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国家自然科学基金(30000048): 作品数：25 被引量：92H指数：6; 相关作者：陈哲宇路长林鲁凯伍侯铁胜傅强更多>>; 相关机构：第二军医大学中国人民解放军第一军医大学青岛大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“优秀青年教师资助计划”更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

关于阿尔茨海默病的机制研究:Mint2基因在PC12细胞中的表达功能及其作用的初步研究: 2004年; 目的:获得高表达Mint2蛋白的PC12稳定表达株,观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响,深入研究阿尔茨海默病的发病机制。方法:用PCR方法将Mint2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1A,构建真核表达载体pcDNA3.1A-Mint2;采用脂质体lipofectamine2000介导,将重组载体转染入PC12细胞,G418筛选稳定克隆;用RT-PCR和Westernblot检测外源基因Mint2在PC12细胞中的转录及表达,并观察Mint2蛋白对PC12细胞形态的影响。结果:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-Mint2;并获得了稳定表达Mint2蛋白的PC12-Mint2基因工程细胞株;Mint2对PC12细胞具有明显的促分化和促胞体增大的神经营养作用。结论:Mint2可在PC12细胞中有效表达,目对PC12细胞形态有明显影响,这为进一步研究Mint2生物学功能及其作用机制奠定了基础。; 魏传银郑舟军陈雪红路长林王丽梅; 关键词：PC12细胞阿尔茨海默病真核表达载体基因 PCDNA3 亚克隆

大鼠GDNF基因的克隆表达及对PC12工程细胞的影响被引量：3: 2003年; 克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子 (glialcellline derivedneurotrophicfactor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响。从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GDNFcDNA。构建表达质粒pET GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导GDNF表达并在Ni2 + NTA柱上用一步复性法纯化和复性。把PCDNA3 0 GFRα1和pcDNA3 0 RET质粒双转染入PC12细胞 ,G4 18筛选稳定克隆 ,构建PC12工程细胞。用GDNF刺激工程细胞 ,3天后观察其存活和分化。大鼠GDNFcDNA的克隆与表达获得成功 ,纯化和复性的重组GDNF蛋白可显著增强PC12 GFRα1 RET工程细胞的存活和分化。初步明确GDNF诱导PC12工程细胞存活和分化是通过RET 依赖途径。; 王丽梅魏传垠陈雪红张磬陈哲宇丁达夫路长林; 关键词：GDNF基因神经营养因子基因表达

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠脊髓损伤后运动功能的影响被引量：7: 2002年; 目的:研究胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对大鼠脊髓损伤后后肢运动功能恢复的影响。方法:采用改良Nystr(?)m法后路压迫大鼠胸段脊髓造成损伤模型,经蛛网膜下腔置管局部连续给予NGF （10μg/d）或GDNF（10μg/d）1周,对照组给予生理盐水。伤后4周3组分别观测:①伤段脊髓残存组织面积;②采用斜板试验和运动功能评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况。结果:大鼠脊髓损伤后4～14d,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于NGF组和生理盐水对照组（P<0.05）。伤后28d GDNF组伤段残存脊髓组织面积大于对照组和NGF组（P<0.01）。结论:外源性GDNF能减少脊髓损伤后伤区的坏死、萎缩并促进大鼠后肢运动功能的早期恢复。; 鲁凯伍金大地陈哲宇曹莉侯铁胜傅强李明; 关键词：胶质细胞源性神经营养因子脊髓损伤

胶质细胞源性神经营养因子受体α1基因的克隆表达及其活性研究被引量：2: 2002年; 为了获得重组胶质细胞源性神经营养因子受体α1(glialcellline derivedneurotrophicfactorreceptoralpha1,GFRα1)并研究其生物学活性 ,从新生 4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA ,通过RT PCR方法 ,扩增出GFRα1cDNA .将GFRα1cDNA克隆至含T7启动子的质粒 pET 2 8a (+)中 ,构建表达质粒 pET GFRα1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,获得表达菌株BLGFRα1.表达菌株经 1mmol/LIPTG诱导 3～ 5h后 ,GFRα1蛋白表达 ,并形成包涵体 .凝胶自动扫描分析表明 ,GFRα1表达量占全菌总蛋白的 2 1 5 % ,用Ni2 + NTA树脂纯化和复性后 ,纯度达 90 %以上。; 王丽梅陈哲宇朱伟张磬黄爱军路长林何成; 关键词：克隆活性基因表达 PC12细胞

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用被引量：6: 2002年; 目的 :研究嗅鞘细胞 (OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法 :建立成年 SD大鼠脊髓 T8半横断损伤模型 ,将体外培养纯化的 OECs植入脊髓损伤处 ,同时局部应用 GDNF。采用斜板试验和 BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况 ,并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价 OECs和 GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果 :(1) OECs和 GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用 ,可促进脊髓下行传导束再生 ,肢体运动功能恢复。 (2 ) OECs和 GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强 ,高于 GDNF或 OECs单用组。结论 :联合应用 GDNF和 OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。; 曹莉叶俊丽刘丽陈菲陈哲宇李建红路长林何成; 关键词：嗅鞘细胞移植 GDNF 脊髓损伤胶质细胞源性神经营养因子皮质脊髓束

