC达16μg·mL^(-1)时pmrA-pmrB才会发生突变。PmrA和PmrB介导了大肠杆菌对黏杆菌素的高度耐药,其中PmrB的点突变伴随PmrA-PmrB的高表达或者PmrB的组氨酸激酶-腺苷酰环化酶-甲基结合蛋白-磷酸化酶(HAMP)结构域的插入突变是导致禽致病性大肠杆菌对黏杆菌素高度耐药的机制之一。
- 葛琳郭大伟何方黄金虎王丽平
- 关键词：大肠杆菌突变
- 猪链球菌中erm(B)介导的MLS耐药表型差异分析
- 【目的】比较分析erm(B)阳性猪链球菌大环内酯类-林可胺类-链阳菌素类(MLS)耐药表型的差异及其与生长周期和erm(B)上游非编码调节区域(RR)的关联。【方法】采用CLSI推荐的肉汤微量稀释法和纸片法检测不同生长周...
- 梁园黄金虎商可心王丽平
- 关键词：猪链球菌耐药表型
- 文献传递
- 比较基因组学鉴定猪链球菌新型多重耐药基因嵌合元件
- (目的)本研究旨在分析猪链球菌的基本遗传特征,鉴定介导多重耐药猪链球菌的可转移遗传元件,为研究其水平转移规律和进化路径提供参考。(方法)通过对临床分离的猪链球菌进行全基因组测序,采用比较基因组学方法,分析其基因组成,鉴定...
- 黄金虎梁园王丽平
- 关键词：猪链球菌多重耐药比较基因组学ICES原噬菌体
- 文献传递
- PmrA/PmrB介导大肠杆菌对多粘菌素E的耐药机制
- 【目的】已报道PmrA/PmrB二元调控系统在革兰氏阴性菌对多粘菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,本试验拟探讨PmrA/PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对多粘菌素E耐药的可能性,从而更好地理解细菌耐药性的发生机制和...
- 葛琳何方王丽平
- 关键词：多粘菌素E大肠杆菌突变
- 文献传递
- 46株猪链球菌对大环内酯类抗生素的耐药性及PFGE分型被引量：17
- 2013年
- 参照CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测了46株猪链球菌对8种抗生素的耐药性,采用PCR方法检测其大环内酯类耐药基因的分布情况,并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法分析大环内酯类抗生素耐药株和敏感株的遗传差异性。试验结果显示:46株猪链球菌对四环素的耐药率达到100%,对头孢喹肟、红霉素、泰乐菌素、替米考星、阿奇霉素和氨苄西林的耐药率分别为43.48%、34.78%、26.09%、23.91%、15.22%和2.17%,所有猪链球菌对氟苯尼考表现为敏感或中介。46株猪链球菌中有34.78%(16/46)的菌株携带大环内酯类耐药基因,均表现出对大环内酯类抗生素耐药。其中12株携带ermB基因,菌株为MLSB耐药表型,是大环内酯类耐药的主要方式;4株携带mefA基因,菌株为M型耐药表型。PFGE指纹图谱显示16株ermB或mefA耐药株的图谱不一致,存在明显的遗传差异性。结果提示猪链球菌对抗生素的耐药性较高,大环内酯类耐药基因在猪链球菌中广泛存在,其中以ermB介导的核糖体23S rRNA甲基化占主导地位,其次是mefA介导的药物外排系统。这些耐药菌株分属不同的克隆株,推测耐药基因ermB可能通过移动基因元件的水平转移而广泛传播。
- 黄金虎刘民星商可心王丽平
- 关键词：猪链球菌耐药性脉冲场凝胶电泳
- ICE在大环内酯类耐药猪链球菌中的分布及其水平转移机制的研究
- 猪链球菌作为一种人畜共患病原菌，对猪养殖业造成了巨大的经济损失。研究显示菌株的多重耐药现象普遍，尤其对大环内酯类和四环素类抗生素耐药严重。近年来，由整合与接合元件(ICEs)介导的耐药基因在链球菌属中的水平转移越来越受到...
- 梁圆
- 关键词：猪链球菌
- 大环内酯类耐药对猪链球菌的适应性代价研究
- (目的)研究大环内酯类耐药对猪链球菌的适应性代价。(方法)本试验挑选4株不同来源的大环内酯类敏感猪链球菌作为研究对象,用红霉素、阿奇霉素及泰乐菌素分别对受试敏感菌株进行体外诱导耐药;然后对获得的高水平耐药菌株的耐药表型和...
- 商可心黄金虎王丽平
- 关键词：猪链球菌
- 文献传递
- P-糖蛋白在健康猪肝脏、肾脏和肠组织中的分布及其mRNA相对转录水平被引量：3
- 2013年
- 本研究旨在探讨P-糖蛋白(P-gp)在健康仔猪肝脏、肾脏和肠组织中的分布及mRNA相对转录水平的差异。选用5头60日龄健康三元杂交仔猪,采用免疫组织化学方法对猪肠道、肝脏和肾脏中的P-gp定位;gapdh为看家基因,采用Real-time RT-PCR方法检测mdr1基因在健康猪仔十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、肝脏和肾脏中的mRNA转录水平。结果表明:P-gp在肝脏主要分布于肝细胞间的胆小管膜;在肾脏主要分布于近端小管和远端小管细胞膜上;在小肠主要位于肠绒毛上皮细胞顶端及小肠腺腔面上皮细胞顶端;在大肠中主要分布于黏膜上皮细胞顶端和大肠腺上皮细胞顶端。mdr1在检测组织中均有转录,其转录量由高到低依次为回肠、结肠、肝脏、空肠、十二指肠、直肠、盲肠和肾脏。其中回肠转录量最高,且与十二指肠、直肠相比差异显著(P=0.017、P=0.014),与盲肠和肾脏相比差异极显著(P=0.005、P=0.001);mdr1在空肠、结肠和肝脏中的相对转录量与肾脏相比差异显著(P=0.046、P=0.018、P=0.030)。结果提示P-gp在健康仔猪肝脏、肾脏和小肠组织中的分布和表达可能对一些口服药物的体内过程产生影响,因此猪临床用药时应充分考虑P-gp介导的药物间相互作用及对口服药物生物利用度的影响。
- 董玲玲郭荔戴小华孙勇王丽平
- 关键词：P-GPRT-PCR
