宁夏高等学校科学技术研究项目(2010)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：魏军张一琳张瑞芹徐广贤汤建中更多>>
- 相关机构：宁夏医科大学宁夏医科大学附属医院更多>>
- 发文基金：宁夏高等学校科学技术研究项目教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌优势蛋白ppe37的表达纯化以及对巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6 mRNA表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究在结核分枝杆菌感染过程中,ppe37蛋白引起的巨噬细胞免疫应答反应。方法利用本实验室已构建好的ppe37原核表达载体,将其转化到大肠杆菌E.coli BL21中,用IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE与Western blot鉴定后,利用Ni-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒对重组蛋白进行纯化并复性。利用SDS-PAGE和AlpHaImager 2200软件对纯化蛋白进行鉴定与分析。分别用浓度为100ng/mL、500ng/mL、5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激RAW264.7巨噬细胞,24h、48h、72h后,用Real-time PCR检测RAW264.7巨噬细胞NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达量的变化。结果 SDSPAGE鉴定显示,重组ppe37蛋白获得了大量表达,其相对分子质量约为50kDa。经Western Blot验证,重组ppe37蛋白可与抗His单抗发生特异性反应,经AlpHaImager 2200软件薄层扫描分析,重组蛋白的纯度为96.2%,并成功的进行了蛋白复性。浓度分别为100ng/mL,500ng/mL,5 000ng/mL的重组ppe37蛋白刺激巨噬细胞,24h后Real-Time PCR检测结果显示与空白对照组相比NF-κB、TNF-αmRNA的表达没有影响(P>0.05),而IL-6mRNA的表达上调(P<0.05);48h、72h后NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA的表达显著上调(P<0.05)。结论成功地制备并纯化了重组ppe37蛋白,重组ppe37蛋白能够活化巨噬细胞,激活细胞免疫反应,并促使巨噬细胞发生炎性反应。
- 张瑞芹汤建中赵志军贾伟魏军张一琳张兆波徐广贤
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达
- 2013年
- 目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。
- 张瑞芹汤建中贾伟魏军张一琳张一琳
- 关键词：结核分枝杆菌基因克隆原核表达
- 达英-35并联合二甲双胍治疗青春期PCOS疗效观察被引量：2
- 2011年
- 目的探讨达英-35并联合二甲双胍治疗青春期多囊卵巢综合征(PCOS)的疗效。方法选择患者87例,PCOS肥胖者和PCOS合并糖尿病、糖耐量异常或高胰岛素血症者给予达英-35联合二甲双胍治疗;PCOS无肥胖者、不合并糖尿病、糖耐量异常或高胰岛素血症者单用达英-35治疗,用药3个周期后观察治疗前后临床表现、性激素、瘦素等变化。结果治疗后月经恢复正常,痤疮、肥胖及多毛明显改善,血LH、T明显下降(P<0.01),瘦素明显降低(P<0.05)。结论采用达英-35并联合二甲双胍治疗PCOS可早期纠正内分泌紊乱,明显改善患者的症状。
- 王景罗艳胡蓉
- 关键词：青春期多囊卵巢综合征达英-35二甲双胍
