国家自然科学基金(39970717)
- 作品数：32 被引量：176H指数：10
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- 脓毒症后leptin对肠道功能的影响及对肝肾功能的保护作用被引量：9
- 2007年
- 目的:研究脓毒症对肝、肾功能及肠道相关酶活性的影响,探讨瘦素(leptin)在急性炎症反应中的作用。方法:建立小鼠盲肠结扎致脓毒症模型,采用96孔分光光度法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、尿酸(UA)和肠组织匀浆液中髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)等,同时以HE染色方法观察肠道组织病理学改变。结果:脓毒症后6 h,血清UA水平[(521.92±91.86)μmol/L]明显高于假手术组[(330.12±94.15)μmol/L],而12 h ALT[(83.55±40.44)U/L]和UA[(474.03±75.22)μmol/L]均高于假手术组[(66.23±16.80)U/L]和[(320.95±99.14)μmol/L]。采用腹腔内注射leptin(0.1 mg/kg)和吲哚美辛(2 mg/kg),12 h时ALT和UA水平均明显低于脓毒症组(P<0.05)。此外,伴有肠道组织MPO、GST、XOD和SOD活性的改变。结论:在脓毒症过程中,微量leptin体外注射可以发挥改善和稳定肝肾功能的明显作用,其机制可能同其影响肠道多种与自由基、巯基和嘌呤代谢相关酶的功能有关,而且吲哚美辛在一定程度上有类似的效应,但所用剂量明显高于leptin水平。
- 颜光涛薛辉林季郝秀华张凯王录焕
- 关键词：瘦素脓毒症过氧化物酶
- 瘦素保护脓毒症后肾功能及其机制的研究被引量：5
- 2006年
- 目的观察脓毒症对肾功能及相关酶活性的影响,探讨瘦素(Leptin)在急性炎症反应中的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术制备小鼠脓毒症模型,用分光光度法检测血尿酸(UA)以及肾组织匀浆液中髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)等4种与自由基合成、解毒和嘌呤生成代谢相关的酶活性;采用放射免疫分析法测定肾组织匀浆液中Leptin水平,同时观察肾组织病理学改变。结果腹腔内注射Leptin(0.08mg/kg)和消炎痛(8mg/kg)可分别降低脓毒症后12h时血清UA水平〔分别为(295.79±80.86)μmol/L和(281.78±46.35)μmol/L,脓毒症组为(474.03±75.22)μmol/L〕;Leptin保护组脓毒症后12h和消炎痛保护组脓毒症后6h肾组织Leptin水平〔分别为(196.00±134.30)μg/g和(169.30±132.00)μg/g〕亦显著高于脓毒症组〔(61.65±27.29)μg/g〕。而Leptin和消炎痛保护后6h和12h对肾组织MPO、GST、XOD和SOD等酶活性有不同程度的影响,但结果并非完全抑制或促进。从总体上分析,Leptin和消炎痛有促进氧自由基清除和灭活的功能。结论低剂量Leptin可能对脓毒症后肾功能有一定的改善作用,其机制可能同消炎痛相似,与清除和灭活肾组织中氧自由基有关。
- 颜光涛薛辉林季郝秀华张凯王录焕
- 关键词：瘦素脓毒症肾功能髓过氧化物酶免疫分析
- 白介素8酶联免疫分析方法及其初步应用被引量：1
- 2004年
- 建立高灵敏度和特异性的白介素 8(IL - 8)ELISA法。用人工重组的IL - 8多次免疫兔 ,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记 ,同辣根过氧化酶 (HRP)标记的亲和素可特异结合。采用纯化的抗体包被 96孔板 ,形成固相抗体。加入不同浓度标准品后 ,反应 1.5h ,洗净后再加入生物素标记抗体 ,以酶标记亲和素作为探针 ,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法测定范围为 0 .2 - 10 .8ng/mL ,最低测出值为0 .0 2ng/mL ,批内和批间CV小于 8%和 10 %。用该法测得 18名正常人血浆中IL - 8水平为 0 .15± 0 .0 6ng/mL。 18份高低不同浓度IL - 8水平的血清样品经本法和RIA测定其均值为 0 .5 4± 0 .35ng/mL和 0 .6 3±0 .5 9ng/mL ,相关性强 (r =0 .819,t=5 .89)。在U93 7细胞系体外培养液中 ,LPS刺激 2 4h和 4 8h可测出IL - 8水平明显上升 ;而经TNF -α刺激 2 4h和 4 8h后同对照没有明显变化。该方法操作简便 ,具有较强灵敏度和特异性 ,可满足人血清和细胞培养液中IL - 8水平的检测。
