国家自然科学基金(31071791)
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 相关作者：李玉红陈鹏梁元凯林梓浩董从娟更多>>
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- 黄瓜CsERECTA基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：5
- 2016年
- ERECTA基因编码一个富含亮氨酸重复序列结构的丝/苏氨酸类受体蛋白激酶,参与调控植物器官的形态建成,在株型控制及抗逆方面也有重要作用。该研究通过构建带有maltose binding protein(MBP)标签的pET21a-CsERECTA融合蛋白原核表达载体,实现了在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的高效表达,并对诱导表达的温度、时间和IPTG浓度进行了优化。利用镍离子螯合层析纯化得到MBP-CsERECTA融合蛋白,再用rTEV蛋白酶对其进行酶切,得到CsERECTA蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体。结果表明,黄瓜CsERECTA蛋白以可溶和包涵体2种形式表达,低温有助于蛋白以可溶性形式大量存在。最佳诱导温度为23℃,诱导时间为6h,IPTG浓度为0.5mmol·L^(-1)。通过Western blot可检测到黄瓜内源的CsERECTA蛋白,说明制备的多可隆抗体具有较好的特异性。多克隆抗体的成功制备为进一步研究CsERECTA的功能奠定了基础。
- 王琪琦李玉红胡亮亮秦亚光赵子瑶陈鹏
- 关键词：黄瓜原核表达多克隆抗体
- 不同抗性的黄瓜幼苗对接种霜霉病菌的生理响应被引量：2
- 2012年
- 以黄瓜抗病品种"津春4号"和感病品种"长春密刺"为试材,在接种黄瓜霜霉病菌后0.5、1、2、4、7d对叶片的丙二醛(MDA)、可溶性糖、可溶性蛋白含量和乙烯释放量进行了检测,并分析了这些生理变化与黄瓜霜霉病抗性之间的关系。结果表明:抗病品种黄瓜叶片中MDA含量、乙烯释放量低于感病品种,而可溶性糖、可溶性蛋白含量则高于感病品种。表明抗病品种比感病品种具有更强的防御能力和抗膜脂过氧化能力。
- 李丽霞付镇芳贺会强李玉红
- 关键词：黄瓜霜霉病可溶性糖可溶性蛋白
- 黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳体系的建立被引量：3
- 2013年
- 【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系，为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种“长春密刺”幼苗叶片为材料，比较2种不同提取介质（CaClz和LiCl溶液）对细胞壁蛋白的提取效果，对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0．2mol／LCaCl。和3moI／LLiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白，选用17cmpH3～10NLIPG胶条和裂解液1I（7mol／L尿素、2mol／L硫脲、40g／LCHAPS、10g／LDTT和1mmol／LPMSF），上样量800μg，按聚焦程序I（20℃水化14h，100V30min，250V30min，500V30min，1000V1h，线性升压5h至10000V，10000V聚焦6．5h）聚焦后进行双向电泳分离和考马斯亮蓝G-250染色，可获得重复性好、分辨率高的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适合于黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学分析的双向电泳体系。
- 林梓浩李玉红董从娟陈鹏
- 关键词：黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳
- 黄瓜过敏性诱导反应蛋白基因(CsHIR1)原核表达及其多克隆抗体制备被引量：5
- 2014年
- 该试验用黄瓜霜霉菌侵染黄瓜幼苗,并通过PCR方法克隆其过敏性诱导反应蛋白(HIR)的基因CsHIR1,构建原核表达载体pET28a-CsHIR1,实现在大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)中的高效表达;对诱导表达的时间和IPTG的浓度进行了优化;利用钴离子螯合层析纯化了重组蛋白并制备高效价多克隆抗血清。结果表明:该黄瓜过敏性反应诱导蛋白以包涵体的形式表达,最佳诱导时间和IPTG浓度分别为4h和0.5mmol·L-1;经纯化,得到高纯度的分子量为34kD重组蛋白CsHIR1。Western blotting显示CsHIR1的抗体具有较好的特异性。原核表达体系的建立和多克隆抗体的制备为进一步研究CsHIR1基因在黄瓜中的功能奠定了基础。
