国家自然科学基金(30500547)
- 作品数：15 被引量：28H指数：3
- 相关作者：张美霞严密张军军李娟娟吴静更多>>
- 相关机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目四川省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 内皮抑素对视网膜新生血管中血管内皮细胞生长因子表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察内皮抑素(endostatin,ES)对视网膜新生血管中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:通过缺氧的方法建立小鼠视网膜新生血管模型36只,随机分为高氧组及ES治疗组。ES治疗组小鼠在出氧箱后12,36h,玻璃体腔内注射ES1μL。另将生活在正常氧环境中的18只同龄小鼠作为正常对照。提取3组小鼠视网膜总RNA,通过RT-PCR方法定量检测VEGF在3组小鼠视网膜中的表达。结果:氧致视网膜病变视网膜中VEGF的表达升高,与正常对照组比较有统计学意义(高氧组与正常对照组比较P<0.05);ES作用后VEGF的表达减少,与给氧组比较有统计学意义(ES治疗组与高氧组比较P<0.05)。结论:ES作用机制可能是通过抑制VEGF mRNA基因的表达来抑制视网膜新生血管的形成。
- 吴静张美霞张军军严密
- 关键词：视网膜新生血管化内皮抑素疾病模型荧光定量聚合酶链反应
- 内皮抑素对视网膜新生血管中细胞骨架蛋白Tubulinβ mRNA表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察血管生成抑制因子内皮抑素(endostatin,ES)对视网膜新生血管中细胞骨架蛋白Tubulinβ mRNA表达的影响。方法试验分为高氧组、ES治疗组和对照组,每组18只新生C57BL/6小鼠。通过高氧的方法建立小鼠视网膜新生血管模型。ES治疗组小鼠分别于出氧箱后12 h、36 h随机选择一侧眼球玻璃体腔内注射1μg ES。对照组小鼠在正常氧环境中饲养。提取3组小鼠视网膜总RNA,通过实时荧光定量RT-PCR方法定量检测Tubulinβ mRNA在3组小鼠视网膜中的表达。结果RT-PCR结果显示氧致视网膜病变小鼠视网膜中Tubulinβ mRNA的表达升高,与正常对照组比较差异有统计学意义〔(5.34±1.35)vs(4.58±1.17)lg拷贝数/μg,P<0.05〕;ES作用后Tubulinβ mRNA的表达减少〔(3.44±0.96)lg拷贝数/μg〕,与高氧组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论ES可以抑制Tubulinβ mRNA在视网膜新生血管中的表达,这可能与ES抑制视网膜新生血管形成的机制有关。
- 段灵张美霞
- 关键词：视网膜新生血管化血管生成抑制剂内皮抑素细胞骨架蛋白实时荧光定量RT-PCR
- 光动力法诱导大鼠视网膜新生血管动物模型的建立被引量：2
- 2008年
- 目的:建立视网膜静脉阻塞诱导新生血管生成的动物模型,为视网膜新生血管性疾病的研究提供条件。方法:健康成年SD大鼠50只,常规麻醉后,尾静脉注射虎红,532nm激光光凝视网膜主要静脉,建立视网膜新生血管动物模型。光凝术后2wk,采用心内注射FITC-dextran,视网膜铺片法观察新生血管生成的情况。结果:光凝手术时,可见视网膜静脉内明显黑色血栓形成。光凝后第2d发现视网膜主要静脉迂曲粗大、可见栓塞引起出血。2wk后FITC-dextran心内灌注视网膜铺片显示光凝眼视网膜血管形态和分布发生明显改变,失去正常的放射状和网状结构,出现大量新生血管芽和新生血管枝,视网膜血管杂乱、荧光素渗漏。结论:成功的构建了光动力诱导视网膜静脉阻塞的动物模型,并使用FITC-dextran心内灌注视网膜铺片对视网膜血管进行造影,从整体显示视网膜血管和新生血管的形态。该模型稳定性和重复性好,是研究视网膜新生血管的较为理想的动物模型。