- 颜光涛薛辉郝秀华李振甲
- 关键词：IL-8白介素8酶联免疫分析特异性人血浆包被
- 白介素1β及其受体拮抗蛋白在肠缺血/再灌注诱导肺损伤中的作用和机理
- 2001年
- 目的:探讨肠缺血-再灌注(I/R)损伤时肺损伤的机理及白介素1β(IL-β)及其受体拮抗蛋白的作用。方法:采用大鼠肠系膜上动脉夹闭造成I/R损伤模型。利用放射免疫分析测定损伤前后和各处理组血液、肺组织灌注液中IL-1β和IL-1ra水平。同时采用RT-PCR法测定肺组织中IL-1β和IL-1ra的mRNA的表达含量。经光镜和电镜观察肺局部白细胞浸润及组织损伤情况。结果:I/R损伤后6小时血液中IL-1β和IL-1ra有所增加,即表现为损伤组IL-1β比对照组明显增加,而IL-1ra不明显;但IL-1ra的损伤组和对照组二者均在损伤后6小时比伤前自身对照组明显增加。肺组织灌洗液中损伤组IL-1β明显增多,而IL-1ra不明显。肺组织中IL-1β的mRNA在损伤后表达明显增加,而IL-1ra表达没有明显变化。经非特异性磷脂酶A_2(PLA_2)阻断剂(氯喹和三氟拉嗪),血小板活化因子受体阻断剂SR27417A,环氧化酶抑制剂消炎痛以及抗氧化剂愈创木酸等处理后,血清、肺灌注液和肺组织中上述指标有不同程度的改变。肺内白细胞的聚集和浸润明显减少。结论:IL-1β和IL-1ra可能参与肠I/R介导急性肺损伤,并且同局部PLA_2活化有一定关系。
- 颜光涛郝秀华薛辉王录焕李英丽石丽萍张凯
- 关键词：白介素1Β肺损伤肠缺血再灌注
- C反应蛋白酶联免疫分析和化学发光免疫分析的建立及其初步应用被引量：13
- 2004年
- 采用高纯度的C反应蛋白 (CRP)免疫兔 ,获取高效价的CRP抗体。提取抗血清中IgG ,包被酶标板。用生物素标记CRP抗原 ,辣根过氧化物酶标记亲和素 ,建立CRP的ELISA和化学发光免疫分析法 (CLIA)。用ELISA测定正常人 80名 ,心梗患者 4 3例和重症监护室 (ICU )病人 39例的血清CRP水平 ,发现心梗患者(2 7.2 1± 38.6 7μg/mL)明显高于正常人 (0 .5 7± 2 .99μg/mL) (P <0 .0 5 ) ;ICU病人 (117.4 8± 97.0 5 μg/mL)明显高于正常人及心梗患者 (P <0 .0 0 1和P <0 .0 1)。用CLIA检测正常人 6 8名 ,结果为 0 .77± 3.2 9μg/mL。随机收集病人血清样品 73份 ,分别用免疫比浊法、ELISA和CLIA检测 ,经统计三种方法高度相关。结果提示 :ELISA和CLIA是一种简便、灵敏和特异的CRP测定方法 ,可用于人血清中CRP的测定。
- 薛辉颜光涛张凯林季王录焕郝秀华张晓娟王晓辉
- 关键词：C反应蛋白酶联免疫分析法化学发光免疫分析法重症监护室
- 高灵敏orexin A放免法的建立及其对大鼠缺血再灌注的应用被引量：4
- 2003年
- 建立高灵敏orexinA放射免疫分析方法 (RIA) ,探讨肠缺血再灌注损伤对血浆及下丘脑orexinA水平的影响。采用氯胺T法制备碘标记orexinA ,抗原抗体反应采用平衡一步法 ,4℃温育 2 4h后 ,经PR试剂分离结合和游离的标记抗原 ,并用该方法测量正常人、高血脂患者血浆orexinA水平及大鼠肠缺血再灌注损伤后血浆及下丘脑组织中orexinA浓度的变化。结果表明 ,本方法测定orexinA标准曲线范围为 2 1 - 2 0 0 0 pg/mL ,最低检出量为 2 1 pg/mL ,批内和批间变异系数均小于 1 0 %。 30名正常人血浆orexinA水平为 338.4 8± 2 0 .2 4 pg/mL ,30例高血脂患者为 343.5 1± 1 5 .4 9pg/mL ;大鼠肠缺血再灌注损伤前后及不同损伤时间点orexinA的变化差异亦无显著性。本文提示orexinARIA方法灵敏度和特异性较高 ,可用于人血浆。
