国家高技术研究发展计划(2002AA227011)
- 作品数：21 被引量：103H指数：7
- 相关作者：马立新陆云华夏昆夏家辉潘乾更多>>
- 相关机构：湖北大学中南大学宜春学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划湖北省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生文化科学更多>>
- 利用核糖体基因区打靶载体靶向表达改造型人凝血因子Ⅷ被引量：4
- 2005年
- 构建了携带改造型hFⅧ(hFⅧ-BDDAK39)的核糖体基因区靶向表达载体pHrneo-BDDAK39,并将其转入人纤维肉瘤细胞(HT1080),检测其定点整合的能力及hFⅧ-BDDAK39的表达情况.结果显示,pHrneo-BDDAK39能够成功地将hFⅧ-BDDAK39靶入到HT1080细胞的核糖体基因区,定点整合效率达到2.0×10^(-5),并且靶入的hFⅧ-BDDAK39能有效表达,表达量为(32±5)ng·10~6细胞^-1·24h^(-1).这为利用此靶向表达载体进行血友病A的基因治疗提供了重要的实验依据.
- 刘雄昊刘慕君佘华文路薛志刚梁德生蔡芳潘乾龙志高邬玲阡戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：靶向表达核糖体基因改造型打靶载体纤维肉瘤
- 中老年人骨髓间质干细胞的生物学特性研究被引量：9
- 2005年
- 目的:研究中老年人骨髓间质干细胞(MSCs)的生物学特性。方法:用Ficoll-Paque分离不 同年龄段供者MSCs体外培养,进行诱导分化,用流式细胞术检测表面标志,核型分析观察细胞染 色体的稳定性,裸鼠实验、软琼脂实验观察致瘤性。结果:中老年人每毫升骨髓分离的单个核细 胞量和MSCs增殖速度与青年人无显著差异;中老年人不同代次的MSCs诱导后具有向成骨细胞 和成脂细胞分化的能力;分离培养的MSCs表达CD44,不表达CD34;传至第10代核型未见异常, 未见致瘤性。结论:中老年人MSCs有较强的体外增殖能力和多向分化潜能,遗传背景稳定。
- 张延洁蔡芳杨一峰梁德生潘乾龙志高邬玲仟戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：中老年人骨髓间质干细胞流式细胞术检测多向分化潜能细胞染色体致瘤性
- 水稻质体多顺反子表达载体的构建及其对烟草质体的转化被引量：5
- 2006年
- 目的尝试水稻质体多顺反子定点整合表达载体转化到烟草质体中表达。方法根据已发表的相关序列,分别设计引物,通过PCR技术克隆了一系列构建水稻质体多顺反子定点整合表达载体所需的元件:质体核糖体(16S)RNA操纵元启动子(Prrn)、质体psbA基因3′端终止子(psbA3′)、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因(aadA)、水稻质体基因组高频同源重组片段(psbC/trnG,大小3362bp),命名为crDNA、甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp)。构建了水稻质体多顺反子定点整合表达载体pLM21(-psbC-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′-trnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片5枪,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选。结果获得质体转基因烟草4株。用PCR、激光扫描和Westernblot等方法检测都证实man、gfp、aadA三个基因且均得到表达,用RFLP证实表达盒整合到烟草质体基因组中。结论水稻质体多顺反子定点整合表达载体已整合到烟草质体基因组中,并得到表达。
- 陆云华马立新严红
- 关键词：水稻多顺反子基因枪转化
- 用原核增强子提高hTERT启动子介导的基因表达被引量：8
- 2006年
- 目的：探讨原核增强子能否提高hTERT启动子的转录活性及对其肿瘤特异性的影响。方法：将增强子SV40、CMV分别或组合构建一系列GFP和荧光素酶报告基因载体，转染人肝癌、鼻咽癌、宫颈癌、结直肠癌细胞、成纤维肉瘤和正常成纤维细胞，流式细胞仪计数和双荧光酶分析系统检测基因的表达效率。结果：在正常成纤维细胞中这些载体均不能有效表达；而在肿瘤细胞中hTERT启动子能介导基因表达但效率不高，增强子能使基因表达增强3～26倍，特别是单独CMV增强子和SV40-CMV双增强子使荧光素酶表达提高20-26倍，是常用的CMV增强子／启动子的2～7倍；完整CMV增强子／启动子对hTERT启动子的活性影响因不同细胞而异。结论：增强子能显著增强hTERT启动子的转录活性并对其肿瘤特异性没有影响，CMV增强子或SV40-CMV双增强子／hTERT启动子是高效特异的通用调控元件，用于靶向性肿瘤基因治疗具有巨大潜力。
- 王丽娜李卓薛志刚薛金锋胡友金周银李剑潘乾夏昆梁德生夏家辉
- 关键词：端粒基因表达
- 番茄质体多顺反子定点整合表达载体的构建及其转烟草的研究被引量：4
- 2006年
