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国家自然科学基金(30500521): 作品数：17 被引量：52H指数：5; 相关作者：郭东生雷霆王宝峰陈如东蔡明俊更多>>; 相关机构：华中科技大学浙江大学医学院附属第二医院三峡大学第一临床医学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

LRIG1过表达对神经胶质瘤细胞EGFR信号传导的抑制作用被引量：2: 2010年; 目的通过检测LRIG1在胶质瘤细胞中的亚细胞定位及LRIG1对EGFR的作用，探讨LRIG1对EGFR信号通路的抑制效应。方法用Confocal法及Westernblot法检测LRIG1质粒转染前后H4细胞中EGFR和LRIG1表达，MTT法检测LRIG1对细胞增殖的影响。结果在H4细胞中LRIG1低表达，EGFR高表达，均主要为膜表达；转染LRIG1质粒后，LRIG1表达增强，EGFR表达下降；细胞的生长受抑制。结论LRIG1主要位于胶质瘤细胞膜上，通过促进EGF受体的降解抑制其信号传导。; 叶飞王宝峰谢蕊繁李俊徐同江曾亮毛峰雷霆郭东生; 关键词：神经胶质瘤 LRIG1 EGFR

LRIG1基因抑制胶质瘤细胞生长的机制被引量：9: 2009年; 目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）基因与表皮生长因子受体（EGFR）在人脑胶质瘤细胞中的相互作用及其对肿瘤细胞生长影响的机制。方法用免疫共沉淀法检测人脑胶质瘤细胞系GL15中LRIG1与EGFR的相互作用。构建针对LRIG1基因的干扰片段及非特异性的对照片段分别转染GL15细胞系，G418（600mg／L）筛选出稳定株，Westernblot法检测LRIG1表达的改变及其对EGFR表达的影响；噻唑蓝（MTT）比色法检测LRIG1表达下调对胶质瘤细胞增殖的影响。结果免疫共沉淀法表明胶质瘤细胞系GL15中LRIG1与EGFR存在相互作用。成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体，转染细胞后LRIG1基因表达下降54．7％；同时干扰组细胞EGFR蛋白水平与阴性对照组比较上升了57．1％。MTY结果显示干扰组细胞增殖率高于对照组。结论LRIG1通过与EGFR结合发挥抑癌作用，干扰LRIG1表达可削弱这种作用，导致肿瘤细胞增殖加速。; 刘红朝谢蕊繁蔡明俊陈如东郭东生雷霆; 关键词：胶质瘤表皮生长因子受体 RNA干扰

LRIG3特异性RNA干扰真核表达载体的构建及稳定株筛选被引量：3: 2009年; 目的构建LRIG3(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3,LRIG3)基因特异的RNA干扰质粒,为探讨抑制LRIG3基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行为调控的研究奠定基础。方法根据GenBank数据库提供的LRIG3基因核苷酸序列,选择设计2条能转录短发卡RNA(shRNA)的DNA序列,命名为LRIG3-shRNA1、LRIG3-shRNA2,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为negative-shRNA。并与pGenesil2质粒载体连接,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,使用限制性内切酶SalI酶切电泳,DNA测序鉴定。3种重组表达载体转染胶质瘤细胞系GL15细胞,用G418筛选后挑选单克隆并扩增获得稳定株。逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别在mRNA和蛋白水平上检测LRIG3的表达。结果重组质粒成功转化感受态大肠杆菌,经SalI酶切琼脂糖凝胶电泳分析,结果表明寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,序列完全正确。G418筛选出稳定转染三种质粒的GL15细胞,转染pGenesil2-LRIG3-shRNA组细胞LRIG3mRNA和蛋白表达明显低于转染pGenesil2-negative-shRNA组。结论成功构建针对LRIG3基因的特异性shRNA真核表达载体,转染细胞后可抑制LRIG3基因表达,为进一步研究其基因功能奠定了基础。; 蔡明俊谢蕊繁韩林陈如东王宝峰叶飞郭东生雷霆; 关键词：RNA干扰脑胶质瘤细胞

LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响被引量：3: 2011年; 目的探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）和Ki-67表达的影响及其机制。方法用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87，筛选稳定株，分别分成实验组和对照组，通过逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测各组细胞LRIG3表达的变化，应用噻唑蓝（MTr）比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响，用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物（SABC）法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果LRIG3过表达组细胞中LRIG3mRNA水平与对照组比较分别升高67．6％（U251）和79．9％（U87），LRIG3蛋白表达水平分别升高62．3％（U87）和91．0％（U251）。MTF法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为（47．81±4．67）％，实验组为（27．49±3．17）％，U87细胞对照组PCNA阳性率为（55．50±4．01）％，实验组为（33．60±4．82）％，差异均有统计学意义（P〈0．05）。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为（48．50±6．11）％，实验组为（24．30±3．76）％，U87细胞对照组Ki-67阳性率为（55．20±4．19）％，实验组为（23．50±4．60）％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。; 杨洪宽毛峰王宝峰万峰郭东生雷霆; 关键词：神经胶质瘤增殖细胞核抗原

LRIG3基因特异性RNA干扰真核表达载体的构建及胶质瘤细胞系稳定株筛选: 目的:构建LRIG3(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 3,LRIG3)基因特异的RNA干扰质粒,为探讨抑制LRIG3基因表达对脑胶质瘤细胞生物学行...; 蔡明俊郭东生雷霆; 关键词：RNA干扰脑胶质瘤细胞; 文献传递

LRIG3基因沉默对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及PCNA和Ki-67表达的影响被引量：5: 2009年; 背景与目的:富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(leucine-rich repeats and immunoglobin-like domains3,LRIG3)是LRIG基因家族成员之一,在多种肿瘤中均有表达下调,但其作用尚不明了。本研究旨在探讨RNA干扰沉默LRIG3基因表达对神经胶质瘤细胞系GL15增殖及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法:用携带U6启动子和LRIG3特异性短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG3-shRNA1、pGenesil2-LRIG3-shRNA2及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染胶质瘤细胞系GL15,G418筛选出稳定株,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测LRIG3表达的改变,应用噻唑蓝(MTT)法检测稳定转染后对GL15细胞增殖的影响,应用免疫组化SABC法检测对照组和实验组GL15细胞中PCNA和Ki-67的表达。结果:shRNA1及shRNA2组细胞LRIG3 mRNA水平与对照组相比分别下降了52.4%和63.8%,LRIG3蛋白水平分别下降了50.9%和67.4%。MTT结果显示实验组细胞增殖率高于对照组。对照组细胞PCNA阳性率为(35.40±5.69)%,shRNA1及shRNA2组细胞PCNA阳性率分别为(72.13±5.64)%和(81.93±5.23)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67阳性率在对照组细胞为(49.73±5.73)%,shRNA1及shRNA2组细胞分别为(82.27±5.50)%和(88.67±3.52)%,差异均有统计学意义(P<0.01)。Ki-67表达与PCNA表达呈正相关(r=0.932,P<0.001)。结论:下调LRIG3基因表达可促进胶质瘤细胞的增殖。; 蔡明俊谢蕊繁韩林陈如东王宝峰叶飞郭东生雷霆; 关键词：神经胶质瘤增殖细胞核抗原 KI-67核抗原

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3表达对胶质瘤细胞周期和凋亡的影响被引量：2: 2009年; 目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3（LRIG3）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法设计两对含LRIG3特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒及含非特异性shRNA的对照质粒，转染胶质瘤细胞系GL15、G418筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测LRIG3表达的改变，流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期变化，AnnexinV—FITC／PI双标记分析细胞凋亡。结果实验组细胞LRIG3mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了52．4％、63．8％和50．9％、67．4％。流式细胞仪分析显示，实验组的G2／M期细胞细胞百分率比对照组明显增加，细胞增殖指数显著增加（P〈0．01）；LRIG3基因表达下调后还具有显著的抗凋亡作用（P〈0．05）。结论LRIG3特异性siRNA可明显抑制LRIG3基因的转录和表达，从而促进GL15细胞的增殖和使细胞周期阻滞在G2／M期并能抑制其凋亡。; 蔡明俊陈如东王宝峰叶飞郭东生雷霆; 关键词：胶质瘤 RNA干扰细胞周期脱噬作用