- 林季颜光涛郝秀华张凯王录焕薛辉
- 关键词：放射免疫分析缺血再灌注损伤
- 脂肪细胞补体相关蛋白Acrp30研究进展
- 2004年
- 脂肪细胞补体相关蛋白Acrp30是一种分子量为30kDa、由244个氨基酸组成的脂肪细胞特异性分泌的激素,gAcrp30是其球形亚基。Acrp30已被发现具有调节肌肉及肝脏脂类和糖代谢的作用,能够增加胰岛素敏感性、抑制糖异生、促进脂肪酸氧化以降低血糖。在肥胖、2型糖尿病、冠心病、高血压等诸多疾病中,血清Acrp30水平显著下降,提示体内应用Acrp30可能具有针对这些疾病的治疗作用。
- 林季颜光涛
- 关键词：糖代谢
- 肠缺血/再灌注损伤对leptin及orexin-A水平的影响
- 2006年
- 目的研究肠缺血/再灌注(I/R)损伤对外周血及中枢分泌组织leptin及orexin-A水平的影响,探讨leptin及orexin-A在急性炎症反应中的作用。方法建立大鼠肠I/R损伤模型,设立缺血60min后不同时间的再灌注损伤组。采用放射免疫分析法测量血清及脂肪组织leptin、血浆及下丘脑orexin-A蛋白水平的变化,并用逆转录-聚合酶链式反应法检测脂肪组织leptin、下丘脑orexin-AmRNA表达水平的变化。结果与损伤前自身对照相比,缺血60min/再灌注30min组(I60'R30')血清leptin显著降低,I60'R360'组显著增高。与损伤后假手术组(sham)相比,I60'R360'组血清Leptin水平显著增高。与损伤后sham组相比,I60'R30'、I60'R90'组脂肪leptin蛋白水平显著降低,I60'R360'组显著增高。与损伤后Sham组相比,I60'R30'、I60'R240'、I60'R360'组脂肪leptinmRNA表达显著增高,I60'R150'组显著降低。各组损伤前、后的血浆及下丘脑orexin-A蛋白水平无显著性差异。与损伤后sham组相比,I60'R30'、I60'R90'组下丘脑orexin-AmRNA表达逐步降低,I60'R150'组最低,I60'R240'、I60'R360'组逐步回升但仍低于sham组。结论Leptin及orexin-A对肠I/R损伤的应答具有时间依赖效应,leptin比orexin-A的应答较迅速,两者可能在急性炎症反应的能量代谢障碍中发挥一定的作用。
- 林季颜光涛高晓宁廖杰郝秀华张凯
- 关键词：缺血再灌注损伤LEPTINOREXIN-A放射免疫分析逆转录-聚合酶链式反应
- 转染反义磷脂酶A_2寡核苷酸抑制LPS诱导Hela细胞分泌IL-1β和IL-6
- 2003年
- 目的 :研究胞浆型磷脂酶A2 (cytosolicphospholipaseA2 ,cPLA2 ,85 kDPLA2 )在脂多糖诱导Hela细胞释放细胞因子IL 1β、IL 6的信号机制中的作用。 方法 :①利用脂质体将cPLA2 的反义寡核苷酸转染入Hela细胞 ,通过聚合酶链式反应(RT PCR)及Western杂交印迹分析检验胞浆中cPLA2 水平的变化 ;②用放免方法检测不同时间培养上清中的IL 1β、IL 6浓度。结果 :①转染后cPLA2 的蛋白表达明显减少 ,但mRNA水平未见显著改变 ;②Hela细胞释放IL 1β、IL 6随cPLA2 反义寡核苷酸浓度的增加而减少。结论 :cPLA2 在LPS刺激的Hela细胞释放炎性细胞因子IL 1β、IL 6的过程中可能发挥重要的信号传递作用。
- 王晓辉颜光涛郝秀华王录焕李英丽张凯薛辉
- 关键词：寡核苷酸IL-1Β
- 肝移植术后患者血清Leptin浓度变化及其意义被引量：2
- 2006年
- 探讨肝移植造成的肝缺血/再灌注损伤对血清Leptin水平的影响。收集切除全肝的恶性原发性肝癌和胆管癌患者血清,采用RIA和ELISA测定血清Leptin、C反应蛋白(CRP)和白细胞介素1β(IL1β)水平的变化。结果表明,与术前自身对照相比,术后即刻Leptin水平下降,经无肝期1h继续降低,新肝期1h达最低点,术后10h即恢复并高于术前(P<0.05)。CRP水平也呈相似变化,在新肝期1h达最低点,以后逐渐恢复至正常水平。血清IL1β水平也是先有降低趋势,术后10h恢复至正常。这提示肝移植后患者血清Leptin水平先降后升,与术前相比有显著性差异,伴有急性期CRP和IL1β的变化,说明Leptin在肝移植过程中发挥着重要作用。
- 颜光涛薛辉林季郝秀华张凯王录焕冯泽国
- 关键词：肝移植瘦素C-反应蛋白白细胞介素-1Β
