广东省科技计划工业攻关项目(A1090205)
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 相关作者：陈晓光吴昆支国舟李华彭鸿娟更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因 。
- 吴昆陈晓光支国舟
- 关键词：刚地弓形虫基因克隆大肠杆菌ROP2
- 弓形虫ROP2基因的体外扩增及真核表达重组质粒的构建被引量：10
- 2002年
- 目的 构建弓形虫棒状体蛋白2（POP2）基因真核表达重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列,设计合成一对引物,上、下游引物分别引入EcoRI、SalI酶切位点,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段,插入pGEX-4T-1质粒,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ROP2,而后经EcoR I、Not I双酶切出ROP2基因片段,再亚克隆到载体pcDNA3中构建真核表达重组质粒pcDNA3-ROP2。结果 ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子,克隆基因测序结果与已知序列基本吻合。结论 在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因并构建了真核表达质粒pcDNA3-ROP2,为下一步弓形虫DNA疫苗研究打下了基础。
- 吴昆陈晓光李华支国舟
- 关键词：弓形虫体外扩增真核表达重组质粒DNA疫苗
- 弓形虫ROP2基因的体外扩增及克隆被引量：1
- 2001年
- 目的 构建弓形虫棒状体蛋白 2 (ROP2 )基因重组质粒。方法 根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段 ,插入pGEX 4T 1质粒 ,转化大肠杆菌TG1感受态细胞 ,经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序。结果 ROP2基因体外扩增产物大小约 10 43bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论 在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究打下了基础。
- 吴昆陈晓光李华彭鸿娟
- 关键词：刚地弓形虫克隆PCR
