浙江省科技厅重大专项基金(2013C03036)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：丁国芳陈思梅光明张小军更多>>
- 相关机构：浙江省海洋水产研究所浙江海洋大学海力生集团有限公司更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅重大专项基金浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 长鳍金枪鱼多肽的酶解制备工艺研究被引量：3
- 2018年
- 通过酶解法制备具有对H_2O_2诱导的张氏肝细胞保护作用的长鳍金枪鱼多肽。以长鳍金枪鱼下脚料为原料,采用胰蛋白酶进行酶解,以张氏肝细胞的相对增殖率为指标,通过单因素试验和响应面优化试验确定该酶的最佳酶解条件, HE染色观察张氏肝细胞形态变化。结果表明,最佳酶解条件为:料酶解pH 7.28,酶解温度45.29℃,时间5.05 h,所得酶解产物对张氏肝细胞的相对增殖率为53.1%。HE染色显示长鳍金枪鱼多肽对H_2O_2诱导的张氏肝细胞起一定保护作用。该工艺研究为长鳍金枪鱼多肽的分离纯化及开发护肝功能食品提供试验依据。
- 艾杨洋丁国芳丁国芳余方苗唐云平陈锐
- 关键词：长鳍金枪鱼增殖率护肝
- 长鳍金枪鱼多肽制备及其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用被引量：1
- 2020年
- 目的:以长鳍金枪鱼废弃物为原料提取多肽,探究其对H2O2诱导的张氏肝细胞的保护作用。方法:以H2O2诱导张氏肝细胞损伤建立细胞模型组,以相对增殖率为指标筛选长鳍金枪鱼废弃物最适酶种,通过正交试验确定最佳酶解条件。酶解产物经超滤、阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相高效液相色谱方法纯化分离得到多肽,用噻唑蓝(MTT)比色法对其每步分离效果进行评价。多肽活性的评价是利用试剂盒方法测定张氏肝细胞上清液中AST、ALT、MDA、ADH和SOD的含量,倒置显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测多肽对H2O2诱导后的张氏肝细胞凋亡的影响。结果:最适酶种为胰蛋白酶,最佳酶解条件为料液比1∶3(g/mL),pH 9,加酶量900 U/g,温度45℃,时间5 h。经一系列纯化后制成多肽,命名为长鳍金枪鱼多肽。其氨基酸序列为Gly-Ala-Pro-Gly-Glu-Arg-Gly-Ser-Lys-Cys-Phe-Lys。经长鳍金枪鱼多肽作用于H2O2诱导的张氏肝细胞后,ALT、AST、ADH和MDA含量下降,SOD含量上升。通过流式细胞仪检测发现晚期凋亡细胞相比于模型组减少明显。结论:利用酶解方法提取的长鳍金枪鱼多肽对H2O2损伤的张氏肝细胞具有一定的保护作用。
- 艾杨洋丁国芳丁国芳余方苗唐云平陈艳黄芳芳
- 关键词：H2O2损伤护肝
- 鳕鱼皮制备胶原蛋白肽的工艺优化被引量：5
- 2015年
- 以鳕鱼皮为原料,用不同剂量的木瓜蛋白酶酶解胶原蛋白,通过感官评定探讨珍珠岩去除腥苦味作用,再通过测定微生物含量,探讨微孔滤膜除菌过滤工艺,优化鳕鱼皮胶原蛋白肽制备工艺。结果表明:通过检测鳕鱼皮胶原蛋白肽分子量分布可知酶解工序添加5‰木瓜蛋白酶最为合理,且对腥苦味的去除也有一定的帮助;添加珍珠岩有助于去除鳕鱼皮胶原蛋白肽腥苦味;0.22μm微孔滤膜的除菌过滤能滤去微生物,简化后续杀菌工艺;优化工艺后未影响鳕鱼皮胶原蛋白肽收率。
- 顾斌洲王加斌滕芳芳丁国芳
- 关键词：胶原蛋白肽珍珠岩微孔滤膜腥味
- 绿侧花海葵寡肽对CCl4引起的小鼠急性肝损伤模型的影响被引量：2
- 2019年
