国家自然科学基金(31071775)
- 作品数：6 被引量：37H指数：4
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- 番茄红素生物合成调控基因工程研究进展
- 2015年
- 番茄红素对人体的健康有着至关重要的作用,在清楚高等植物类胡萝卜素生物合成代谢相关基因的基础上,利用生物工程手段调控上游基因的超表达和下游基因的沉默,以提高番茄红素的含量已取得了进展。
- 程珍霞胡海涛
- 关键词：番茄红素基因表达调控生物工程
- 密花胡颓子果实主要类胡萝卜素组分及含量分析被引量：14
- 2014年
- 【目的】胡颓子属植物牛奶子果实大量积累番茄红素,高达番茄的17倍,而该属中果实大、口感好的密花胡颓子果实中主要类胡萝卜素组分及含量尚不清楚。研究利用高效液相色谱法检测德甜密花胡颓子1号和2号2个品种的成熟果实中主要类胡萝卜素组分及含量。【方法】以甲醇∶氯仿=1∶2(v/v)提取果实中类胡萝卜素,高效液相色谱法(Agilent 1260)进行类胡萝卜素定性定量分析。色谱条件:YMC C30分析色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为A(100%甲醇)、B(含0.2%乙酸铵的80%甲醇)和C(甲基叔丁基醚),采用梯度洗脱,洗脱程序为0—6 min由95%A+5%B组成,7 min时梯度改变为80%A+5%B+15%C,12—32 min梯度改变为30%A+5%B+65%C,48—50 min梯度改变为95%A+5%B,维持该浓度至分析结束(60 min),流速为1 mL·min-1,柱温25℃,进样量20μL,检测波长450 nm。【结果】德甜密花胡颓子1号和2号2个品种的成熟果实均积累了大量的番茄红素和β-胡萝卜素,品种间的积累量存在差异。其中德甜密花胡颓子1号果实中β-胡萝卜素积累量达(231.84±16.00)μg·g-1DW,是目前已报道植物中β-胡萝卜素含量高的物种之一;德甜密花胡颓子2号品种果实中的番茄红素含量高达(1 054.10±29.19)μg·g-1DW,是番茄果实(150μg·g-1DW)的7倍。【结论】密花胡颓子果实中高积累番茄红素和β-胡萝卜素,是继牛奶子之后,在胡颓子属中发现的又一高积累特异类胡萝卜素的野生植物资源,为今后研究果实高积累番茄红素和β-胡萝卜素的分子机理提供了理想的研究材料。
- 胡海涛金晓琴成龙平杨莉陈建华番汝昌杨玲
- 关键词：番茄红素Β-胡萝卜素高效液相色谱
- 超表达牛奶子EutPDS提高番茄果实番茄红素含量被引量：4
- 2017年
- 【目的】牛奶子果实中富含番茄红素,八氢番茄红素脱氢酶(PDS)是番茄红素生物合成上游的重要酶。特异性超表达牛奶子Eut PDS基因(Gen Bank登录号:GQ254067),以期提高番茄果实中的番茄红素含量。【方法】通过RT-PCR方法从牛奶子果实中分离EutPDS基因cDNA及基因组全长,Southern杂交分析基因的拷贝数,专用软件分析此基因及蛋白结构。采用番茄2A11启动子构建果实特异性超表达载体,转化根瘤农杆菌GV3101后,借助农杆菌介导的叶盘法转化至‘中蔬四号’番茄。半定量RT-PCR检测转基因植株果实EutPDS基因的表达,高效液相色谱仪、实时定量PCR分别用于分析转基因番茄果实主要类胡萝卜素组分含量和内源类胡萝卜素代谢相关基因表达的变化。【结果】从牛奶子中克隆的EutPDS基因长度为1 920 bp,含有1 749 bp ORF。其基因组序列无内含子,单拷贝。EutPDS编码1个582个氨基酸的蛋白,该蛋白与其他植物PDS有很高的同源性,具有典型的二核苷酸结合域、类胡萝卜素结合域。采用农杆菌介导方法转化番茄叶盘,PCR检测,潮霉素筛选,成功获得了2个EutPDS转基因番茄株系,其果实颜色较对照更红。半定量分析显示外源EutPDS基因在转基因番茄果实中超表达,实时定量PCR分析表明番茄红素生物合成上游2个内源基因Sl PSY和Sl ZDS受影响显著上调,同时1个下游基因Sl LCY-e的表达则显著下调,使得转基因番茄果实中番茄红素含量为野生型的2倍,但β-胡萝卜素含量无显著变化。【结论】在番茄果实中特异性超表达牛奶子EutPDS基因可有效促进番茄果实中番茄红素的合成和积累。