- 李娟娟张美霞
- 关键词：视网膜新生血管动物模型
- 腺病毒介导人内皮抑素感染视网膜色素上皮细胞的可行性研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨以腺病毒为载体对体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelial,hRPE)细胞进行人内皮抑素(human endostatin,hES)感染,获得高效表达hES转基因细胞的可行性。方法常规培养hRPE细胞,传代至第3～第5代后,应用携带有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的hES重组腺病毒按感染复数30进行感染。培养24h后,在荧光显微镜下计数培养的hRPE细胞的GFP表达阳性率;用免疫组织化学法观察hES在已感染hRPE细胞中的表达情况;提取hRPE细胞总RNA,采用RT-PCR技术对产物行琼脂糖凝胶电泳;用Western blot法检测感染hRPE细胞培养上清液中hES的表达水平。结果hES重组腺病毒感染后,hRPE细胞形态正常,感染后24h,GFP即呈100%表达,弥漫整个胞质;免疫组织化学法观察可见,hRPE细胞浆内呈棕黄色的阳性反应,而在感染空载腺病毒的对照组中细胞胞浆无染色;RT-PCR反应可见,细胞裂解产物中有hES阳性条带;Western blot法检测结果表明,培养上清液中有hES蛋白的表达。结论hES重组腺病毒载体能有效感染体外培养的hRPE细胞,并稳定表达hES蛋白。
- 张美霞吴静辛梅张军军闫乃红严密
- 关键词：视网膜色素上皮细胞腺病毒内皮抑素类
- Ras相关的C3肉毒毒素底物1的小发夹RNA干扰活性氧-核因子κB通路抑制小鼠视网膜新生血管生成被引量：3
- 2010年
- 目的 观察Ras相关的C3肉毒毒素底物1的小发夹RNA（Racl-shRNA）在小鼠氧致视网膜病变中对视网膜新生血管（RNV）生成的抑制作用及对活性氧（ROS）-核因子κB（NF-κB）通路的影响.方法 将108只7日龄C57BL/6J小鼠随机平均分为3组.其中2组Smith法建立氧致视网膜病变模型;11日龄时玻璃体腔注射Racl-shRNA表达质粒或无意义质粒,分别作为基因干预组和空白对照组.第3组于正常氧环境中饲养,11日龄时玻璃体腔注射Racl-shRNA表达质粒作为空白干预组.15、17日龄时行荧光视网膜铺片,观察视网膜血管发育及新生血管情况.17日龄时计数眼球切片中突破内界膜的血管内皮细胞核数.17日龄时进行原位杂交法和荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应法检测小鼠视网膜Racl和NF-κB p65亚单位的mRNA含量;免疫组织化学和蛋白质免疫印记检测Racl和NF-κB p65的蛋白表达.结果 基因干预组视网膜Racl的mRNA水平较空白对照组明显下调（t=4.500,P=0.001）.与空白对照组比较,基因干预组视网膜铺片中无灌注区、荧光渗漏和新生血管丛明显减轻,突破内界膜的血管内皮细胞核显著减少（t=6.521,P〈0.001）;视网膜NF-κB p65的核易位水平明显下降（t=16.008,P〈0.001）,同时mRNA表达亦明显下调（t=3.354,P=0.006）,与Racl mRNA表达呈正相关（r=0.580,P=0.012）.结论 小鼠玻璃体腔注射脂质体包裹的Racl-shRNA表达质粒可有效沉默视网膜Racl基因表达,阻断ROSNF-κB通路而参与抑制相对缺氧状态下RNV生成.