- 研究绿侧花海葵寡肽(APP-H)对四氯化碳(CCl4)引起的小鼠急性肝损伤模型的影响。48只ICR小鼠随机分成6组,每组8只:正常对照组、肝损伤模型组、绿侧花海葵寡肽AAP-H低剂量组(75mg·kg^-1)、AAP-H中剂量组(150mg·kg^-1)、AAP-H高剂量组(300mg·kg^-1)和阳性对照组(联苯双酯(150mg·kg^-1))。连续灌胃7天,正常组与模型组用等计量纯水灌胃。第7天末采用腹腔注射1%CCl4橄榄油溶液制备小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清ALT、AST和小鼠肝脏组织匀浆中GSH-Px、SOD、MDA水平,HE染色观察APP-H对小鼠肝脏的病理学影响及微观结构影响。结果表明,AAP-H可降低小鼠血清中ALT、AST活性(P<0.05),抑制肝组织中MDA的上升(P<0.05),上调SOD和GSH-Px活性(P<0.05),使肝细胞的损伤减轻。本实验初步证明APP-H对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。
- 王予菲唐云平李小娟刘成娟陈亚南杲亚许杨最素丁国芳
- 关键词：急性肝损伤护肝
- 鳕鱼皮胶原蛋白肽在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制被引量：5
- 2018年
- 目的:鳕鱼皮胶原蛋白肽(cod skin collagen peptide,CSCP)对肝损伤具有较好的保护作用,但其吸收机制尚不明确,本实验拟采用人结肠腺癌Caco-2细胞单层模型对CSCP在肠道中的吸收机制进行研究,为CSCP在动物肠道内的吸收机制提供依据。方法:在进行转运实验前,先对CSCP在人工胃、肠液、不同pH值条件及在Caco-2细胞单层中的稳定性进行评价;采用CCK-8(cell counting kit-8)法确定CSCP在转运实验中的最高质量浓度,然后建立Caco-2细胞单层模型并测定跨膜电阻值和碱性磷酸酶活力以检验细胞单层的致密性、完整性和极化现象;考察转运时间、CSCP质量浓度、维拉帕米、MK-571、氧化苯砷和去氧胆酸钠对转运的影响,利用高效液相色谱法检测CSCP质量浓度并计算累积转运量和表观渗透系数。结果:在3h内,CSCP在人工胃、肠液及接近胃肠道pH值环境中基本保持稳定,转运过程中未见多肽发生水解。CSCP的转运具有时间和浓度依赖性,不受维拉帕米和氧化苯砷的影响,去氧胆酸钠和MK-571对CSCP的转运具有非常显著的促进作用(P<0.05)。结论:CSCP跨Caco-2细胞单层转运的机制为细胞旁路途径,其外排受到多药耐药蛋白的介导。
- 陈锐丁国芳丁国芳余方苗黄芳芳唐云平张小军张小军陈思
- 关键词：鳕鱼皮胶原蛋白肽CACO-2细胞转运机制
- 双齿围沙蚕多肽的制备及其抗肺癌A549细胞活性被引量：7
- 2017年
- 探讨双齿围沙蚕酶解多肽制备的关键技术及其对肺癌A549细胞的作用。以增殖抑制率为指标,确定最佳酶种并根据单因素试验和正交试验确定其最佳酶解工艺。经超滤获得1~3 ku的酶解液,通过阴离子色谱、凝胶过滤色谱和制备色谱对其进行进一步的分离纯化。采用四甲基偶氮唑蓝法测定沙蚕多肽PAP对肺癌A549细胞的增殖抑制率并通过倒置显微镜、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色及Hoechst荧光染色观察其细胞形态的变化。实验结果表明最佳酶种是碱性蛋白酶,其最佳酶解条件为:酶解温度50℃、pH 11、料液比1∶1(g/mL)、酶解时间6 h、加酶量300 U/g。经纯化获得的多肽命名为PAP,其氨基酸序列为Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe,且PAP对A549细胞的作用呈时间与剂量依赖关系,作用后细胞出现了凋亡的形态学特征。因此,PAP能明显抑制肺癌细胞A549增殖,可以诱导其发生凋亡而发挥抗肿瘤作用。
- 贾盈露丁国芳杨最素余方苗郑媛媛吴宗泽陈锐
- 关键词：双齿围沙蚕多肽抗肿瘤A549细胞
