深圳市科技计划项目(201002069)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：杜静周薇邹德学陆红杨超更多>>
- 相关机构：北京大学深圳医院暨南大学第二临床医学院襄樊市中医医院更多>>
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- SIK2抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成的效应及机制被引量：3
- 2012年
- 目的探讨盐诱导基因(Salt Inducible Kinase 2,SIK2)对3T3-L1成熟脂肪细胞生脂的影响及其机制。方法利用小鼠SIK2重组腺病毒表达载体,转染3T3-L1成熟脂肪细胞,采用油红O染色提取法和RT-PCR,测定脂肪细胞生脂及其关键酶和转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA水平的变化。结果与未转染组和空载体转染组相比,SIK2转染组油红O染色提取的脂滴含量降低56%(P<0.05),脂肪合成相关酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC2)、脂肪酸合酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)、甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT)、二酰基甘油转酰酶1(DGAT1)的mRNA表达水平分别下降了31%、61%、57%、60%、52%(P<0.05),转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)mRNA的表达水平减少了28%(P<0.05)。结论 SIK2可抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成代谢,其机制可能与下调甘油三脂合成代谢关键酶及转录因子SREBP1的基因表达有关。
- 杜静杨超晏耀明陆红周薇邹德学
- 关键词：3T3-L1脂代谢腺病毒表达载体基因表达
- SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达被引量：1
- 2011年
- 目的构建特异性小鼠盐诱导基因(Salt induced kinase2,SIK2)的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过Real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达水平。结果纯化后的Ad-shRNA-SIK2重组腺病毒载体可特异下调成熟3T3-L1脂肪细胞SIK2 mRNA和SIK2蛋白的表达。结论干扰3T3-L1脂肪细胞SIK2表达的短发夹RNA重组腺病毒载体构建成功。
- 杜静杜玲宴耀明周薇陆红邹德学
- 关键词：腺病毒载体短发夹RNA3T3-L1脂肪细胞
