国家自然科学基金(30800609)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈谷闻盼盼曾小琳张旭秦春燕更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862金属蛋白酶活性的体外鉴定被引量：3
- 2012年
- 【目的】金属蛋白酶S2P在细菌中通过在膜切割转录调控因子、释放δ因子参与胁迫响应是跨膜信号转导的保守机制,但蓝细菌中S2P的功能还未被鉴定,故我们考察集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862的金属蛋白酶活性。【方法】以pET-30b(+)为载体,分别构建重组质粒pF0643和pF0862,在大肠杆菌BL21(CE3)中诱导表达并纯化Slr0643及Sll0862蛋白,以β-酪蛋白为底物检测重组蛋白的酶活性。【结果】体外酶活实验显示重组表达的Slr0643及Sll0862蛋白有内切蛋白酶活性,且其活性受金属螯合剂o-phenanthroline的抑制。体外酶活的鉴定结果为进一步研究Slr0643和Sll0862的体内酶活和生物学功能奠定了基础。【结论】集胞藻PCC6803中的S2P同源蛋白Slr0643及Sll0862具有金属蛋白酶活性。
- 秦春燕张旭陈谷
- 关键词：集胞藻PCC6803原核表达纯化
- 集胞藻PCC6803 EGY同源基因破坏突变体的构建及表型分析被引量：2
- 2009年
- 拟南芥中近来发现的定位于叶绿体的膜嵌合金属蛋白酶EGY1影响叶绿体发育与脂肪酸合成,经生物信息学分析,集胞藻PCC6803(Synechocystis sp.PCC6803)中slr0643、sll0862基因编码同源蛋白。【目的】为了鉴定这两个基因的功能,【方法】本文通过同源重组插入卡那霉素抗性基因、切断目的基因,分别构建了slr0643::km和sll0862::km两种突变体,检测突变体的生理生化表型。【结果】在30℃,20μE/m2s自养培养下,slr0643::km与野生型相比,早期生长速率相近,但77K叶绿素荧光显示,光合系统I含量降低,光合系统I与II的比率明显降低,光合电子传递链的全链速率仅为野生型的83%。电镜结果显示胞内膜系统完好。sll0862::km的形态、生长速率、光合系统I与II的比率以及内膜结构均与野生型无明显差异。【结论】可见在本实验条件下,生长早期,两个基因的功能有所不同,slr0643参与了光合系统的合成及光合作用的精细调控,而sll0862并不直接影响光合系统功能。研究结果为进一步阐明不同条件下集胞藻PCC6803中EGY基因家族各个成员的功能和作用机理奠定了基础。
- 钟罗宝陈谷任丹丹
- 关键词：集胞藻PCC6803同源基因突变体
- 集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白基因sll0862缺失突变株对热胁迫与氧化胁迫的响应被引量：4
- 2012年
- 原核生物中S2P参与应答外界环境刺激,然而行光合作用的蓝细菌-集胞藻PCC6803的S2P同源蛋白功能未知。【目的】考察集胞藻PCC6803中S2P同源蛋白sll0862是否参与外界环境刺激的应答。【方法】监测在高温和氧化胁迫的条件下sll0862基因缺失突变株与野生株在生长速率或存活率上的差异,利用水样调制叶绿素荧光仪(water-PAM,脉冲-振幅-调制叶绿素荧光仪)测量在高温和氧化胁迫的条件下突变株与野生株叶绿素荧光参数的差异,来考察其光合作用差异。【结果】sll0862突变株与野生株在正常的培养环境中生长速率并无差异,但是将sll0862突变株与野生株在48℃加热处理半小时后,sll0862突变株的存活率明显低于野生株。当初始OD730值为0.1的藻液中添加终浓度为1 mmol/L双氧水的时候,sll0862突变株的生长速率比野生株明显低,而且氧化胁迫条件下突变株与野生株的调制叶绿素荧光有差异。【结论】集胞藻PCC6803中sll0862基因的缺失导致突变体对高温与氧化胁迫响应出现缺陷,提示有功能的sll0862参与响应热和氧化胁迫。研究结果为进一步阐述S2P同源蛋白sll0862在集胞藻PCC6803中的功能奠定基础。
- 曾小琳闻盼盼陈谷
- 关键词：集胞藻PCC6803氧化胁迫热胁迫
