国家自然科学基金(39970776)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 相关作者：易著文何小解朱敏周钢张新萍更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院中南大学深圳市儿童医院更多>>
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- 反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响
- 2007年
- 目的研究反义单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）对系膜细胞MCP—1分泌及增生的影响。方法用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞，得到转染反义MCP—1的系膜细胞，经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合。脂多糖（LPS）刺激反义MCP-1系膜细胞，以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照，观察其增生情况。用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2（CCR2）的mRNA表达。ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌。结果经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞，其基因组DNA中有外源基因的整合。在正常的培养条件下，反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义；MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达；MCP-1的蛋白也有微弱表达。在LPS的刺激下，反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高；MCP-1蛋白的分泌均增多。与对照组比较，反义组系膜细胞的增生受抑制[（16．83±1．16）×10^4／ml比（19．63±1．85）×10^4／ml]，MCP—1的mRNA的表达较少（0．424比0．866，P〈0．01），MCP—1蛋白的分泌减少。CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致。结论（1）逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染。（2）反义MCP-1可降低系膜细胞MCP—1的转录和翻译。（3）反义MCP—1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生。（4）大鼠系膜细胞具有CCR2的表达，在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。
- 张新萍易著文何小解何庆南朱敏周钢
- 关键词：单核细胞化学吸引蛋白质1CC系膜细胞
- 正义、反义MCP-1基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装被引量：1
- 2004年
- 为构建含单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)基因的重组逆转录病毒pLXSN/MCP-1质粒.用RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA,将其与Pgem-TE连接,用限制性内切酶EcoRⅠ对pTE-MCP-1和逆转录病毒质粒pLXSN分别进行酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN/MCP-1.经BglⅡ,XhoⅠ酶切鉴定MCP-1在质粒中的方向,用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果证实经过RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA与所需的大小一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细4胞测定病毒滴度为17×10cfu/mL.
- 张新萍易著文何小解何庆南朱敏周钢
- 关键词：逆转录病毒基因转染
- 维生素E对肾小球系膜细胞一氧化氮分泌及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 研究维生素E(VitE)对大鼠肾小球系膜细胞 (GMCs)单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)、一氧化氮 (NO)表达的影响。方法 将研究大鼠分对照组、脂多糖 (LPS)组、5 0mg/LVitE +LPS组、10 0mg/LVitE +LPS组、2 0 0mg/LVitE +LPS组共 5组培养肾小球系膜细胞 ,分 2 4、4 8、72h 3个时间段收集培养上清及培养细胞 ;实验末应用生化法测定培养上清NO水平 ,应用ELISA技术检测培养上清MCP 1水平 ,应用RT PCR检测MCP 1mRNA表达。结果 2 4h末LPS组GMCsNO分泌均较对照组降低 (P <0 .0 1) ,其他各组GMCsNO分泌均较对照组增高 (P均 <0 .0 1) ,MCP 1分泌与表达均较对照组增高 (P均 <0 .0 1) ;4 8h末各组NO分泌均较对照组降低 ,LPS组在 4 8h末与 72h末MCP 1分泌较其他各组明显增高 (P均 <0 .0 1) ;与LPS组相比 ,4 8h末与 72h末不同浓度VitE组MCP 1分泌降低 ,与对照组比较各组在不同时间段MCP 1mRNA表达明显增高 (P均 <0 .0 1) ,MCP 1mRNA表达在 4 8、72h较LPS组明显降低 (P均 <0 .0 1) ,且发现各组MCP 1mRNA表达在4 8、72h无明显差异 ,10 0mg/LVitE组与 2 0 0mg/LVitE组较 5 0mg/LVitE组MCP 1mRNA表达明显降低 (P均 <0 .0 1) ,但两组间无明显差异 ,经相关分析表明 ,NO分泌与MCP 1分泌与表达明显负相关 (γ =0 .6 13、0 .
- 赵维玲何小解李长钢易著文吴小川
- 关键词：维生素E肾小球系膜细胞一氧化氮单核细胞趋化蛋白-1
