上海市卫生局科技发展基金(20114335)
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- 血红素加氧酶-1对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞转化生长因子β_1和纤维连接蛋白表达的影响
- 2014年
- 目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对高糖作用下体外培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转化生长因子β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将原代培养的第3代RPMC随机分为对照组、高糖组、钴原卟啉(CoPP)+高糖组和CoPP组。同步培养72h后,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞TGF-β1和FNmRNA表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中TGF-β1和FN的蛋白质水平。结果高糖组、CoPP+高糖组和CoPP组的HO-1mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组,其中CoPP+高糖组显著高于高糖组;高糖组和CoPP+高糖组的FNmRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组;高糖组、CoPP+高糖组TGF-β1mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组及CoPP组,其中CoPP+高糖组显著低于高糖组。结论 HO-1可抑制高糖诱导的RPMCTGF-β1和FN的表达,具有抗腹膜纤维化的作用。
- 朱淳黄海东王立瑞郭志勇
- 关键词：血红素加氧酶-1腹膜间皮细胞纤维连接蛋白
- 血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在大鼠腹膜间皮细胞中的表达
- 2013年
- 目的构建大鼠血红素氧合酶-1(HO-1)真核表达载体,并以该重组表达载体体外转染培养的大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)。方法从SD大鼠脾脏中提取总RNA,并经RT-PCR扩增HO-1基因的CDS区全长片段,将PCR产物克隆至pMD-18T载体,BamHⅠ和KpnⅠ双酶切后获取HO-1片段,用T4DNA连接酶将HO-1片段与双酶切后的真核表达载体pcDNA3.1(-)连接,构建大鼠HO-1真核表达载体pcDNA3.1(-)-HO-1。酶切鉴定和测序验证后,利用脂质体介导将重组质粒转染原代培养的RPMCs,通过RT-PCR和Western blotting检测RPMCs中HO-1的表达。结果成功克隆了大鼠HO-1基因并构建了其真核表达载体pcDNA3.1(-)-HO-1,酶切鉴定证实基因正确地插入表达载体中,并经DNA测序验证。pcDNA3.1(-)-HO-1转染RPMCs后,经RT-PCR和Western blotting检测,HO-1在RPMCs中获得高效表达。结论 HO-1基因真核表达载体的成功构建以及HO-1在RPMCs中的高效表达,为进一步研究HO-1在腹膜透析所致RPMCs损伤中的作用奠定了基础。
- 朱淳郭志勇刘怡晟黄海东蒋更如
- 关键词：血红素氧合酶-1腹膜间皮细胞
