国家自然科学基金(31071782)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 华东葡萄抗白粉病VpMYBR1基因表达与功能分析被引量：6
- 2013年
- 【目的】从华东葡萄抗白粉病株系‘白河-35-1’中克隆VpMYBR1基因,并进行基因表达与功能分析,为揭示抗白粉病机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR和RACE技术克隆VpMYBR1基因cDNA全长序列,并利用半定量和定量RT-PCR技术进行不同器官和不同处理后的表达分析;通过花序浸染法转化拟南芥,对转基因及未转化对照植株抗白粉病鉴定、台盼蓝染色和抗病标记基因表达分析研究基因功能。【结果】VpMYBR1基因cDNA序列全长539 bp,有228 bp的完整开放阅读框,编码75个氨基酸,包含1个Sant/myb结构域,GenBank登录号为HQ284197;VpMYBR1基因在‘白河-35-1’不同器官中均有表达,且叶中的表达量最强,花序和果实中表达量最弱;VpMYBR1基因的表达在抗白粉病的华东葡萄‘白河-35-1’与感病的‘湖南-1’、抗病的毛葡萄‘商-24’叶片接种白粉菌6 h后达到最大值,而且在‘白河-35-1’中最高,达接种前的28倍。同样,VpMYBR1基因在SA、MeJA处理后的‘白河-35-1’中的表达量明显高于‘商-24’和‘湖南-1’;将VpMYBR1基因导入野生型拟南芥,提高了转基因株系的抗病性;台盼蓝染色和抗病标记基因表达分析表明,该基因可能通过过敏反应(hypersensitivereaction,HR)提高了转基因株系的抗病性。【结论】从华东葡萄克隆了VpMYBR1基因,基因表达及功能分析表明,该基因具有提高转基因植株白粉病抗性的功能。
- 侯鸿敏王浩殷向静闫琴王跃进王西平
- 关键词：华东葡萄白粉病功能分析
- 中国野生葡萄病原菌诱导响应VqSAP基因的克隆及表达分析被引量：2
- 2012年
- 【目的】为了验证SAP基因在葡萄抗病防御机制中的作用，【方法】在前期通过抑制消减杂交技术（SSH）获得中国野生葡萄毛葡萄株系‘商-24’衰老相关蛋白（SAP）基因EST序列的基础上，采用RT—PCR从毛葡萄‘商-24’中分离到SAP基因cDNA序列，并通过实时定量PCR和半定量PCR分析了SAP基因的表达特异性。【结果】序列分析表明该基因具有完整的的开放阅读框，序列长度为819bp，编码272个氨基酸残基，相对分子质量为30．56ku，等电点为8．78，将其命名为VqSAP。多重比较结果显示VqSAP基因与油棕、玉米、萱草、拟南芥、水稻等植物SAP基因的同源性为65％～74％。实时定量结果表明，在白粉菌诱导初期，抗病的毛葡萄株系‘商-24’和感病的华东葡萄株系‘湖南-1’VqSAP基因表达量均升高，这可能是因为它参与了病原菌诱导的细胞程序性死亡过程。水杨酸（SA）、茉莉酸甲酯（MeJA）、乙烯（Eth）处理表明衰老相关蛋白基因表达受激素分子调节，但在抗病和感病株系中基因的表达量有所差异。在嫩叶、嫩茎、花、果皮、卷须等不同葡萄组织中的表达表明VqSAP基因的表达具有空间差异性。【结论】这些结果暗示着VqSAP的表达响应病原菌侵染并受生物胁迫相关激素的调控，很有可能在葡萄防御病原菌侵染的机制中发挥重要作用。
- 牛姣张玉成郭荣荣王西平
- 关键词：毛葡萄克隆
- 华东葡萄转录因子VpSBP3基因原核表达、纯化及多克隆抗血清制备
- 2013年
- 【目的】制备华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)转录因子VpSBP3基因抗血清,为研究VpSBP3基因功能奠定基础。【方法】构建华东葡萄转录因子VpSBP3基因重组原核表达载体pGEX-VpSBP3,转化大肠杆菌(E.coli)Rosetta(DE3),以IPTG为诱导剂诱导目的融合蛋白的表达。切胶电透析回收诱导表达的VpSBP3融合蛋白免疫新西兰兔,制备VpSBP3抗血清。【结果】重组原核表达载体pGEX-VpSBP3在DE3中高效表达出了分子质量为68 kD的GSTVpSBP3融合蛋白。回收的目的融合蛋白免疫新西兰兔后得到了抗血清,经Western-Blot检测,抗血清的免疫-抗原反应良好。【结论】在27℃、0.7 mmol·L-1IPTG过夜培养的诱导条件下,融合蛋白GST-VpSBP3过量表达。免疫大白兔获得的血清特异性强,效价高,可用于VpSBP3基因功能分析。
- 王浩侯鸿敏殷向静宋军阳王西平
- 关键词：华东葡萄转录因子原核表达
