重庆市卫生局科研项目(2009-2-80)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：唐伟刘世学熊涛李家斌何云峰更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院绵阳市第三人民医院四川大学更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人精原干细胞分离、培养及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的采用两种酶两步法分离培养人睾丸精原干细胞。方法先后应用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化法,Percoll密度梯度离心,差异贴壁法,进行人精原干细胞的分离及培养;采用细胞免疫荧光法进行人精原干细胞的鉴定;流式细胞法对Oct-4标记阳性的细胞进行筛选,并同时检测所获精原干细胞的纯度,建立精原干细胞和支持细胞共培养体系。结果两种酶两步法消化的人睾丸细胞悬液活细胞率为91.07%,Percoll密度梯度离心结合差异贴壁离心纯化后的细胞经Oct-4细胞免疫荧光法检测表达阳性,流式细胞技术检测阳性细胞所占比例为86.7%,该阳性细胞能够在支持细胞饲养层上稳定生长30 d。结论所获Oct-4表达阳性细胞为精原干细胞。Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法是一种经济、简单易行、对细胞污染损伤少的分离培养人精原干细胞的方法,利用此方法分离的人精原干细胞能够在支持细胞饲养层上形成稳定集落。
- 刘世学唐伟熊涛
- 关键词：精原干细胞
- 支持细胞对体外培养精原干细胞的作用途径研究被引量：3
- 2010年
- 目的：探讨支持细胞对体外培养精原干细胞的作用途径。方法：选用7 d龄雄性昆明种小鼠,两步酶消化法获得睾丸组织细胞悬液,差异时间贴壁法分离精原干细胞和支持细胞,免疫荧光法和油红O染色法分别对其进行生物学鉴定,流式细胞仪对精原干细胞进行纯度分析。按培养条件的不同将实验分为3组：精原干细胞与支持细胞共培养组（A组）、条件培养基组（B组）、常规培养基组（C组）。其中条件培养基按单纯支持细胞培养清液∶双倍浓缩的DMEM/F12∶胎牛血清=4.5∶4.5∶1的比列配置;常规培养基即含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12。台盼蓝法测定各组贴壁率,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定各组精原干细胞的吸光度并绘制增殖曲线。倒置显微镜下观察各组精原干细胞增殖特点及集落形成情况。比较各组精原干细胞24 h贴壁率、增殖曲线及存活时间的不同。结果：A组精原干细胞24 h贴壁率大于B组及C组（P〈0.05）,而B、C组间无差异（P〉0.05）;A组精原干细胞接种起即稳定增殖,于7~10 d形成稳定集落并维持约30 d的特性。B组和C组均表现为精原干细胞经短暂的增殖后呈现快速减少的趋势,培养1周后,精原干细胞数目明显减少。结论：支持细胞对体外精原干细胞的作用是依靠两者之间的直接联系和支持细胞的旁分泌2种途径;而仅依靠支持细胞的旁分泌作用不能促进精原干细胞的贴壁和增殖。
- 熊涛唐伟刘世学何云峰唐紫薇李家斌
- 关键词：体外培养支持细胞精原干细胞
