广西壮族自治区自然科学基金(2012GXNSFDA053021)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 不同浓度幽门螺杆菌对胃癌细胞增殖凋亡及FAF1 mRNA表达的影响
- 2014年
- 目的研究不同浓度幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染对人胃癌细胞HGC-27生长及Fas相关因子1(fasassociated factor 1,FAF1)m RNA表达的影响,探讨Hp致胃癌发生的分子机制。方法人胃癌细胞HGC-27与不同浓度Hp标准菌株NCTC11637共培养24 h,根据感染复数(细胞/细菌比)分为1∶1共培养组、1∶50共培养组、1∶100共培养组、1∶200共培养组及对照组(未与Hp共培养),采用噻唑蓝(MTT)比色法测定0 h、12 h、24 h、48 h的OD值,绘制细胞生长曲线。共培养24 h后以流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)技术检测HGC-27细胞FAF1 m RNA的相对表达量,比较不同浓度Hp感染前后FAF1 m RNA表达的变化。结果经革兰氏染色及生化实验证实培养细菌为Hp。与对照组相比,共培养12 h时,1∶50共培养组细胞增殖活性升高(P<0.05),1∶1共培养组、1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞增殖活性低于对照组(P<0.05);共培养24 h、36 h、48 h时,各共培养组细胞增殖活性均低于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,1∶1共培养组及1∶50共培养组细胞凋亡率及FAF1 m RNA的相对表达量与对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05);1∶100共培养组及1∶200共培养组细胞凋亡率明显升高,FAF1 m RNA的相对表达量较对照组明显降低(P<0.05)。结论 Hp感染可导致胃癌细胞增殖凋亡失衡,下调胃癌细胞FAF1 m RNA的表达,FAF1m RNA的表达量与Hp的感染浓度有关,FAF1 m RNA的表达下调可能是Hp致胃癌发生的机制之一。
- 冯洁刘爱群袁燕玲葛莲英
- 关键词：胃肿瘤幽门螺杆菌增殖凋亡
- 过表达FAF1基因慢病毒构建及对人胃癌细胞凋亡影响被引量：2
- 2014年
- 目的:构建过表达FAS相关因子1(fas-associated factor 1,FAF1)基因的慢病毒载体,探讨其对胃癌细胞凋亡的影响。方法:RT-PCR法扩增FAF1cDNA,亚克隆至GV218质粒中,经酶切及DNA测序鉴定正确以后,把含有FAF1基因的重组质粒与pHelper1.0和pHelper2.0载体质粒转染至293T细胞包装慢病毒。用包装好的慢病毒感染人胃癌细胞HGC-27,Real time PCR和蛋白质印迹法检测转染前后FAF1基因和蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡的改变。结果:FAF1基因扩增产物长度为1 996bp,酶切及测序结果鉴定GV218-FAF1质粒构建正确,成功包装的慢病毒滴度为2×108 TU/mL。HGC-27细胞转染FAF1过表达慢病毒48h后,细胞形态由长梭形变得不规则。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1基因mRNA表达水平2.436±0.538,是阴性对照组1.086±0.226的2.24倍,P<0.001;是空载转染组1.182±0.381的2.06倍,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组FAF1蛋白相对表达水平1.515±0.377,显著高于阴性对照组的0,P<0.001;也显著高于空载转染组的0,P<0.001。过表达FAF1慢病毒转染组凋亡率(84.66±5.92)%显著高于阴性对照组的(4.60±3.80)%,P<0.001;也显著高于空载转染组的(7.32±3.82)%,P<0.001。结论:成功构建并鉴定FAF1基因过表达慢病毒载体,FAF1基因表达上调使胃癌细胞凋亡增加。
- 冯洁袁燕玲刘爱群葛莲英
- 关键词：胃肿瘤慢病毒细胞凋亡印迹法
- 幽门螺杆菌感染相关胃癌的差异蛋白分析被引量：4
- 2015年
- 目的 利用核素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选幽门螺杆菌（Hp）感染相关胃癌的差异蛋白,以便寻找胃癌的生物学标志物和药物治疗靶标.方法 分别收集人胃癌细胞HGC-27及与Hp共培养24h的HGC-27的各组蛋白,iTRAQ试剂标记后利用强离子交换柱（SCX）分离,经串联质谱鉴定及相对定量;同时通过查阅Pubmed数据库中1995年1月至2014年7月公开发表的文献,其中使用任一种差异蛋白质组学方法鉴定Hp感染相关胃癌的差异蛋白;将iTRAQ数据与文献报道数据进行荟萃分析,对获得的差异蛋白采用PANTHER数据库进行基因功能聚类（GO）分析、PANTHER蛋白分类及路径（Pathway）分析.结果 通过iTRAQ标记鉴定出Hp感染相关胃癌细胞HGC-27的差异蛋白共47个,其中下调表达的37个,上调表达的10个.通过文献检索共纳入符合要求的文献7篇,其中2个以上实验室（包括iTRAQ实验）重复发现的蛋白为21个.将iTRAQ数据与文献报道数据荟萃分析得到65个差异蛋白,进行GO分析显示,生物学过程主要集中在细胞组分重组和各种代谢过程;分子功能主要集中在核酸、DNA结合,具有催化活性和转移酶活性;PANTHER蛋白分类主要为分子伴侣、结合蛋白、骨架蛋白、转氨酶和转录因子;Pathway分析显示差异蛋白主要参与帕金森疾病通路、凋亡信号通路和促性腺激素释放激素（GnRH）通路.结论 筛选出多种与Hp感染相关胃癌的差异蛋白,为胃癌患者的早期诊断提供可能的生物学标志物和药物治疗的靶标.
- 陈佳玮袁燕玲王江燕刘爱群葛莲英
- 关键词：胃肿瘤幽门螺杆菌蛋白质组学
