国家自然科学基金(30500507)
- 作品数：4 被引量：10H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件的鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的:寻找前列腺癌中L-plastin启动子的非甾体激素类顺式作用元件序列,并鉴定其相应的转录因子与调控途径.方法:在切除L-plastin启动子中甾体类激素受体位点并建立相应的荧光素酶重组子的基础上,利用外切酶行巢式切除法分段切除L-plastin启动子基因序列,并建立相应的荧光素酶重组子,检测切除各启动子序列片段后有雄激素刺激组和无雄激素刺激组的荧光素酶活性,寻找调控L-plastin表达的非甾体激素类启动子基因序列所在位置,通过Transfect软件分析寻找对应的转录因子,再通过定点突变技术切除转录因子的结合位点并进一步进行荧光素酶活性测定,从而获得调控L-plastin表达的非甾体激素类途径.结果:成功分段切除了L-plastin启动子,并建立了相应的荧光素酶重组子,转染细胞后在有及无双氢睾酮刺激下检测荧光素酶活性,发现在-206～1片段存在明显的非甾体激素受体类的调控途径,通过软件分析发现AP-4和SP-1可以与该片段结合.切除AP-4和SP-1位点后,荧光素酶活性下降,以AP-4尤为明显.结论:在L-plastin启动子中,除了甾体类激素受体途径,仍然存在其他非甾体类调控途径,该调控途径的结合位点主要在-206～1之间,可能是通过AP-4和SP-1与该片段的启动子基因序列结合来上调L-plastin基因表达的.
- 林天歆黄健黄海蔡清清许可慰尹心宝江春
- 关键词：前列腺癌L-PLASTIN荧光素酶转录因子
- 鉴定调控L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的转录因子SP-1被引量：3
- 2006年
- 目的:鉴定调控L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的转录因子,进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机理。方法:在鉴定L-plastin启动子近3’端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上,利用TFSEARCH软件分析该片段的序列,寻找调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,并检测切除该片段序列后荧光素酶活性变化。结果:TFSEARCH软件分析表明在距转录起始点-54--41bp处含有SP-1转录因子结合位点GGTGGGGCGGGGA,凝胶滞后实验和超滞后实验表明SP-1是结合于L-plastin启动子3’端该序列的转录因子,删除SP-1结合位点后荧光素酶活性下降。结论:SP-1是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。
- 林天歆黄健尹心宝许可慰叶枫李泗耀黄海江春
- 关键词：前列腺肿瘤启动子
- 鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中上调L-plastin表达的转录因子被引量：6
- 2006年
- 目的鉴定AP-4是在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的转录因子,进一步阐明非激素依赖型前列腺癌的发病机制。方法在鉴定L-plastin启动子近3′端-216到1序列片段存在明显的转录活性的基础上,利用TFSEARCH软件分析该片段的序列,寻找可能调控L-plastin表达的非甾体激素类转录因子,并用凝胶滞后实验和超滞后实验证实结合于该片段的转录因子,利用PCR定点突变法构建删除该转录因子结合位点的重组子,并检测切除该片段序列后荧光素酶活性,研究该转录因子在非激素依赖型前列腺癌中调控L-plastin表达的作用。结果TFSEARCH软件分析表明在距转录起始点-199～-194bp处含有AP-4转录因子结合位点CAGCTG,凝胶滞后实验和超滞后实验表明AP-4是结合于L-plastin启动子3′端序列CAGCTG的转录因子,删除AP-4结合位点后荧光素酶活性下降。结论AP-4是促进L-plastin在非激素依赖型前列腺癌中表达的重要调控因子。
- 林天歆黄健许可慰蔡清清李泗耀黄海尹心宝江春
- 关键词：前列腺癌L-PLASTIN转录因子
- 一个影响前列腺癌中L-plastin启动子转录活性的多态性位点的成功鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的研究已发现的前列腺癌中L-plastin启动子一个多态性位点对其转录活性的影响和意义。方法扩增前列腺癌细胞株LNCaP中L-plastin启动子序列,发现在距离转录起始点-1751上存在多态性位点T后,利用定点突变技术构建文献报道的启动子序列质粒(-1751C),测定含-1751T质粒和含-1751C质粒的荧光素酶活性。用巢式PCR扩增前列腺癌细胞株和癌组织中该位点序列,并进行单链构象多态性分析。结果成功构建L-plastin启动子,并发现一个位于-1751的多态性位点(C/T);成功构建启动子序列含-1751C质粒;荧光素酶活性测定表明(-1751C)质粒启动子转录活性为(-1751T)质粒的4~5倍,2者受到雄激素刺激后活性均升高;单链构象多态性分析表明该位点多态性普遍存在于前列腺癌患者和细胞株。结论鉴定了一个普遍存在于前列腺癌的L-plastin基因启动子的多态性位点,含有不同碱基位点的启动子的转录活性明显不同。
- 林天歆黄健蔡清清谢文练许可慰叶枫尹心宝胡明
- 关键词：前列腺肿瘤L-PLASTIN多态性位点
