山东省科技攻关计划(003100104)
- 作品数：5 被引量：12H指数：2
- 相关作者：韩金祥鲁艳芹黄海燕潘继红陈士俊更多>>
- 相关机构：山东省医药生物技术研究中心济南市传染病医院兖矿集团总医院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒被引量：2
- 2004年
- 目的:利用寡核苷酸芯片检测SARS病毒。方法:根据序列Blast比对分析结果,设计逆转录不对称PCR扩增引物和寡核苷酸检测探针。采用Trizol试剂从人静脉血中提取总RNA,经过逆转录和不对称PCR扩增得到的PCR产物与排列有寡核苷酸探针的芯片杂交,杂交后的芯片经激光共聚焦扫描分析。结果:SARS阳性样品与寡核苷酸芯片杂交后出现阳性杂交信号,具有不同二级结构的寡核苷酸探针杂交信号强度不一。结论:寡核苷酸芯片适于快速准确、平行大量地检测SARS病毒。
- 鲁艳芹韩金祥潘继红黄海燕
- 关键词：严重急性呼吸综合征寡核苷酸芯片
- DNA微阵列基片的化学处理被引量：3
- 2002年
- 对于合成后点样的DNA微阵列 ,基片的表面化学处理非常重要。它直接影响到样品与基片的结合效率 ,进而影响杂交结果。基片表面的各种化学修饰方法多种多样 ,物理吸附主要以赖氨酸包被为主。共价结合通常使用同源偶联分子或异源偶联分子 ,还可以在基片表面组装线状、分支状连接分子或包被琼脂糖。着重介绍了DNA微阵列的制备 ,即样品如何固定到玻璃基片上。总结了不同类型基片表面的化学修饰方法以及DNA与基片的化学结合。
- 鲁艳芹韩金祥
- 关键词：化学处理化学修饰
- 利用寡核苷酸膜芯片检测SARS病毒
- 2005年
- 目的:建立寡核苷酸膜芯片技术检测SARS病毒。方法:以SARS冠状病毒RNA聚合酶基因(P基因)作为目的基因,参考WHO公布的特异性引物序列,将SARSRNA进行P基因克隆。以地高辛标记的引物,扩增质粒DNA,在P基因上设计11条寡核苷酸探针,点于尼龙膜,制备膜芯片,与地高辛标记的PCR产物杂交显色。结果:以此特异性引物成功地扩增出了440bp的基因片段;以T载体成功的克隆了此基因;克隆的P基因为靶序列,与膜芯片杂交显示,能与probe1,probe2,probe4,probe6,probe8,probe96条正义链特异性探针稳定杂交,其中probe1,probe4,probe9杂交效果最好,作为最后选择的探针。结论:膜芯片技术能快速敏感地鉴定出标本中的SARS病毒RNA。
- 刘毅高雪芹韩金祥潘继红黄海南梁浩宋长征
- 关键词：SARS病毒杂交
- 寡核苷酸芯片制备及其杂交条件的优化被引量：5
- 2004年
- 探讨了2种不同硅烷化试剂3-氨基丙基三甲氧基硅烷、三甲氧基丙基二乙烯基三胺及其不同处理时间对寡核苷酸探针固定效率的影响.结果表明3％的3-氨基丙基三甲氧基硅烷的95％丙酮溶液处理2h,然后用5％戊二醛溶液处理1 h,可以获得很好的杂交信号.对比polyT15空间子,含有相同寡核苷酸序列的PEG6、PEG12空间子能使杂交信号增强6、8倍.在以pH值9-11的碳酸盐缓冲液为点样液时,杂交信号随着pH值的逐渐升高而略有下降.寡核苷酸探针的浓度和荧光标记样品的浓度影响杂交结果,当寡核苷酸探针的浓度为25μmol、所用长度为110bp的荧光标记的PCR产物为2μL,经杂交液6×SSEPT稀释至10μL时,可以获得很好的杂交信号.
- 鲁艳芹韩金祥陈士俊黄海燕
- 关键词：硅烷化寡核苷酸探针杂交
- 乙肝病毒突变位点的寡核苷酸与肽核酸阵列杂交检测被引量：2
- 2007年
- 目的:比较利用寡核苷酸阵列和肽核酸阵列检测乙肝病毒突变位点。方法:针对乙肝病毒常见的1762A-T与1764G-A联合突变、1858C-T、1896G-A 3个突变位点,设计寡脱氧核苷酸和肽核酸检测探针,探针经固定后分别与不对称PCR荧光标记的靶DNA杂交,扫描分析荧光信号强度,DNA序列分析3位点的变异情况。结果:对于寡核苷酸芯片,1762与1764联合位点、1858以及1896位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为1.44、1/1.24、1.05。对于肽核酸芯片,相应位点的野生型探针与突变探针荧光强度的比值分别为2.8、1/3.02、1.71。DNA序列分析结果表明该样本中1858位点为突变位点,1896以及1762与1764联合位点不存在突变。结论:与寡脱氧核苷酸探针相比,肽核酸与靶DNA杂交结合能力和识别单碱基错配能力均高于相应的寡脱氧核苷酸,二者杂交结果与测序结果一致。
- 鲁艳芹韩金祥沈忠林朱波
- 关键词：突变杂交乙肝病毒
