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国家教育部博士点基金(20091202110001)

作品数:5 被引量:4H指数:1
相关作者:杨洁高星杰宋娟葛林朱梦瑜更多>>
相关机构:天津医科大学天津市第三中心医院更多>>
发文基金:国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 4篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 3篇蛋白
  • 3篇细胞
  • 2篇蛋白质
  • 2篇蛋白质类
  • 2篇质粒
  • 2篇融合蛋白
  • 2篇融合蛋白质类
  • 2篇重组融合蛋白
  • 2篇重组融合蛋白...
  • 2篇重组质粒
  • 2篇白质
  • 2篇P100
  • 1篇亚结构
  • 1篇应激
  • 1篇应激蛋白
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光标记
  • 1篇稳定细胞系
  • 1篇细胞系
  • 1篇细胞应激

机构

  • 4篇天津医科大学
  • 1篇天津市第三中...

作者

  • 4篇高星杰
  • 4篇杨洁
  • 3篇宋娟
  • 2篇钱宝鑫
  • 2篇朱梦瑜
  • 2篇葛林
  • 1篇尹洁
  • 1篇段中潮
  • 1篇丁建民
  • 1篇杨震霞
  • 1篇邵洁
  • 1篇黄丽
  • 1篇付雪
  • 1篇何津岩
  • 1篇付晓
  • 1篇姚智
  • 1篇王保亚
  • 1篇赵虹
  • 1篇经翔
  • 1篇张毅

传媒

  • 3篇天津医药
  • 1篇天津医科大学...
  • 1篇Cellul...

年份

  • 1篇2013
  • 1篇2012
  • 3篇2011
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1~4)的构建和表达
2011年
目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1~4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1~4)质粒构建及表达成功。
付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
关键词:发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达
2011年
目的:研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能,构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ一Ⅳ)。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增出目的基因,将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接,从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(I-IV)。将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)的cDNA片段;脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)。结论:真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)重组质粒构建及表达成功。
钱宝鑫高星杰朱梦瑜杨震霞宋娟段中潮邵洁杨洁
关键词:DNA结合蛋白质类质粒重组融合蛋白质类
多功能G3BP应激蛋白的红色及蓝色荧光标记
2013年
目的:分别构建含有樱桃红荧光蛋白和蓝色荧光蛋白(BFP)标签的应激蛋白G3BP表达质粒,实现活细胞内G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记。方法:以重组质粒pEGFP-C1-G3BP为模板,PCR法扩增出目的基因,分别利用EcoRI和BamHI双酶切法将目的片段连接到pmCheery-C1和pEBFP-N1载体上,再将构建成功的pmCheery-C1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦显微镜及Western印迹法检测红/蓝色荧光蛋白与目的蛋白G3BP的融合表达以及在活细胞内的共定位情况。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到红/蓝色融合蛋白的表达,共定位分析结果显示两者均可在HeLa细胞胞浆中形成应激颗粒。结论:pmCheery-C1-G3BP和pEBFP-N1-G3BP构建成功,对G3BP蛋白的红/蓝色荧光标记有助于进行其在细胞应激方面的机制研究。
高星杰葛林付雪张毅宋娟何津岩姚智杨洁
关键词:细胞应激重组质粒
Identification of p100 target promoters by chromatin immunoprecipitation-guided ligation and selection (ChIP-GLAS)被引量:3
2011年
The multifunctional protein p100 is a vital transcriptional regulator that increases gene transcription by forming a physical bridge between promoter-specific transcription factors and the basal transcription machinery.To identify potential signal transduction pathways in which human p100 acts as a coregulator and to find target promoter regions that may interact with p100,we performed a promoter microarray assay called chromatin immunoprecipitation-guided ligation and selection(ChIP-GLAS).From this assay,we determined that a set of promoter fragments,including several factors in the transforming growth factor beta(TGF-β)signaling pathway,exhibited interaction with p100.The ChIP-GLAS data were validated by RT-PCR assessing the mRNA expression of various factors in the TGF-b signaling pathway in cell lines.
Xin LiuLijie DongXuejun ZhangBaoya WangXinting WangHu LiJinyan HeLin GeXiang JingZhi YaoJie Yang
关键词:MICROARRAY
p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的HepG2稳定细胞系的构建被引量:1
2012年
目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定。将构建好的p100shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒。运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用Westernblot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果。结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株。慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90%以上细胞发出绿色荧光,Westernblot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系。
黄丽尹洁丁建民宋娟高星杰经翔杨洁
关键词:细胞系慢病毒载体HEPG2细胞系
共1页<1>
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