广东省自然科学基金(S2011010004750)
- 作品数：7 被引量：56H指数：3
- 相关作者：庄俊华黄宪章王小云彭桉平沈素晶更多>>
- 相关机构：广东省中医院广州中医药大学中山大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- pET32a-AKT1重组质粒的构建与表达
- 2014年
- 目的构建重组质粒pET32a-AKT1,利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增AKT1编码区基因,并将其与pET32a质粒融合,并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot进行蛋白鉴定。结果目的基因与质粒完整融合;重组质粒pET32a-AKT1成功转入菌株DE3;IPTG诱导后,DE3表达相对分子质量为70 000的蛋白。结论成功构建重组质粒pET32a-AKT1,且AKT1蛋白在原核表达菌DE3中完整、高效表达。
- 张战锋韩丽乔庄俊华黄宪章
- 关键词：蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶质粒大肠埃希菌
- 青蒿琥酯纳米颗粒的制备及其体外抑制肿瘤细胞增殖的作用研究被引量：2
- 2013年
- 用壳聚糖(Chitosan,CS)和三聚磷酸钠(tripolyphosphate,TPP)交联制备包载青蒿琥酯纳米粒,并探讨其在体外对肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法:以壳聚糖-三磷酸钠(CS/TPP)为基质并优化其比例,采用离子凝胶法制备包载青蒿琥酯(ART)纳米粒,对其进行表征包括粒径大小、Zeta电位、包封率、载药量和体外释放试验,以及红外光谱分析。用MTT法检测包载青蒿琥酯的壳聚糖-三磷酸钠纳米粒对Hela、Caski、U251、MCF-7和HepG2细胞增殖的抑制作用。结果:成功构建青蒿琥酯-壳聚糖-三磷酸钠纳米颗粒(ART nanoparticals,ART-NPs),平均粒径为166.8±0.2 nm,电位为10.2±0.79 mV,红外光谱分析表明CS/TPP成功连接并包裹ART,平均载药量和包封率分别为18%和74.82%;体外释放呈典型的双相分布,前24 h呈暴发性释放(44.2%),其后缓慢释放,第9天累积释放度达67.4%。对不同肿瘤细胞的杀伤作用呈浓度和时间依赖趋势,且ART-NPs作用优于单一ART;相同浓度的ART-NPs在96 h时对细胞增殖的抑制率明显高于ART组(P<0.05)。结论:用壳聚糖和三磷酸钠交联可成功包载青蒿琥酯制成具有缓释性的纳米制剂,对肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用,有潜在的肿瘤治疗价值。
- 沈素晶黄来强沈素云张战锋曾小伟黄宪章
- 关键词：青蒿琥酯纳米粒缓释抗肿瘤
- 雷公藤内酯醇调控miR-155抑制类风湿性关节炎患者单核细胞促炎反应被引量：32
- 2014年
- 目的探讨雷公藤内酯醇(TPT)能否通过调控miR-155抑制脂多糖(LPS)刺激的类风湿性关节炎(RA)患者单核细胞炎症反应。方法分离RA患者外周血单个核细胞(PBMC),CD14+磁珠分选单核细胞,LPS刺激24 h后用于实验。ELISA检测不同浓度TPT作用下,单核细胞TNF-α和IL-6的表达;实时定量PCR(qRT-PCR)检测TPT干预前后单核细胞miR-155的表达;LipofectamineTM2000脂质体分别转染miR-155 mimic和对照24 h,TPT再干预24 h,通过ELISA检测单核细胞TNF-α和IL-6表达,Western blot法检测单核细胞细胞因子信号抑制蛋白1(SOCS1)、含SH2肌醇磷酸酯酶1(SHIP-1)的表达。结果 TPT抑制LPS刺激的RA患者外周血单核细胞促炎细胞因子和miR-155的表达。过表达miR-155明显逆转TPT抑制的单核细胞促炎细胞因子的表达。TPT上调RA患者单核细胞SOCS1和SHIP-1表达,但过表达miR-155能逆转上调的SHIP-1而不影响SOCS1的表达。结论 TPT抑制miR-155表达而释放其靶标SHIP-1,从而下调LPS诱导的RA患者单核细胞炎症反应。
- 彭桉平黄宪章刘瑞萍王小云庄俊华
- 关键词：类风湿性关节炎雷公藤内酯醇单核细胞MIR-155炎症反应
- 雷公藤内酯醇调控COX2/PGE2轴抑制Th17细胞分化的研究被引量：16
- 2014年
- 雷公藤内酯醇(TPT)是雷公藤的主要活性单体,用于治疗类风湿关节炎(RA)。该研究在体外用不同浓度(0,10,50,100 nmol·L-1)TPT干预RA患者的滑膜成纤维细胞(RASFs)后,用qRT-PCR检测环氧化酶(COX)的mRNA表达,ELISA法测定前列腺素E2(PGE2)的水平。进一步添加或不添加外源性PGE2,用TPT干预的RASFs与健康志愿者CD4+T细胞共培养,流式细胞术检测产生IL-17和IFN-γ的CD4+T细胞亚群。结果显示,TPT以剂量依赖的方式抑制RASFs的COX2的mRNA表达以及PGE2的分泌(P<0.05);TPT预处理的RASFs呈剂量依赖性抑制Th17细胞分化,而外源性PGE2能逆转TPT预处理的RASFs抑制Th17细胞分化(P<0.05)。综上表明TPT通过抑制COX2下调RASFs分泌PGE2,进而抑制Th17细胞分化。
- 彭桉平王小云庄俊华
- 关键词：雷公藤内酯醇TH17细胞前列腺素E2滑膜成纤维细胞
- 类风湿关节炎survivin,CD95及PTEN相关信号分子研究进展被引量：5
- 2014年
- 类风湿关节炎是一种以关节滑膜浸润性增生、炎症反复发作及关节软骨和骨质破坏为主要病理改变的慢性自身免疫性疾病,凋亡抑制、过度增殖并侵袭关节软骨及骨质是类风湿关节炎的主要分子机制。本文对survivin、CD95、PTEN及其他基因的生物学特性,以及其对类风湿性关节炎病情进展和疾病调控中的作用进行综述。
- 陈丹娜刘冬冬徐建华黄宪章庄俊华
- 关键词：类风湿关节炎SURVIVINCD95PTEN
- 微小RNA与类风湿关节炎被引量：2
- 2013年
- 微小RNA（microRNA,miRNA）是一种起转录后负调控的分子,参与生命过程中一系列重要进程,包括发育进程、造血过程、器官形成、凋亡、细胞增殖和肿瘤的发生。作为一组新的潜在的疾病诊断和治疗的靶分子,已成为了生物医学研究的前沿热点。生物信息学预测显示,在哺乳动物中,miRNA虽然占不到2%蛋白编码基因,却可以调控1/3的mRNAs。miRNA可以调控人类60%的蛋白编码基因,表明其功能强大[1]。
- 沈素晶黄宪章庄俊华
- 关键词：微小RNA类风湿关节炎免疫系统疾病
- pET32a-PTEN融合质粒的构建与表达被引量：1
- 2014年
- 目的:构建PTEN原核融合质粒,利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法:从人新鲜外周血中提取总RNA,采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因,并将其pET32a质粒融合,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果:菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合;融合质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论:成功构建融合质粒,并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。
- 张战锋韩丽乔庄俊华黄宪章
- 关键词：大肠杆菌PTEN
