国家自然科学基金(30100221)
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 相关作者：马天乐谭继宏涂水平江石湖乔敏敏更多>>
- 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生存素反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞株凋亡的实验研究
- 2004年
- 背景:生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白家族的成员之一,在肿瘤组织和人类胚胎组织中有高水平表达,在分化成熟的组织中不表达或低水平表达。有研究显示,64.5%～85%的结肠癌组织中存在生存素基因表达,其表达与结肠癌患者的不良预后有关。目的:观察生存素反义寡核苷酸对结肠癌细胞株凋亡的影响。方法:通过基因工程技术构建生存素反义寡核苷酸质粒pcDNA3鄄sur鄄As,以脂质体转染的方法将质粒DNA转入结肠癌细胞株。应用逆转录聚合酶链反应(RT鄄PCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测结肠癌细胞株中生存素mRNA和蛋白的表达,流式细胞仪和碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡,比色测定检测caspase鄄3活性的变化。结果:SW1116、COLO205、HT鄄29和SW1417四株结肠癌细胞株中均有生存素mRNA和蛋白表达。瞬时转染生存素反义寡核苷酸后,4株结肠癌细胞株的细胞凋亡率均明显增加,并呈剂量依赖性(P<0.01);结肠癌细胞株SW1116在荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞形态,细胞中生存素蛋白表达水平明显降低,caspase鄄3活性显著增加(P<0.01)。结论:应用生存素反义寡核苷酸抑制生存素基因的表达能诱导结肠癌细胞株凋亡,以生存素为靶基因的治疗方案可能有助于结肠癌患者的治疗。
- 谭继宏涂水平邹冰马天乐江石湖
- 关键词：生存素基因结肠癌细胞反义寡核苷酸凋亡质粒DNAPCDNA3
- XAF1在人肝癌组织中表达及机制研究被引量：4
- 2007年
- 目的XIAP相关因子1(XIAP-associated factor 1,XAF1)可与XIAP直接结合并拮抗其抗凋亡作用。本文研究了XAF1在人体肝癌组织表达,同时探讨了XAF1可能的作用机制。方法通过免疫组化方法检测了XAF1在人体肝癌组织中表达水平;建立稳定高表达XAF1的肝癌细胞克隆,通过基因芯片技术探讨了XAF1可能的作用机制。结果XAF1在人肝癌组织中表达免疫组化实验结果提示,XAF1在人肝癌组织中的表达阳性率为0.56%±0.03%,在癌旁组织中的表达阳性率为5.1±0.023%,两组均值间差异有统计学意义(P<0.05);基因芯片结果提示,7.03%的基因发生的改变有统计学意义。其中1.72%基因与细胞凋亡和细胞周期相关。在细胞凋亡和细胞周期相关基因中,41.9%与线粒体凋亡相关途径相关,可见XAF1可能通过线粒体内源性途径促进凋亡。结论XAF1在人体肝癌组织中表达水平低于癌旁组织;其抑制凋亡反应可能是通过内源性途径机制实现,XAF1有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。
- 于晓峰史冬梅涂水平马天乐谭继宏乔敏敏章永平江石湖
- 关键词：抑制蛋白肝肿瘤细胞凋亡
- XAF1抑制肝癌细胞增殖和诱导凋亡的实验研究被引量：6
- 2008年
- 目的X-染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)可与XIAP直接结合并拮抗其抗凋亡作用。本研究探讨XAF1基因在裸鼠体内抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用。方法应用免疫组织化学、TUNEL方法检测稳定高表达质粒DNA的肝癌细胞克隆Bel7404/XAF1、Bel7404/XAF1-AS和Bel7404/vector在体内的增殖和凋亡。结果Bel7404/XAF1组裸鼠肿瘤组织生长速度明显慢于其余两组的瘤组织(P<0.05),组成性高表达XAF1可以抑制裸鼠移植瘤的形成;TUNEL法检测Bel7404/vector的凋亡率为2.18%,Bel7404/XAF1凋亡率为7.09%,Bel7404/XAF1-AS凋亡率为2.91%(P<0.05)。结论XAF1能够在体内抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡,XAF1有可能成为肝癌基因治疗的新靶点。
- 涂水平史冬梅马天乐谭继宏乔敏敏章永平江石湖
- 关键词：XAF1肝细胞癌细胞凋亡
- pEGFP-C1-反义生存素重组质粒的构建和转染被引量：5
- 2002年
- 目的 构建pEGFP C1 反义生存素 (survivin)重组质粒 ,并转染入人MKN 45低分化胃腺癌细胞株。观察转染前后生存素基因的表达及对凋亡的影响 ,从基因水平探讨反义生存素核酸治疗胃癌的分子生物学机制 ,为今后利用反义基因治疗肿瘤提供实验和理论依据。方法 应用基因重组技术构建 pEGFP C1 反义生存素重组质粒 ,通过脂质体转染法转染人MKN 45胃腺癌细胞株 ,以流式细胞仪方法检测细胞凋亡 ,以RT PCR技术检测质粒转染前后生存素基因mRNA的表达。结果 pEGFP C1 反义生存素重组质粒转染MKN 45低分化胃腺癌细胞株后细胞凋亡明显增加 ,G2 /M期细胞减少 ,同时生存素基因在mRNA水平被抑制。结论 反义生存素核酸能抑制细胞增殖 ,减少生存素基因的mRNA表达而促进胃癌细胞凋亡目的 构建pEGFP C1 反义生存素 (survivin)重组质粒 ,并转染入人MKN 45低分化胃腺癌细胞株。观察转染前后生存素基因的表达及对凋亡的影响 ,从基因水平探讨反义生存素核酸治疗胃癌的分子生物学机制 ,为今后利用反义基因治疗肿瘤提供实验和理论依据。方法 应用基因重组技术构建 pEGFP C1 反义生存素重组质粒 ,通过脂质体转染法转染人MKN 45胃腺癌细胞株 ,以流式细胞仪方法检测细胞凋亡 ,以RT
- 邹冰涂水平谭继宏马天乐钟捷乔敏敏付华江石湖
- 关键词：基因重组胃癌细胞凋亡PEGFP-C1重组质粒