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制被引量：1: 2009年; 目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG2-shRNA（siRNA）及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-scramble—shRNA（set）转染胶质瘤细胞系GL15、G418（600mg/L）筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westemblot法检测LRIG2和表皮生长因子受体（EGFR）表达的改变。噻唑蓝（MTT）比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖，流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变。结果实验组细胞LRIG2mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68．6％和62．3％，EGFR蛋白水平下降了32．6％。MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组。细胞周期分析表明对照组G0／G1期为（26．72±2．10）％，实验组为（36．58±3．29）％（P〈0．05），LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0／G1期。结论GL15细胞经RNA干扰基因表达后，LRIG2mRNA和蛋白水平明显降低，同时EGFR蛋白水平下降，从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0／G1期。LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长。; 王宝峰蔡明俊韩林陈如东郭东生雷霆; 关键词：表皮生长因子受体细胞生长细胞周期

Effects of RNAi-mediated Gene Silencing of LRIG1 on Proliferation and Invasion of Glioma Cells: 2012年; The effects of RNAi-mediated gene silencing of LRlG1 on proliferation and invasion of the human glioma cell line U251-MG and the possible mechanisms were explored in this study. The plasmids pGenesil2-LRIG1-shRNA1 and pGenesil2-LRIG1-shRNA2 were transfected into U251-MG glioma cells respectively by using Lipofectamine 2000 and the transfected cells in which the LRIG1 expression was stably suppressed were selected by G418. The cells transfected with nega-tive shRNA served as control. The expression levels of LRIG1 mRNA and protein were measured by qRT-PCR and Western blotting, respectively. The cell cycle was analyzed by flow cytometry. The results showed that LRIG1 mRNA expression was reduced by 70% and 58% and LRIG1 protein ex-pression by 58% and 26% in U251-MG cells transfected with pGenesil2-LRIG1-shRNAl and pGene-sil2-LRIG1-shRNA2 relative to the negative shRNA-transfected U251-MG cells. The proliferative capacity of the LRIG1 specific siRNA-transfected cells was stronger than that of control cells. Cell cycle analysis showed that silencing LRIG1 significantly increased the percentage of S phase cells and the proliferation index (P<0.01). Moreover, silencing LRIG1 could promote the invasion of U251-MG cells (P<0.05). These findings suggested that LRIG1-targeting siRNA can exert a dra-matically inhibitory effect on RNA transcription and protein expression of LRIG1, and LRIG1 down-regulation could promote the proliferation of U251-MG cells, arrest U251-MG cells in S phase, and enhance the invasion of U251-MG cells.; 毛峰王宝峰席桂发孙伟张华楸叶飞郭东生雷霆; 关键词：GLIOMA PROLIFERATION INVASION

AQP-1在星形细胞瘤及瘤周水肿组织中的表达及其意义被引量：7: 2007年; 目的探讨人星形细胞瘤及瘤周水肿组织中水通道蛋白-1(AQP-1)的表达及其对瘤周水肿和肿瘤浸润性生长的影响。方法采用免疫组化SABC法,分析30例星形细胞瘤和瘤周水肿组织中AQP-1的表达。根据MRI结果,采用“多田公式”计算水肿指数(EI),并以EI评价肿瘤性水肿的程度。结果AQP-1在低(Ⅰ-Ⅱ级)、高级别(Ⅲ-Ⅳ级)星形细胞瘤中的表达积分光密度值分别为2.76±0.13和6.73±0.18,在对应瘤周水肿组织中分别为4.52±0.08和8.58±0.27,而在正常对照组中几乎无AQP-1表达,三组相较,差异显著(P<0.05)。EI值在低、高级别组分别为1.59±0.40、3.96±0.85,两组相较,差异显著(P<0.01)。星形细胞瘤、瘤周水肿组织中AQP-1的表达和肿瘤的EI值均呈正相关(P<0.01)。结论AQP-1在星形细胞瘤的侵袭性生长和肿瘤性水肿的发生中可能起重要作用。; 孟肖利陈劲草王正峰王宝峰李高义; 关键词：星形细胞瘤脑水肿水通道蛋白-1 水肿指数

国家自然科学基金(30500521)

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