- 张雄泽张美霞马麟张军军闫乃红曹桂群严密
- 关键词：RACL
- RNA干扰在血管新生及其他眼科领域的研究进展被引量：1
- 2008年
- RNA干扰是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,其本质是siRNA与对应的mRNA特异结合、通过酶的作用使之降解从而阻止mRNA的翻译,引起生物细胞内同源基因特异性沉默。目前广泛应用于眼部新生血管及相关疾病的研究中,我们现将这一领域的应用作一综述。
- 李娟娟张军军张美霞
- 关键词：RNA干扰血管新生
- 叶黄素及玉米黄素与老年性黄斑变性的研究进展被引量：7
- 2009年
- 老年性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是目前使老年人视力缺损和致盲的主要疾病之一,其病因欠明,治疗效果不理想,预防亦不满意。AMD发生的危险因素及发病机制与其疾病的预防、治疗密切相关,流行病学调查的数据显示抗氧化剂在降低AMD的危险性中可能起了一定的作用,当前很多研究表明,叶黄素和玉米黄素作为抗氧化剂在降低AMD发生的危险性和延缓AMD疾病进程中起着重要作用。现将叶黄素及玉米黄素与AMD的研究概况综述如下。
- 吴静张美霞严密
- 关键词：叶黄素玉米黄素老年性黄斑变性
- siRNA靶向Rac1真核表达载体的构建与效应检测
- 2009年
- 目的构建、纯化并鉴定Rac1特异性siRNA的真核表达载体,并在HeLa细胞中初步检测其转染率及对Rac1基因的抑制率。方法体外合成含针对人、鼠的Rac1特异基因序列的siRNA链,定向克隆至pSUPER质粒中,对重组质粒进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析。将抽提的质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜观察转染效率,荧光定量RT-PCR法鉴定其抑制Rac1基因表达的效果。结果利用RNAi技术成功构建抑制Rac1表达的小干扰RNA重组载体,并成功转染到HeLa细胞中(载体转染率达到70%以上)。在mRNA水平对Rac1基因的表达产生明显抑制作用(抑制率为87%以上)。结论成功构建了针对Rac1的siRNA真核表达载体,为进一步研究Rac1的功能奠定了基础。
- 张美霞吴静辛梅李娟娟张军军严密
- 关键词：RNA干扰RAC1基因治疗
- 应用基因表达谱芯片研究内皮抑素作用后人脐静脉内皮细胞株基因表达的变化
- 2010年
- 目的 观察人脐静脉内皮细胞株（ECV304细胞）在内皮抑素（ES）作用前后基因表达谱的变化，并探讨其作用的分子机制。方法ES处理培养的ECV304细胞36h，抽提ES作用前后细胞mRNA，用Cy3和Cy5不同的荧光标记脱氧尿嘧啶核苷三磷酸（dUTP）逆转录制备cDNA探针，与载有4096条基因的基因芯片进行杂交，通过对Cy3、Cy5荧光信号扫描后，分析经ES处理前后基因水平表达差异。结果ES处理后细胞增生减慢，抽提RNA电泳18S、28S条带清晰，吸光度[A，旧称光密度（OD）]值为2．0-2．2。芯片扫描显示5．96％的检测基因出现明显表达差异，其中下调基因225条，上调基因19条。结论ECV304细胞经ES作用后部分基因表达呈下调趋势，可能与ES抑制新生血管生成机制有关。
- 杨获张美霞张军军严密
- 关键词：基因表达
- 人内皮抑素重组腺病毒的构建及其在人视网膜色素上皮细胞的表达被引量：3
- 2008年
- 目的观察构建的含人内皮抑素(human endostatn,hES)基因腺病毒载体对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheliaum,hRPE)细胞的感染及其基因表达情况,为眼内新生血管性疾病治疗提供一定的实验依据。方法原代培养hRPE细胞,行角蛋白免疫组织化学进行鉴定。从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrack CMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体,线性化后转染293细胞进行包装扩增。用该腺病毒感染hRPE细胞,应用荧光显微镜和Western blot检测病毒感染及外源基因的表达情况。结果角蛋白免疫组织化学显示所培养的细胞为hRPE细胞,感染24h后荧光显微镜下可见RPE细胞中有大量的绿色荧光蛋白表达,Western blot结果显示hES蛋白高表达。结论构建的hES腺病毒对hRPE具有极高的感染效率,可作为一种良好的基因导入载体,为ES基因治疗眼内新生血管性疾病的进一步研究奠定了基础。
- 张美霞张军军严密闫乃红
- 关键词：血管生成抑制剂内皮抑素视网膜色素上皮细胞免疫印记
