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乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定: 流行性乙型脑炎(Epidemic Encephalitis B;Japanese Encephalitis,JE)简称乙脑,是由乙型脑炎病毒(Epidemic Encephalitis B Virus;Japanese ...; 闫丽萍华荣虹亓文宝童光志; 文献传递

乙型脑炎病毒结构蛋白基因的克隆表达与免疫特性分析被引量：1: 2008年; 研究分别克隆了乙型脑炎病毒SA14-14-2株的结构蛋白C、PrM/M及E蛋白基因。将3个结构蛋白基因分别插入表达质粒pET30(a)中,成功构建3个原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后利用IPGT诱导,SDS-PAGE分析结果表明,3个结构蛋白获得了表达,表达产物大小与预期一致。Western-blot分析结果表明:表达产物中PrM/M和E蛋白具有很好的免疫反应性,可被抗乙型脑炎病毒血清很好地识别;而C蛋白的免疫反应性较差,不能很好地被乙型脑炎病毒阳性血清识别。该结果提示,乙型脑炎病毒结构蛋白中除E蛋白外PrM/M蛋白也很可能具有诊断抗原的应用潜能。; 华荣虹童光志刘娣; 关键词：乙型脑炎病毒结构蛋白免疫

乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39特异性单克隆抗体的制备被引量：7: 2008年; 为了制备乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位特异性单克隆抗体,将编码乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位E39的DNA序列进行人工合成,随后插入表达载体pGEX-6p-1的限制性酶切位点BamHⅠ与XhoⅠ之间,构建了表位肽与GST的融合表达质粒。该表位融合蛋白经亲和层析纯化后免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。以化学合成的E39表位多肽为抗原,对融合细胞上清进行间接ELISA筛选。结果,筛选出1株分泌E39表位特异性抗体的杂交瘤细胞株,该杂交瘤细胞分泌抗体能力稳定。经鉴定,该单克隆抗体亚型为IgG2b,轻链类型为κ链。结果表明,用表位融合蛋白为抗原可以制备表位特异性单克隆抗体。; 华荣虹王斌陈娜莎于海刘天强马红刘娣童光志; 关键词：乙型脑炎病毒 E蛋白单克隆抗体表位

流行性乙型脑炎病毒E蛋白结构域Ⅲ的抗原表位鉴定与功能研究被引量：8: 2008年; 流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出,E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1(355VTVNPFVATSSA366)、E48-1(377PFGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明,E39为具有病毒中和活性的抗原表位.试验结果为进一步分析JEVE蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.; 闫丽萍华荣虹亓文宝童光志; 关键词：流行性乙型脑炎抗原表位

狂犬病毒ERA株糖蛋白在小鼠骨髓瘤细胞中的表达研究: 根据狂犬病毒糖蛋白(G蛋白)免疫活性及免疫特性,参考有关文献及用蛋白质亲疏水性分析程序分析,选取狂犬病毒ERA株糖蛋白膜外区的基因片段设计扩增引物,在上、下游引物中引入BamH I和EcoRI限制性酶切位点,并在下游引物...; 侯小强夏咸柱高玉伟杨松涛薛琳高明华; 关键词：狂犬病毒糖蛋白小鼠骨髓瘤细胞; 文献传递

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黑龙江省博士后基金(LBH-Z05213)