- 根据烟草叶绿体高频同源重组片段的已知序列(GenBank Z00044.1)设计引物,用PCR的方法克隆到1个3.663 kb的番茄叶绿体DNA片段(psbD/trnG),命名为ctDNA。该片段与GenBank中烟草的相应片段有96.7%同源性,与本文所用的烟草的相应片段有95.8%同源性。以其为外源多顺反子定点整合介导的同源重组片段,与来自烟草叶绿体的强启动子Prrn和终止子psbA3′,以及甘露聚糖酶基因man、绿荧光蛋白基因gfp、氨基糖苷3′-腺苷酰基转移酶基因aadA构建番茄质体多顺反子定点整合表达载体pLM2(-psbD-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3′t-rnG-)。将该载体用基因枪轰击烟草叶片,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选,获得质体转基因烟草3株。用PCR、激光扫描、Western blot、RFLP等方法检测都证实man、gfp、aadA基因已整合到烟草质体基因组中,且均得到表达。用番茄质体多顺反子定点整合表达载体成功实现在烟草质体中的表达。
- 陆云华马立新蒋思婧
- 关键词：多顺反子基因枪法
- 甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体构建被引量：2
- 2008年
- [目的]为研究质体定位的乙酰辅酶A羧化酶转化叶绿体奠定基础。[方法]根据GeneBank上的甘蓝型油菜的叶绿体DNA序列设计1对引物,通过PCR扩增获得与甘蓝型油菜叶绿体基因组可发生同源重组的DNA片段,构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体,并在大肠杆菌中通过平板定性分析和Western印迹对所构建载体上的表达盒进行功能鉴定。[结果]以甘蓝型油菜的叶片叶绿体基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得4 357 bp的DNA片段,包含2个开放阅读框RbcL和β-CT。成功构建了甘蓝型油菜叶绿体多顺反子单交换表达载体pHBM720,而且同一多顺反子的3个基因均在大肠杆菌中得到表达。[结论]该叶绿体多顺反子单交换表达载体具有较强的通用性与安全性,比双交换表达载体更具优越性。
- 武玉永姚庆收马立新
- 关键词：甘蓝型油菜叶绿体DNA多顺反子
- 番茄叶片再生系统建立的研究被引量：8
- 2005年
- 比较了不同基本培养基、不同激素及其不同浓度组合对4个番茄栽培品种叶片诱导愈伤组织、不定芽分化及其生根的效果.结果表明:MS+6-BA 3.0mg/L+IAA0.2mg/L+蔗糖30 mg/L(pH=5.8)对愈伤组织诱导及诱导愈伤组织分化不定芽的效果最佳;MS+IAA 0.1mg/L+蔗糖20mg/L培养基对生根最好。
- 陆云华张新马立新
- 关键词：番茄幼叶培养基优化
- 人源载体介导的minidystrophin-EGFP融合基因在Cos-7细胞中的表达(英文)被引量：7
- 2005年
- 目的构建微小肌营养不良蛋白(minidystrophin)和增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluoresce protein, EGFP)融合基因的人源载体,观察该载体在Cos-7细胞中的表达。方法以正常人肌营养不良基因cDNA(GenBank NM 004006)为模板,通过PCR克隆的方法构建minidystrophin基因,融合EGFP基因后连接到人源载体pHrneo,大量提取重组质粒,转染Cos-7细胞,通过逆转录聚合酶链反应、荧光显微镜观察等方法检测该载体在细胞内的表达。结果成功构建pHrnDysG载体,转染Cos-7后,逆转录聚合酶链反应可扩增出735 bp特异条带,荧光显微镜观察可见表达蛋白分布于细胞膜上。结论pHrn载体介导的minidystrophin基因可以在真核细胞表达,并被有效地转运至细胞膜,可望用于杜氏肌营养不良基因治疗的研究。
- 梁羽梁德生薛志刚龙志高邬玲仟潘乾胡艺俏戴和平夏昆夏家辉
- 关键词：融合基因COS-7细胞基因表达杜氏肌营养不良
- 腓骨肌萎缩症的临床和遗传特点被引量：11
- 2005年
- 目的探讨腓骨肌萎缩症(CMT)的临床和遗传特点.方法对70个CMT家系110例患者的临床资料和遗传史进行回顾性分析.结果本组男∶女为2.03∶1,发病年龄1～61岁,平均19.1岁,30岁以前发病者占78.2%;有家族史者70例(63.6%),其中常染色体显性遗传17个家系,近亲结婚者5个家系(6.9%).表现双下肢肌萎缩106例(96.4%),双上肢远端肌无力与肌萎缩48例(43.6%),鹤立腿64例(58.2%),弓形足68例(61.8%),踝反射减弱及消失108例(98.2%).肌电图检查均为神经源性损害,肌活检37例均为神经源性肌萎缩;神经活检25例,髓鞘脱失和雪旺细胞增生和/或'洋葱头'样改变20例,轴索变性5例,未发现腊肠样结构.结论 CMT多于儿童期至青少年期发病,男性多于女性;遗传方式以常染色体显性遗传多见.神经电生理及病理检查对CMT的诊断和分型有重要作用.
- 张付峰唐北沙罗巍张如旭赵国华严新翔
- 关键词：腓骨肌萎缩症
- 烟草质体多顺反子定点整合表达载体的构建和转化被引量：3
- 2005年
- 构建了烟草质体多顺反子定点整合表达载体pLM4(-psaA-Prrn-RBS-man-RBS-gfp-RBS-aadA-psbA3'-psbC-)。用基因枪将该载体轰击烟草叶片5次,用添加了壮观霉素的选择分化培养基筛选,获得质体转基因烟草6株。用PCR、激光扫描、Westernblot和RFLP等方法检测都证实多顺反子表达盒中的3个基因甘露聚糖酶基因(man)、绿荧光蛋白基因(gfp)、氨基糖苷3'-腺苷酰基转移酶基因(aadA)已整合到烟草质体基因组中,且均得到表达。
- 陆云华马立新陈俊蒋思婧
- 关键词：多顺反子烟草叶绿体基因枪法