Sequence analysis and functional study of the Han Nationality glial cell line-derived neurotrophic factor transcript被引量：1: 2001年; Objective: To study the sequence and function of the glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) transcript in subjects of Han nationality. Methods: The Han nationality GDNF transcript was amplified by RT-PCR and expressed by baculovirus expression system. Biological activity of the expressed product was measured by the primary culture of midbrain dopaminergic neurons. Results: There only existed the shorter GDNF transcript of 555 bp in the Han nationality. The secretory expression product of the shorter transcript in insect cells promoted the survival and differentiation of dopaminergic neurons. Conclusion: It is found that there is a 78 bp deletion in the Han nationality GDNF transcript compared with the reported 633 bp GDNF transcript. The 78 bp deletion does not affect the secretory expression and biological activity of GDNF mature protein.; 陈哲宇黄爱军路长林吴祥甫何成; 关键词：神经胶质细胞 GDNF 神经营养因子生物学行为

重组ACTH(4-10)与GDNF融合蛋白及其生物活性研究被引量：1: 2001年; 通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可高效表达ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白 .用Ni2 + NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85 %以上 .纯化和复性的ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活 ,作用强于ACTH (4 10 )及GDNF蛋白 .; 陈哲宇张勇何成路长林吴祥甫; 关键词：融合蛋白基因表达

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓损伤后皮质脊髓束再生的保护作用被引量：4: 2002年; 目的 :观察外源性胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对大鼠损伤脊髓皮质脊髓束再生的影响。方法 :利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。蛛网膜下腔置管至损伤局部 ,连续 1周给予 GDNF。应用辣根过氧化物酶 (HRP)顺行追踪技术和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经中丝 (NF)免疫组化活性的变化来评价外源性 GDNF对伤区皮质脊髓束和轴突再生的影响。结果 :脊髓损伤后 4周 GDNF治疗组 GFAP表达较对照组明显减少 ,NF标记轴突数显著多于对照组 ,皮质脊髓束部分再生并通过损伤区至远端 0 .5 cm。结论 :外源性 GDNF局部给药能减少胶质细胞增生 ,促进脊髓损伤大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复。; 鲁凯伍陈哲宇侯铁胜傅强曹莉金大地; 关键词：脊髓损伤胶质细胞源性神经营养因子轴突神经再生

神经营养素受体p75^(NTR)介导的信号转导被引量：11: 2005年; 魏传银王丽梅陈雪红路长林耿美玉; 关键词：神经营养素 P75^NTR 信号转导

胶质细胞源性神经营养因子体内转基因治疗对脊髓运动神经元的保护作用被引量：4: 2002年; 目的研究脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)体内转基因对大鼠脊髓损伤(SCI)后脊髓前角运动神经元的保护作用.方法雄性SD大鼠50只随机均分为绿色荧光蛋白(GFP)组和GDNF组.采用改良Nystrom法制备大鼠脊髓急性压迫损伤模型,将脂质体DC-Chol和重组质粒pEGFP-GDNF cDNA混合后注入大鼠损伤脊髓.利用RT-PCR技术和荧光显微镜检测GDNF基因体内转染的表达;应用尼氏染色、酶组织化学染色方法观察SCI后伤区前角运动神经元存活的数目和胆碱酯酶(CHE)及酸性磷酸酶(ACP)的变化;采用斜板试验和BBB评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况.结果SCI后1周和4周GDNF在损伤局部有转录和蛋白水平高表达.SCI后第1、2、4周,GDNF组前角运动神经元存活数目(20.4±3.2、21.7±3.6、22.5±3.4)明显多于GFP组(16.8±2.8、17.3±2.7、18.2±3.2)(P＜0.05).SCI后第1、2周,GDNF组前角运动神经元中CHE平均灰度值(74.2±25.8,98.7±31.6)低于GFP组(98.5±32.2,134.6±45.2)(P＜0.01),ACP平均灰度值(84.5±32.6,79.5±28.4)高于GFP组(61.2±24.9,52.6±19.9)(P＜0.01).大鼠SCI后1～4周,GDNF治疗组后肢运动功能评分明显高于GFP对照组,两组间差异有显著性意义(P＜0.05).结论GDNF体内转基因能保护脊髓不完全性损伤后引起的神经元坏死和退变,促进大鼠后肢运动功能的恢复,提示阳离子脂质体介导GDNF体内转基因治疗SCI的方法是可行的.; 鲁凯伍陈哲宇侯铁胜傅强李明曹莉金大地; 关键词：神经生长因子转化生长因子Β 运动神经元

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