为建立水蜜桃多酚氧化酶(PPO)高效分离纯化方法,并明确该酶的酶学特性,本研究采用柱层析法对该酶进行分离纯化,对其反应特性及稳定性进行研究。结果表明,Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析法对水蜜桃PPO的纯化倍数与硫酸铵分级沉淀法相近,但其得率为89%远高于后者;采用PhenylSepharose CL-4B、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephaoryl HR S-200三级柱层析联用的方法对PPO分离纯化,获得PPO总纯化倍数为12.40倍,总得率为20%;该PPO组分经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析得到单一蛋白条带,其分子量为81 k Da。纯化后的水蜜桃PPO对(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素的米氏常数分别为0.14 m M和0.12 m M,最适反应p H值为7.0,最适反应温度为40℃。纯化后的水蜜桃PPO对热以及低p H值都很不稳定。本研究结果为进一步研究PPO酶促褐变机制提供了理论指导,同时也为其他果蔬中PPO的分离纯化提供参考。