- 程珍霞胡海涛杨莉王长春郭卫东杨玲
- 关键词：番茄番茄红素
- 牛奶子实时定量PCR分析中内参基因的评价与验证(英文)被引量：6
- 2015年
- 【目的】实时定量PCR结果的精确性在很大程度上取决于选择的内参基因的稳定性。通过评估候选管家基因的表达稳定性,筛选出用于牛奶子研究的最佳内参基因。【方法】设计简并引物从牛奶子中克隆12个潜在的内参基因片段,包括14-3-3、18S核糖体RNA(18SrRNA)、β-actin(Actin)、延长因子1-α(EF1-α)、真核起始因子4A(e IF4A)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、RNA聚合酶-Ⅱ(RPⅡ)、60S核糖体蛋白(RPL7)、翻译延长因子2(TEF2)、泛素连接酶E2(UBCE)、泛素(UBQ)和泛素延伸蛋白5(UBQ5)。采集牛奶子5个不同器官(根、茎、叶、花和红果)、4个成熟期的果实(绿果、黄果、深粉果和完全成熟的红果)、2种激素(脱落酸、赤霉素)处理4个时间点的绿果、热处理4个时间点的离体叶片、幼苗盐胁迫2个时间点的根茎叶,应用实时荧光定量PCR技术检测12个内参基因在各样品中的表达情况,采用基于CT值的ge Norm、Normfinder和Best Keeper及CT比较4种算法评价这些内参基因的稳定性,最终的排名则由Ref Finder算法产生。【结果】器官组稳定性好的前2位内参基因为UBCE和RPL7,果实成熟期组排名前2的为e IF4A和UBCE,激素处理组排名前2的为e IF4A和UBCE,非生物胁迫组排名前2的则为Actin和EF1-α,综合分析所有样品排名前3位的是e IF4A、RPL7和UBCE。分别用筛选出的稳定的e IF4A、RPL7、UBCE和不稳定的RPⅡ作为内参基因评价目的基因八氢番茄红素合成酶基因Eut Psy在果实成熟过程中的表达,结果显示分别以3个稳定的内参基因为单内参基因与以e IF4A同UBCE组合做内参基因所得到的结论一致,而RPⅡ给出的则不同。【结论】在应用荧光实时定量PCR技术研究牛奶子基因转录表达时,通常情况下e IF4A、RPL7和UBCE相对于其他9个候选内参基因更为可靠。研究结果为牛奶子及胡颓子属其他物种的基因表达分析奠定基础。
- 成龙平胡海涛郭卫东杨莉王长春杨玲
- 关键词：基因表达实时定量PCR内参基因
- 牛奶子相关研究概况被引量：10
- 2012年
- 牛奶子浑身是宝,是一种具有很高开发价值的野生植物资源。近年来,人们对牛奶子的研究越来越深入。从牛奶子果实的营养成分、空间分布、类胡萝卜素研究以及果实蛋白组学、果实品质研究和牛奶子开发价值及应用前景等方面介绍了牛奶子的研究概况,希望通过对牛奶子研究进行一系列的归纳综述,为更深入的研究提供便利。
- 苏日磊王涛胡海涛杨玲
- 关键词：营养成分类胡萝卜素蛋白组学
- 胡颓子属5种植物果实主要类胡萝卜素成分及含量被引量：8
- 2016年
- 利用高效液相色谱法对华东地区常见的胡颓子属(Elaeagnus)4种生态型的胡颓子(E.pungens)、2个变种的大叶胡颓子(E.macrophylla)、蔓胡颓子(E.glabra)、银果胡颓子(E.magna)和佘山胡颓子(E.argyi)9个样品成熟果实所含主要类胡萝卜素成分及含量进行了检测。结果表明,5种胡颓子属植物成熟果实中的主要类胡萝卜素成分为番茄红素,且在不同种间含量差异显著,含量最高的是浙江嵊州的胡颓子,其值为(259.89±26.22)μg·g^(-1)FW,最低的是佘山胡颓子,其含量为(91.19±7.74)μg·g^(-1)FW;其中4种生态型的胡颓子的番茄红素含量都较高。研究表明这5种胡颓子属植物果实富含番茄红素,是一类珍贵的天然番茄红素资源,具有较大的市场开发应用价值。研究结果为揭示果实高积累番茄红素的机理提供了理想的研究材料。
- 胡海涛程珍霞李玲艳陈建华杨玲
- 关键词：胡颓子属番茄红素高效液相色谱类胡萝卜素
