国家自然科学基金(39970726)
- 作品数：5 被引量：19H指数：4
- 相关作者：王深明朱易凡王劲松叶洁莲更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多价阳离子脂质体介导重组基因pCKM-mPTH治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究被引量：5
- 2006年
- 目的探讨多价阳离子脂质体介导的pCKM-mPTH质粒治疗甲状旁腺功能低下症(HPT)的最佳方案。方法用DNaseⅠ敏感性试验测定脂质体对质粒的保护作用,用不同比例的脂质复合物及裸质粒进行体内外转染,收集细胞培养液和血清,采用放射免疫法测定其甲状旁腺激素(PTH)含量。结果脂质复合物比例为2∶1时,即对DNA有明显的保护作用;在体外转染实验中,复合物比例在3∶1时PTH表达量最高,为每24小时(16.4±4.8)pg/10 000细胞,而在此比例下pCKM-mPTH质粒达20μg/100μl时,模型体内PTH的血清浓度最高,为35.9 pg/m l±2.2 pg/m l。结论与裸质粒相比,多价阳离子脂质体更适宜于作为HPT基因治疗的非病毒载体,而其介导重组质粒pCKM-mPTH直接转染肌肉的良好效能取决于脂质复合物的构成比例和剂量。
- 朱易凡叶洁莲王深明
- 关键词：甲状旁腺功能减退症基因转移阳离子脂质体
- 前甲状旁腺激素原基因定点突变后转染体细胞产生甲状旁腺激素的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究对前甲状腺激素原基因进行定点突变,并转染体细胞产生成熟甲状旁腺激素.方法采用聚合酶链反应(PCR)定点突变技术,自组织基因组基因中扩增前甲状旁腺激素原的cDNA,并将野生型甲状旁腺激素编码第28位的密码子GTT突变为AGA,使N端28-31氨基酸变为Arg-Lys-Lys-Arg,成为furin酶的酶切位点;将获得的突变表达载体pcDNA3.1/mPTH通过脂质体法转染体外培养的293细胞,用放射免疫法测定表达水平.结果成功地获得突变型甲状旁腺激素原cDNA,293细胞转染突变表达载体后,每日培养液中甲状旁腺激素含量达28.34～52.64 pg/2.0×106细胞,远高于空载体转染的细胞培养液.结论利用PCR技术可获得突变型甲状旁腺激素原的cDNA,突变表达载体pcDNA3.1/mPTH能成功转染体细胞并产生甲状旁腺激素.
- 朱易凡王深明
- 关键词：甲状旁腺激素转染293细胞基因PCDNA3体细胞
- 甲状旁腺功能低下症基因治疗中重组表达体系pCKM-mPTH质粒的构建与表达被引量：5
- 2003年
- 目的 研究构建重组表达体系pCKM mPTH质粒 ,寻找甲状旁腺功能低下症的基因治疗途径。方法 采用重叠聚合酶链反应 (PCR)法、巢式PCR法及粘端连接法构建pCKM mPTH质粒 ,以脂质体转染骨骼肌细胞 ,用 β actin半定量和放免法分别测定其在细胞内外的表达。结果 嵌合基因pCKM mPTH质粒测序完全符合已知核苷酸序列 ,并完成定点突变 ,转染骨骼肌细胞后 ,β actin半定量法测得mPTH在细胞内成功高效表达 ,放免法测得 2 4h克隆细胞培养液中甲状旁腺激素蛋白的含量为 2 6 3 7ng/L。结论 成功构建了SD (SpragueDaw ley)大鼠重组基因表达体系 pCKM mPTH质粒 。
- 朱易凡王深明王劲松
- 关键词：甲状旁腺功能低下症基因治疗
- 甲状旁腺功能低下症治疗的现状和趋势被引量：6
- 2005年
- 王深明朱易凡
- 关键词：甲状旁腺功能低下症外科手术免疫原性
- 用重组表达体系pCKM-mPTH质粒治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究被引量：9
- 2004年
- 目的研究重组pCKMmPTH质粒在SD大鼠甲状旁腺功能低下症模型中的治疗作用。方法将30只SD大鼠随机分为3组,A组为正常组,肌肉注射生理盐水,B组、C组制作甲状旁腺功能低下症模型后,分别肌肉注射pcDNA31(+)空质粒和pCKMmPTH质粒。用放免法测定不同时间的血清甲状旁腺激素(PTH)浓度。结果动物模型在注射pCKMmPTH质粒后,其血清PTH浓度在近1个月内显著高于注射前及空质粒对照组,未观察到有甲状旁腺功能低下症的表现。结论应用pCKMmPTH质粒治疗SD大鼠的甲状旁腺功能低下症是有效的,对未来的临床应用研究有一定的指导意义。
- 王深明朱易凡王劲松
- 关键词：PTH甲状旁腺功能低下症质粒SD大鼠肌肉注射血清