- 毛双双李玉红周旋李万青陈菲帆程智慧陈鹏
- 关键词：黄瓜原核表达多克隆抗体
- 黄瓜叶片胞间隙几丁质酶与抗霜霉菌侵染关系的研究被引量：1
- 2011年
- 采用高抗霜霉病的‘津春4号’和易感霜霉病的‘长春密刺’黄瓜的温室穴盘幼苗为材料,研究了接种霜霉菌对黄瓜叶片胞间隙几丁质酶累积变化及幼苗生长的影响。结果显示:(1)与易感品种相比,抗病品种叶片胞间隙液蛋白浓度升高快、含量高;同时几丁质酶活性上升的速度快、幅度大,于接种后第2天达到峰值,且高活性维持至第7天;(2)SDS-PAGE电泳分析发现,抗病品种有一种27kD的酸性几丁质酶在接种后第2天迅速积累,并在接种后第4、7天呈现出较高的表达量;Western blotting的结果也证实了上述胞间隙几丁质酶积累的变化。(3)与未接种对照相比,接种处理后第4、7天,易感黄瓜幼苗鲜重、干物质积累量均出现显著降低,但在接种后第7天抗病品种的上述生长指标要显著高于易感病品种。研究表明,接种霜霉菌后,抗病黄瓜叶片胞间隙几丁质酶迅速累积且活性快速升高,以减轻霜霉病对幼苗生长的侵害,这可能是黄瓜抗霜霉菌侵染的一种防御机制。
- 梁元凯陈鹏李玉红
- 关键词：黄瓜霜霉菌几丁质酶
- 黄瓜叶片胞间隙蛋白质双向电泳体系的建立被引量：1
- 2013年
- 以黄瓜种质‘PI088’幼苗为材料,提取胞间隙液,制备蛋白样品,通过对不同IPG胶条、等电聚焦条件、分离胶浓度、上样量等条件的探索,建立适合黄瓜叶片胞间隙蛋白质组的双向电泳体系。结果显示:(1)用pH 3～10的非线性IPG胶条,等电聚焦时间为70 000Vh,分离胶浓度为10%,上样量为800μg时,能够得到较好的2-DE图谱。(2)利用所建立的双向电泳体系找到了对照及接种霜霉菌后2d的黄瓜叶片胞间隙差异蛋白,其中的12个上调表达点和10个下调表达点的表达量变化在1.5倍以上。并选取一个差异点成功进行了质谱分析。(3)质谱分析结果显示,所找的差异点为一种酸性的几丁质酶,等电点为4.27。可见,采用所建立的双向电泳体系可获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱并能很好地用于质谱分析。
- 董从娟李玉红林梓浩陈鹏
- 关键词：黄瓜叶片细胞间隙液双向电泳
- 乙烯利诱导黄瓜叶片胞间隙几丁质酶累积的变化被引量：5
- 2012年
- 以"津春4号"黄瓜为试材,研究喷施不同质量浓度乙烯利对黄瓜幼苗叶片胞间隙液几丁质酶的诱导积累及对幼苗生长的影响。结果显示,与对照相比,乙烯利处理后黄瓜叶片胞间隙液蛋白质量浓度增加;几丁质酶活性水平也随乙烯利处理质量浓度的增加出现不同幅度上升,其中,252mg/L的乙烯利对几丁质酶诱导作用最强;通过SDS-PAGE电泳,观察到252mg/L乙烯利处理后第1天,一种27.0ku几丁质酶在胞间隙积累,并在随后的取样时间显著表达。Western blotting分析进一步证实了上述结果。此外,与对照相比,质量浓度分别为126mg/L和252mg/L乙烯利处理后第7天,黄瓜幼苗株高增量显著降低,252mg/L处理的茎粗增量显著增加。乙烯利可以诱导黄瓜叶片胞间隙几丁质酶的累积,诱导的效果与黄瓜叶片对乙烯利质量浓度的感受直接相关。
- 梁元凯陈鹏李玉红
- 关键词：黄瓜乙烯利几丁质酶
- 黄瓜矮生基因(cp)的遗传分析和精细定位
- 目前生产上主栽的黄瓜品种大多节间长,植株高,使栽培群体的通风透光受到影响。因此,缩短黄瓜的节间长度,使其植株矮化,对于栽培生产具有重要的理论和实际意义。以黄瓜矮生材料P1308915(短节间)及蔓生品系P1249561(...
- 李玉红Yiqun Weng
- 关键词：黄瓜矮生基因
- 文献传递
- 高温处理防治黄瓜霜霉病的生理生化机制被引量：2
- 2012年
- 以黄瓜感病品种‘长春密刺’为试材,通过室内盆栽试验研究高温对已感染霜霉病菌的黄瓜幼苗生理生化特征的影响.结果显示:(1)在黄瓜幼苗接种霜霉菌后8h,用45℃高温处理90min防治效果最明显.(2)与只接种霜霉病菌的黄瓜幼苗相比,接种霜霉菌后进行高温处理可显著提高叶片叶绿素含量,降低丙二醛含量;与对照相比,接种霜霉菌后进行高温处理可显著提高叶片几丁质酶活性,Western blotting验证了几丁质酶的活性变化.(3)SDS-PAGE结果表明,霜霉菌侵染可诱导一种28kD蛋白表达,高温处理后28kD蛋白的表达量降低.研究结果表明高温处理可能在杀死病原菌的同时,还诱导黄瓜幼苗对霜霉病产生了部分抗性.
- 许艳孟焕文陈鹏李玉红
- 关键词：黄瓜霜霉病高温处理生理生化机制
