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浙江省自然科学基金(M303658)
浙江省自然科学基金(M303658)
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 相关作者：刘伟国杨小锋龚江标虞军郑学胜更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技厅重点资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脑源性神经营养因子和神经干细胞联合移植治疗大鼠重度颅脑损伤的研究被引量：8
- 2005年
- 目的研究重度颅脑损伤大鼠采用脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞联合移植与神经干细胞单独移植治疗后神经功能的恢复及神经干细胞分化为神经元的比例,并探讨其可能的机制。方法将实验大鼠随机分为4组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为BDNF和神经干细胞联合移植组(实验组),Ⅳ组为单独神经干细胞移植组(对照组),均制成大鼠重度颅脑损伤模型,分别行BDNF和神经干细胞联合移植或单独神经干细胞移植,对实验大鼠进行行为学观察,于伤后第2、5、8、11、14天抽取大鼠股静脉血测定一氧化氮(NO)含量,伤后2周处死大鼠后取脑组织行免疫组化染色观察。结果各实验组大鼠均较对照组神经功能恢复好(P<0.05或0.01),分化为神经元的比例较对照组高(P<0.05),NO的含量比对照组明显降低(P<0.01)。结论BDNF可能是通过降低损伤后NO的形成从而有利于移植的神经干细胞向神经元分化,BDNF和神经干细胞联合移植较单独神经干细胞移植对神经系统损伤有更好的治疗效果。
- 杨小锋虞军刘伟国龚江标沈宏
- 关键词：BDNF重度颅脑损伤神经干细胞用脑
- 突变型胸苷激酶对鼠C6胶质瘤细胞的杀伤效应
- 2009年
- 目的观察比较突变型单纯疱疹胸苷激酶（HSV1-sr39tk）／更昔洛韦（GCV）和野生型HSV1-tk／GCV对鼠C6胶质瘤细胞的杀伤效应。方法利用真核表达载体转染目的基因到C6细胞，RT—PCR鉴定。通过MTT实验和活体植瘤，比较各组对GCV敏感性。结果成功获得分别转染有HSV1-tk（C6／tk）和HSV-sr9tk（C6／sr9tk）的C6细胞。GCV浓度在0～400μmol／L时，C6／sr39tk细胞存活率由（99．96±3．54）％下降到（4．75±1．79）％；C6／tk细胞存活率从（100．03±2．95）％降至（59．16±3．48）％，未转染组细胞存活率则从（100．29±1．20）％到（83．62±7．56）％。同-GCV浓度时，各组间细胞存活率差异有统计学意义（P〈0．05）。各组细胞在活体均能致瘤，GCV治疗10d后，C6、C6／tk和C6／sr39tk组肿瘤大小分别为（1287．24±364．84）mm^3、（928．47±165．61）mm^3和（574．08±107．72）mm^3，较治疗前均有一定程度的生长，但后两组生长较前组明显减缓，以C6／sr39tk组生长减缓最明显。组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外和体内实验证实HSV1-sr39tk比HSV1-tk对GCV更敏感，可提高其与GCV所组成的自杀基因系统对C6胶质瘤细胞的杀伤效应。
- 徐晓燕刘伟国杨小锋郑学胜沈罡
- 关键词：神经胶质瘤自杀基因
- 大鼠胚胎神经干细胞的培养及分化的观察被引量：7
- 2005年
- 目的探索大鼠胚胎神经干细胞的培养、传代和冻存、复苏的方法,以及观察胚胎神经干细胞在自然条件下分化为神经元细胞和神经胶质细胞的过程。方法从胚胎大鼠脑组织中分离得到神经干细胞,采用无血清培养技术进行培养、传代和鉴定。诱导分化后采用SABC法对分化的细胞进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)检测以作细胞鉴定。结果成功培养出大鼠胚胎神经干细胞,并对其进行传代、冻存及复苏,培养的细胞能分化为神经元细胞和神经胶质细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞能在体外适宜的培养条件下进行长期的培养、传代及冻存、复苏,并具有多向分化潜能。
- 刘伟国虞军龚江标
- 关键词：大鼠胚胎分化神经胶质细胞传代神经元细胞
- 神经干细胞的体外培养及增强型绿色荧光蛋白基因转染研究被引量：1
- 2005年
- 目的探索大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)的体外培养,探讨NSCs作为基因靶细胞,以及逆转录病毒介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记NSCs的可行性。方法胚胎大鼠脑组织分离神经干细胞,无血清培养,免疫组织化学技术鉴定。用Lipofectin将pLEGFPN1逆转录病毒载体导入PA317包装细胞,用G418筛选获得抗性细胞克隆,扩增抗性细胞并收集病毒上清;病毒上清感染神经干细胞,用G418筛选,荧光显微镜下观察并挑选EGFP表达最强的克隆,并做免疫组化鉴定;进一步培养扩增,做传代细胞的分化鉴定。结果培养出大鼠胚胎神经干细胞。荧光显微镜下检测感染逆转录病毒的神经干细胞,以及免疫组化鉴定,均显示EGFP获得良好表达;而且感染细胞能够被诱导分化为神经元和神经胶质细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养;神经干细胞可直接作为基因靶细胞;利用逆转录病毒载体,建立稳定表达EGFP的神经干细胞系具有可行性,为进一步做标记细胞移植研究奠定基础。
- 刘伟国冯军峰杨小锋郑学胜
- 关键词：神经干细胞增强型绿色荧光蛋白逆转录病毒载体
