国家自然科学基金(30070854)
- 作品数：5 被引量：29H指数：4
- 相关作者：方向明石卓舒强赵正言鲍军明更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院浙江大学浙江大学医学院附属第一医院更多>>
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- 重组β-防御素-2预处理对急性肺损伤大鼠肺组织ICAM-1表达的影响被引量：4
- 2005年
- 急性肺损伤(ALI)系创伤、感染等诱因触发的全身炎性反应综合征或代偿性抗炎反应综合征在肺组织的表现,脓毒症是其最主要的诱发因素[1].β-防御素-2不仅对多种病原微生物有高效杀伤作用,而且对树突状细胞具有趋化和调理吞噬作用[2-4].而β-防御素-2在内毒素性ALI防治中的作用尚无定论.本研究拟观察重组β-防御素-2对内毒素性ALI大鼠肺组织胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨其对ALI的防治作用.
- 鲍军明姚航平陈智石卓赵正言舒强方向明
- 关键词：Β-防御素-2大鼠肺组织急性肺损伤ICAM-1表达代偿性抗炎反应综合征全身炎性反应综合征
- 人热休克蛋白70D的基因克隆、表达及蛋白纯化被引量：7
- 2002年
- 目的 :研究热休克蛋白 70 D(heat shock protein 70 D,HSP70 D)的基因克隆、重组表达及纯化。 方法 :采用 RT- PCR方法从 He L a细胞中克隆 HSP70 D全长编码区 c DNA序列 ,构建原核表达载体 p ET2 4 a(+) - HSP70 D,经过 DNA序列测定证实其序列正确。完成基因工程人 HSP70 D的高表达工程菌的筛选后 ,对其发酵、蛋白表达条件及重组蛋白的纯化条件进行优化。 结果 :重组表达载体经序列测定及酶切鉴定与理论推测结果相符 ,高表达工程菌经优化表达条件后 rh HSP70 D的表达量可占菌体总蛋白的 2 0 %以上。经过低浓度乙醇沉淀、DEAE阴离子交换、疏水柱层析及 S2 0 0凝胶过滤柱层析后 ,获得了纯度大于 95 %的 rh HSP70 D。 结论 :本研究为进一步开展以 HSP70 D为基础的肿瘤免疫治疗研究提供了实验基础。
- 常卫红
- 关键词：基因克隆蛋白纯化基因表达肿瘤免疫治疗
- 人β-防御素2在大肠杆菌中的高效表达和纯化被引量：7
- 2006年
- 目的:研究具有生物学活性的人防御素2(HBD 2)多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法:PCR扩增不含前导序列的HBD 2成熟肽的编码框全长的cDNA片段(smHBD 2-cDNA),利用B g lⅡ和B amHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD 2-cDNA的克隆载体,利用N colⅠ和H indⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET 32-nsmHBD 2-cDNA,在大肠杆菌中BL 21(DE 3)中诱导表达含HBD 2的融合蛋白,SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD 2多肽。采用液体培养法,测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果:构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD 2-cDNA表达载体,1、2和4倍smHBD 2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52%、48%和31%;而8倍HBD 2-cDNA几乎不含可溶蛋白,目标蛋白以包含体形式表达,集中在不可溶部分。重组HBD 2对E.coli K 12 D 31有较强的抑制作用,在终浓度约为0.4至0.5μg/m l时,90%细胞的生长被抑制。结论:采用融合表达、多拷贝串联表达方式,可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用,也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性;适当的多拷贝串联基因可以提高HBD 2的产量,但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量,且易形成不溶蛋白;在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD 2多肽的原核高效表达。
- 钟志霞阮红范立梅彭力方向明徐志南
- 关键词：Β-防御素抗菌肽
- 重组β-防御素2多肽对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响被引量：8
- 2006年
- 目的:观察重组β-防御素2多肽预处理对脓毒症大鼠肺组织细胞凋亡的影响。方法:SPF级SD大鼠48只随机分成对照组和防御素组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型,防御素组在CLP前48h经气管插管气道滴注107PFU重组腺病毒(含有β-防御素2编码基因),而对照组则同法给予对照腺病毒(不含β-防御素2编码基因)。分别于CLP后0、12、36和72 h处死大鼠,取肺组织,采用透射电镜,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,采用电镜、苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化。结果:TUNEL检测显示,对照组大鼠CLP后12、36和72 h肺组织细胞凋亡指数显著增加(P<0.01);与对照组相比,防御素组CLP后相应时间点肺组织细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。HE染色可见,两组大鼠CLP后12、36和72 h肺泡及肺泡间质充血、水肿,炎症细胞渗出,肺泡腔不同程度狭窄。与对照组相比较,防御素组相应时间点肺组织内炎症细胞渗出减少,间质水肿减轻。结论:重组β-防御素2多肽预处理能抑制脓毒症肺组织的细胞凋亡,对急性肺损伤(AL I)具有保护作用。
- 徐笑益石卓鲍军明顾伟忠姚航平陈智高敏方向明
- 关键词：Β-防御素
- 重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠急性肺损伤的保护作用被引量：12
- 2005年
- 目的 观察重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。 方法10只清洁级雄性成年SD大鼠,随机分为防御素组和对照组,每组5只。防御素组大鼠暴露声 门后,气管内滴注5×107PFU／ml重组腺病毒(含有β-防御素-2编码基因)50μl,对照组给予等量对照腺 病毒(不含β-防御素-2编码基因)。48 h后两组气管内滴注6×108CFU／ml绿脓杆菌ATCC27853 200μl, 制备绿脓杆菌感染致ALI模型。气管内滴注绿脓杆菌24 h后处死大鼠,采集肺泡灌洗液,进行绿脓杆 菌菌落数和白细胞计数;观察肺组织病理学变化,并测定肺组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达水 平。结果与对照组比较,防御素组BALF中绿脓杆菌菌落数、白细胞计数、肺组织ICAM-1表达水平 及肺病理组织学评分降低(P<0．05)。结论重组β-防御素-2对呼吸道绿脓杆菌感染大鼠ALI有一 定的保护作用,可能与其杀菌作用和下调肺组织ICAM-1的表达有关。
- 王海宏舒强石卓赵正言方向明
- 关键词：假单胞菌感染
